卡尤迪生物：以快、準、易為技術核心

張華勇

針對食源性微生物污染引起的食品安全問題，卡尤迪生物為業界帶來了前沿的技術支持，和優良的解決方案。為此，《食品安全導刊》記者采訪了卡尤迪生物科技有限公司副總經理單長輝先生。

記者：國內食品微生物檢測現狀如何？都有哪些檢測技術？

單長輝：在國內，食品受到食源性微生物污染現象比較嚴重，食源性致病菌對人體造成傷害甚至死亡，而且近年來微生物引起的食品安全問題呈逐年遞增態勢，廣大老百姓及政府部門對此也十分關注，一旦發生食源性微生物污染事件對食品企業的信譽和形象都會產生不利的影響，公眾對政府部門處置的能力也會產生質疑。目前檢測方法主要分為傳統的微生物培養方法和以金標、酶免和PCR為代表的快速檢測方法。

記者：食品微生物檢測，卡尤迪有何好的解決方案？

單長輝：由卡尤迪獨創的“一步法”免核酸提取熒光定量PCR技術平臺針對于各種食源性細菌和病毒，如大腸桿菌O175、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、李斯特菌、彎曲菌、諾如病毒等可以進行快速，準確的鑒定。利用卡尤迪“一步法”實時熒光定量PCR系統可以在大型實驗室、基層實驗室、現場進行食品病原微生物核酸檢測，其特點是不需要核酸提取步驟，靈敏度高。在不增菌的情況下直接檢測牛奶、雞蛋、肉類等食品中病原微生物，靈敏度可達102 cfu/mL，符合相關行業標準。對于國標中不得檢出的微生物，可以利用市售快速增菌培養基進行4～6小時的增菌過程，增菌過后直接檢測，可以達到相關要求。在食品微生物檢測中通常是定性檢測，卡尤迪“一步法” 實時熒光定量既可以進行定性檢測，又可以通過與標準品對比做到絕對定量與相對定量，定量范圍在檢出限102 cfu/mL以上。

記者：Mini8實時熒光定量PCR儀基于何原理快檢？

單長輝：基于的是熒光定量PCR的原理，PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時， 探針結合在DNA任意一條單鏈上；PCR擴增時，Taq酶的5端-3端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。理論上只要加樣的樣本中有一個致病微生物便可以被檢測出來，具有極高的靈敏度，這就大大縮短了前增菌的時間，可以在4個小時左右達到國標不得檢出的標準。PCR是聚合酶鏈式反應，是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。理論上只需要有1個DNA分子就可以在1個小時的時間內擴增到數以億記的DNA分子，我們使用的熒光定量PCR是在PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時， 探針結合在DNA任意一條單鏈上；PCR擴增時，Taq酶的5端-3端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號。這樣加入Taqman探針的熒光定量PCR具有極高的特異性，產生假陽性的幾率非常之低，保證了檢測的準確性。

記者：PCR儀相比同類產品有何亮點和競爭力？

單長輝：PCR的方法相對于傳統的培養方法和快檢中的酶免金標等方法具有速度快、準確性高的特點，由于PCR所檢測的是微生物的核酸，而且能在1小時內大量擴增檢測，這是其他方法所做不到的，傳統的培養方法時間往往需要2～3天，而酶免等方法也需要1天的時間，PCR方法在4～6個小時內完成檢測，時間上具有很大優勢。在準確性上由于PCR方法檢測DNA片段的引物探針具有極高的特異性，在檢測的準確性上也要高于酶免金標等方法。

記者：Mini8實時熒光定量PCR儀有何特點與優勢？

單長輝：Mini8便攜式熒光定量PCR儀，將PCR熱循環與熒光檢測和各種軟件算法有機結合，可實時觀察到PCR反應每次擴增中產物的動態變化。PCR之后，即可馬上得到定量結果，免去了傳統 PCR后續的PCR產物純化，凝膠電泳分析等費時費力的環節。 通過采用創新性的光學檢測系統，Mini8能為用戶有效節約單個反應的試劑成本，反應體積可配置15～150UL，一個半小時左右即可得到精準的定量結果。 此外，Mini8是市場上唯一一款可使用12V直流電源，可車載，可在移動環境使用的實時熒光定量PCR，非常適合現場檢測，針對突發食品安全事件具有不可比擬的優勢。

記者：卡尤迪產品有何檢測的成功案例？分享給大家？

單長輝：在不增菌的情況下直接檢測牛奶、雞蛋、肉類等食品中病原微生物，從拿到樣本到出結果時間控制在90分鐘以內。如果進行快速增菌步驟，經過4小時的增菌，總的檢測時間控制在6小時以內。由于卡尤迪一步法技術平臺剛上市不久，在食品方面應用還不是很廣泛，但在檢驗檢疫、病毒檢測上應用十分廣泛，卡尤迪研發的基于一步法技術平臺的寨卡病毒檢測試劑已經在北京、浙江、上海、深圳、廣州、福建、遼寧等地檢驗檢疫局和疾病預防與控制中心得到了大面積的應用，可以直接在機場口岸等地對疑似病例進行現場檢驗。同時我們的一步法技術平臺在動物疫病檢測、癌癥篩查、個性化用藥指導、乙肝丙肝檢測、突發應急事件中得到了廣泛應用。

記者：卡尤迪產品的市場推廣情況與客戶評價如何？

單長輝：我們現在已經開發了部分食源性微生物檢測試劑盒，可以直接對復雜的食品樣本進行檢測，由于免去了復雜的核酸提取過程，在同類PCR產品中卡尤迪具有操作簡便、檢測時間短的優勢，由于卡尤迪一步法技術平臺剛上市不久，在食品方面應用還不是很廣泛，但在檢驗檢疫、病毒檢測上應用十分廣泛，客戶的總體評價就是方便、快速、準確。如今在《食品安全導刊》媒體平臺的幫助下，把我們的產品推廣給了全國各級食監部門、檢驗所、食品企業、流通、零售終端及更多用戶，使得我們的產品獲得了越來越廣泛的歡迎與贊譽。