吲哚胺2，3-雙加氧酶的表達與宮頸癌發生和病理進程的關系研究

李華強　郭春芳　謝黎明

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吲哚胺2，3-雙加氧酶的表達與宮頸癌發生和病理進程的關系研究

李華強郭春芳謝黎明

【摘要】目的探討吲哚胺2，3-雙加氧酶(IDO)的表達情況與女性宮頸癌的發生與病理進程的相關性。方法

選取宮頸癌手術治療后的石鈉組織標本75例(宮頸癌組)，宮頸上皮瘤變Ⅰ級標本30例(CINⅠ級組)、宮頸上皮瘤變Ⅱ～Ⅲ級標本30例(CINⅡ～Ⅲ級組)、體檢收集的正常宮頸標本30例(正常組)，采用免疫組織化學法檢測各組樣本中的IDO陽性表達率，并追蹤觀察IDO表達與宮頸癌患者病理及生存與后的關系。結果宮頸癌組標本的IDO陽性表達率顯著的高于CINⅠ級組、CINⅡ～Ⅲ級組和正常組(P＜0.05) ; CINⅡ～Ⅲ級組IDO陽性表達率顯著的高于正常組(P＜0.05)。低分化宮頸癌患者、Ⅲ+Ⅳ期宮頸癌患者、發生淋巴結轉移的宮頸癌患者的IDO陽性率表達顯著的增高，IDO陽性表達與患者的分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移具有一定的關系(P＜0.05)。經過36個月的隨訪，IDO陽性表達53例患者中有7例死亡、2例失訪，IDO陰性表達患者22例中有3例死亡，1例失訪，IDO表達陽性與陰性患者的3年病死率差異無統計學意義(P＞0.05) ; IDO陰性表達患者的3年生存中位時間35.4個月與IDO陽性表達患者的34.2個月差異無統計學意義(P＞0.05)。結論IDO在宮頸癌組織中高表達，與宮頸癌的分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移具有一定的關系，與患者的3年生存預后關系不顯著，需進一步延長隨訪時間進行觀察。

【關鍵詞】吲哚胺2，3-雙加氧酶;宮頸癌;病理進程

作者單位: 401320重慶市巴南區人民醫院病理科(李華強、郭春芳)，婦科(謝黎明)

宮頸癌為近年來嚴重威脅已婚女性生命健康的重要生殖系統惡性腫瘤，隨著宮頸常規篩查的普及，宮頸癌的臨床檢出率逐年升高。相關基礎領域研究證實，宮頸上皮局部組織的免疫調節異?？赡茱@著參與到了宮頸上皮來源惡性腫瘤的發生發展過程［1］。吲哚胺2，3-雙加氧酶(IDO)于1963年首次于兔子腸道中發現，并被證實與多種自身免疫性疾病、移植免疫、腫瘤免疫以及母胎免疫耐受相關［2，3］，部分學者認為IDO在宮頸癌的發生發展過程中參與到了腫瘤細胞免疫逃逸等過程［4］，但迄今無明確臨床研究證實。本次研究重在分析IDO的表達情況與女性宮頸癌的發生與病理進程的相關性，報告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取我院婦科收集的宮頸癌手術治療后的石蠟組織標本75例(宮頸癌組)，宮頸上皮瘤變Ⅰ級標本30例(CINⅠ級組)、宮頸上皮瘤變Ⅱ～Ⅲ級標本30例(CINⅡ～Ⅲ級組)、體檢收集的正常宮頸標本30例(正常組)。宮頸癌組75例患者，年齡33～69歲，平均年齡(48.5±10.6)歲;鱗癌67例、腺癌8 例;國際婦產聯盟(FIGO)分期:Ⅰ期31例、Ⅱ期20例、Ⅲ期17例、Ⅳ期7例;淋巴結轉移17例、未發生淋巴結轉移58例。CINⅠ級組30例患者，年齡30～68歲，平均年齡(46.3±9.6)歲。CINⅡ～Ⅲ級組30例患者，年齡29～65歲，平均年齡(47.5±10.4)歲。正常組30例，年齡26～63歲，平均年齡(45.2±10.5)歲。4組標本的年齡構成差異無統計學意義(P＜0.05)。

1.2納入與排除標準

1.2.1納入標準:①宮頸癌患者、宮頸上皮瘤變患者的診斷均經過手術后病理標本檢查證實;②正常組標本來自于我院女性體檢取活組織標本經病理學檢查證實為正常宮頸組織;③宮頸癌患者、宮頸上皮瘤變患者術前未接受相關治療;④對宮頸癌患者進行了隨訪觀察。

1.2.2排除標準:①合并其他部位腫瘤的患者;②術前接受過放療、化療的宮頸癌患者。

1.3實驗方法標本放置于90℃烤箱中烘烤25 min，二甲苯溶液浸泡2次，5 min/次，采用不同濃度的乙醇水化后PBS洗滌3次，5 min/次，過氧化氫溶液室溫孵育10 min，檸檬酸緩沖鹽進行熱抗原修復，之后分別加入一抗和二抗(抗體均采用PBS緩沖液1∶100稀釋配置，一抗以及二抗均購自南京凱基生物科技有限公司)。DAB顯色后，采用蘇木素復染、脫水、透明、封片，顯微鏡下觀察。

1.4免疫組織化學法結果判定標準免疫組織化學法的結果判定標準，IOD陽性表達為細胞質內棕黃色顆粒，按照著色強度進行分級，無色: 0分;淡黃色: 1 分;棕黃色:2分，褐色:3分;顯微鏡下染色陽性細胞計數:＜5%:0分;5%～29%: 1分; 30%～70%: 2分;＞ 70%:3分;兩個得分項目相加為最終評分，(－)為總分0～1分，陰性表達; (+)為2～3分，弱陽性表達; (++)為4～5分，中陽性表達; (+++)為6分，強陽性表達。陽性表達=弱陽性+中陽性+強陽性。

2　結果

2.1不同組別標本中IDO陽性表達率比較宮頸癌組標本的IDO陽性表達率(62.67%)顯著高于CINⅠ級組、CINⅡ～Ⅲ級組和正常組(P＜0.05) ; CINⅡ～Ⅲ級組IDO陽性表達率顯著高于正常組(P＜0.05)。見表1。

表1　不同組別標本中IDO陽性表達率比較　例

2.2宮頸癌患者IDO陽性表達與患者的臨床病理特征關系低分化宮頸癌患者、Ⅲ+Ⅳ期宮頸癌患者、發生淋巴結轉移的宮頸癌患者的IDO陽性率表達顯著的增高，IDO陽性表達與患者的分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移具有一定的關系(P＜0.05)。見表2。

表2　宮頸癌患者IDO陽性表達與患者的臨床病理特征關系例

2.3宮頸癌患者的3年隨訪情況經過36個月的隨訪，IDO陽性表達53例患者中有死亡7例、失訪2例，IDO陰性表達患者22例中有死亡3例，失訪1例，IDO表達陽性與陰性患者的3年病死率差異無統計學意義(P＞0.05)。IDO陰性表達患者的3年生存中位時間35.4個月與IDO陽性表達患者的34.2個月差異無統計學意義(χ2=1.084，P＞0.05)。見表3，圖1。

表3　IDO表達陽性、陰性患者的3年生存率比較　例(%)

圖1　IDO表達陽性、陰性患者的3年生存函數圖

3　討論

宮頸癌為嚴重威脅女性生命健康的疾病，每年死于宮頸癌的病例可達30萬人，多年來基礎領域研究以及臨床分析研究均在試圖尋找宮頸癌的發生機制，進而為臨床治療提供理論基礎，然而迄今為止尚無重大發現，但在此過程中部分學者發現，宮頸局部上皮組織微環境中的免疫調節平衡的打破可能為宮頸癌的早期發生發展提供了有利條件，認為腫瘤微環境的改變以及部分細胞因子導致的促免疫逃逸是宮頸癌的重要病因［5，6］。既往研究認為IDO主要分布于子宮內膜腺體和表面上皮細胞、螺旋動脈以及毛細血管內皮［5］，而近年來相關學者進一步研究后發現，IDO在宮頸腺體間質以及輸卵管上皮內均存在不同程度的表達，隨著對于IDO的免疫逃逸機制的研究的深入，部分研究者發現IDO在宮頸癌鱗狀上皮細胞內存在一定程度的表達［4，7］，但并無組織學以及臨床分析研究證實，本次研究重在分析IDO的表達情況與女性宮頸癌的發生與病理進程的相關性，進而為宮頸癌的免疫治療提供一定的理論基礎。

筆者發現，不同組別標本中IDO陽性表達率存在明顯差異，宮頸癌組標本的IDO陽性表達率顯著高于宮頸CIN組，而宮頸CIN的病例其IDO的陽性表達率明顯高于正常對照宮頸組織，提示IDO隨著宮頸病變程度的加深，其陽性表達水平顯著增加，部分研究者分析認為，腫瘤細胞刺激巨噬細胞和樹突細胞后，可以產生IDO進而改變局部色氨酸以及其代謝產物的濃度，并抑制T細胞的腫瘤抗原的特異性克隆增殖［6，8］，提示宮頸病變組織通過表達IDO來抑制T細胞的腫瘤殺傷性作用，協助腫瘤細胞逃脫免疫監察、促進細胞增殖和侵襲轉移［9］;筆者對于宮頸癌患者IDO陽性表達與患者的臨床病理特征關系也證實了這一點，低度分化、中晚期期宮頸癌、發生淋巴結轉移的患者，其IDO表達陽性率明顯增加，在此過程中，溶細胞性T淋巴細胞相關抗原與DC細胞表明的B7受體相結合，通過色氨酸的耗竭來抑制CD8+T淋巴細胞的增殖，進而發揮負性免疫調節作用，誘導其對于局部宮頸上皮環境的免疫耐受能力［10］。Ferns等［11，12］研究也發現，在發生腹主動脈旁淋巴結以及髂總淋巴結轉移的宮頸癌患者中，IDO的表達與淋巴結轉移具有較好的一致性，同時其在中晚期宮頸癌患者特別是ⅡB期以后的患者，IDO的陽性表達水平的增高能在一定程度上預測患者遠期臨床預后。但筆者發現本次臨床研究中相關隨訪結果并未提示IDO具有明顯的預后價值，IDO陽性組以及IDO陰性組的3年病死率差異無統計學意義(P＞0.05)，同時其術后生存時間也并無明顯差異，提示相關結論仍需要進一步證實。

IDO在宮頸癌組織中高表達，與宮頸癌的分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移具有一定的關系，表明IDO可能顯著參與到了宮頸癌的發生發展過程，對于IDO在宮頸癌發生發展過程中的免疫耐受以及免疫逃逸的研究，將可能為宮頸癌的免疫治療提供新的思路。

參考文獻

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3王冬冬，王曉黎，林蓓.IDO基因轉染對裸鼠體內宮頸癌種植瘤生長的影響.中國醫科大學學報，2012，41:201-203.

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9 Kojima S，Kawana K，Tomio K，et al.The prevalence of cervical regulatory T cells in HPV-related cervical intraepithelial neoplasia (CIN) correlates inversely with spontaneous regression of CIN.Am J Reprod Immunol，2013，69:134-141.

10陳琬玲，杜美翠，師娟，等.宮頸癌組織中IDO表達與外周血中T細胞亞群的相關性研究.武警后勤學院學報(醫學版)，2014，17: 18-22.

11Ferns DM，Kema IP，Buist MR，et al.Indoleamine-2，3-dioxygenase (IDO) metabolic activity is detrimental for cervical cancer patient survival.Oncoimmunology，2015，4:81-87.

12 Hibbitts S.TA-CIN，a vaccine incorporating a recombinant HPV fusion protein (HPV16 L2E6E7) for the potential treatment of HPV16-associated genital diseases.Curr Opin Mol Ther，2010，12:598-606.

·論著·

Study on the correlation between the expression of indolakylamine 2，3 dioxygenase and the pathogenesis and pathological process of cervical cancer

LI Huaqiang，GUO Chunfang，XIE Liming.
People’s Hospital of Ba’nan District， Chongqing City，Chongqin 401320，China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the correlation between the expression of indolakylamine 2，3 dioxygenase (IDO) and the pathogenesis and pathological process of cervical cancer.Methods Seventy－five cases of stone sodium tissue specimens after cervical cancer surgery (cervical cancer group) were collected in Department of Gynaecology and Obstetrics of our hospital，and 30 cases of cervical intraepithelial neoplasia class I (CIN gradeⅠgroup)，30 cases of cervical intraepithelial neoplasia classⅡ～Ⅲ(CIN gradeⅡ～Ⅲgroup)，30 cases of normal cervical tissues (control group)，were collected in the study.The positive expression rates of IDO were detected by immunohistochemical method in all the groups，moreover，the correlation between the expression of IDO and pathological process of cervical cancer，survivorship and prognosis of patients was analyzed.Results The positive expression rates of IDO in cervical cancer group were significantly higher than those in CIN gradeⅠgroup，CIN gradeⅡ～Ⅲgroup，control group (P＜0.05).The positive expression rates of IDO inⅡ～Ⅲgroup were significantly higher than those in control group (P＜0.05).The positive expression rates of IDO in patients with poorly differentiated cervical cancer，patients withⅢ+Ⅳstage cervical cancer，patients with lymph node metastasis，were obviously increased，furthermore，the positive expression rates of IDO were closely correlated to the differentiation degree of cervical cancer，FIGO staging and lymph node metastasis (P＜0.05).After 36－month follow up，among 53 patients with positive expression of IDO，7 patients died and 2 patients were failure to follow up，among 22 patients with negative expression of IDO，3 patients died and 1 patient was failure to follow up.There was no significant difference in 3－year mortality between patients with positive expression of IDO and patients with negative expression of IDO (P＞0.05).The 3－year survival neutral time in patients with negative expression was 35.4 months，which in patients with positive expression of IDO was 34.2 months，there was no significant difference between them (P＞0.05).ConclusionThe high－expression of IDO is observed in cervical cancer，which is correlated to differentiation degree of cervical cancer，FIGO staging，lymph node metastasis at certain extent，however，which is not related with 3－year survival prognosis of patients，it is need to lengthen follow up time to observe further.

【Key words】indolakylamine 2，3 dioxygenase; cervical carcinoma; pathological process

(收稿日期:2015－09－25)

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2016.05.003

【中圖分類號】R 711.74

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002－7386(2016) 05－0653－03