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無醇楊梅果酒發酵工藝優化及其品質分析

2017-01-09 02:42李潔瑩杜晶韓飛余培斌丁紹東范柳萍
食品與發酵工業 2016年12期
關鍵詞:果酒花色楊梅

李潔瑩,杜晶,韓飛,余培斌,丁紹東,范柳萍*

1 (江南大學 食品學院,食品科學與技術國家重點實驗室,江蘇 無錫,214122) 2 (國家糧食局 科學研究院,北京 100037) 3 (江南大學,糧食發酵工藝及技術國家工程實驗室,江蘇 無錫,214122)

無醇楊梅果酒發酵工藝優化及其品質分析

李潔瑩1,杜晶1,韓飛2,余培斌3,丁紹東1,范柳萍1*

1 (江南大學 食品學院,食品科學與技術國家重點實驗室,江蘇 無錫,214122) 2 (國家糧食局 科學研究院,北京 100037) 3 (江南大學,糧食發酵工藝及技術國家工程實驗室,江蘇 無錫,214122)

利用單因素結合正交試驗優化無醇楊梅果酒的發酵工藝,得出適宜的發酵條件為:發酵溫度28 ℃,加渣量70 g/L,通氧發酵時間4 h。將無醇楊梅果酒與楊梅汁的香氣成分進行對比分析,結果表明:無醇楊梅果酒的主要香氣成分是酯類(30.31%)、高級醇類(19.39%)和烯萜類(31.22%)化合物,其中酯類和高級醇類的相對含量分別增加了165.41%和42.47%,烯萜類相對含量僅下降了35.04%。無醇楊梅果酒的有機酸主要是檸檬酸和L-蘋果酸,占9種有機酸總量的96.96%。該發酵工藝獲得的無醇楊梅果酒酒精度低(0.5%vol),花色苷含量達到155.1 mg/L,色澤呈紫紅色,風味濃郁,較大程度地保持了楊梅原果清香。

無醇;楊梅果酒;發酵工藝;花色苷;香氣成分

楊梅是我國南方特色水果,果實球形,色澤艷麗,酸甜多汁,風味濃郁,可食率達90%以上,富含糖、有機酸和多種氨基酸,以及花色苷、多酚等抗氧化功能性成分,還含有鎂、鈣、磷、鐵、鉀等礦物質,具有很高的營養和醫療保健價值[1-3]。楊梅的消費方式以鮮食為主,由于盛產于梅雨季節且貯藏期短,導致大量積壓、腐爛。近年來,楊梅產量不斷增加,滯銷現象愈演愈烈,每年鮮果損失率高達40%~60%,造成大量浪費。開展楊梅深加工,不僅能解決楊梅的出路問題,提高楊梅的經濟價值,延長楊梅的貨架期和食用期,而且對我國農業產業結構調整具有重要的意義。

隨著人們健康意識的增強和消費觀念的變化,傳統果味和果汁飲料已經不能滿足人們對新鮮口感的追求,各種富含發酵香味和原果清香的發酵飲料,如無醇啤酒[4]和無醇葡萄酒[5]等應運而生,因為酒精度較低(<1%),能較大程度地保持原汁的營養成分、風味和色澤,非常適合老人、婦女和兒童等人群飲用。目前,國內已經有關于無醇芒果酒[6]、無醇山葡萄酒[7]和無醇蘋果酒[8]等的研制方法,然而尚沒有關于無醇楊梅果酒的研究。

本文以楊梅為原料,以自篩酵母為釀造菌株,通過正交試驗優化無醇楊梅果酒的發酵工藝,并對香氣成分和有機酸成分進行分析,為楊梅工業化生產技術的進一步研究提供思路和借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

楊梅原料是從無錫市馬山楊梅果園購買的荸薺種楊梅,在1 h內運送至本實驗室,并在-20 ℃冰箱冷凍備用;110號(Pichia kluyveri)、147號(Hanseniaspora uvarum)、151號(Pichia kudriavzevii)和152號(Saccharomyces cerevisiae)酵母保藏于本實驗室,其中110、147和151號菌株屬于產香酵母,152號菌株屬于釀酒酵母[9];葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、瓊脂、3,5-二硝基水楊酸、酒石酸鉀鈉、結晶酚、亞硫酸氫鈉、氯化鉀、醋酸鈉、氫氧化鈉、酚酞、醋酸、鹽酸:分析純,上海國藥集團;草酸、酒石酸、蘋果酸、乳酸、乙酸、檸檬酸、琥珀酸、抗壞血酸、富馬酸:色譜純,美國Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 培養基的配制

YPD液體培養基:參照田殿梅[10]等的配制方法。

楊梅汁發酵培養基:將楊梅去核榨汁后用4層紗布過濾,楊梅原汁的理化指標為:總糖含量92.4 g/L,總酸含量8.6 g/L(以檸檬酸計),pH為2.95,花色苷含量220.3 mg/L。將楊梅汁分裝到三角瓶后,按照實驗設計添加一定量的脫水楊梅渣。100 ℃滅菌5 min后迅速冷卻至室溫。

1.2.2 酵母菌的活化

將酵母從YPD斜面轉接至YPD平板,28 ℃培養24 h。挑取3環接種到50 mL YPD液體培養基中,28 ℃ 150 r/min振蕩培養12 h。按照10%接種到100 mL YPD液體培養基中相同條件下活化8 h,用無菌水調整菌液濃度為2×108個/mL。

1.2.3 理化指標的測定

酒精度:酒精計法[11];花色苷含量:pH示差法[12];酵母總數:血球計數板法[13];殘糖含量:DNS法[14];總酸含量:指示劑法[11]。

1.2.4 香氣成分的測定

樣品采用頂空固相微萃取(headspace solidphase microextraction,HS-SPME)法處理,分別取10 mL樣品加入15 mL頂空瓶中,將老化后的75 μm Car/PDMS萃取頭插入樣品瓶頂空部分,50 ℃吸附30 min,然后采用氣質聯用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)法測定[15]。

1.2.5 有機酸的測定

有機酸采用高效液相色譜(high performance liquid chromatographygas,HPLC)測定[15]。

1.2.6 感官評分標準

無醇楊梅果酒的感官評分標準見表1。

表1 無醇楊梅果酒感官評分標準

1.2.7 最適釀造菌株的篩選

將4株自篩酵母活化后,按照4%接種到滅菌楊梅汁培養基(清汁)中,26 ℃厭氧發酵至失重為(0.27±0.02) g/100 mL時結束發酵,測定酒精度、花色苷、殘糖和總酸含量,并進行感官評價。

1.2.8 發酵工藝單因素試驗

考察不同發酵溫度(22、26、30和34 ℃)、加渣量(10、50、90和130 g/L)和通氧發酵時間(1、4、7和10 h)對無醇楊梅果酒品質的影響,厭氧發酵至失重為(0.27±0.02) g/100 mL時結束,以花色苷含量和感官評分為評價指標,其中通氧發酵階段在厭氧發酵之前進行。

1.2.9 發酵工藝正交優化試驗

在單因素試驗的基礎上,選取發酵溫度(A)、加渣量(B)和通氧發酵時間(C)為優化因素,采用L9(34)正交表進行發酵工藝優化,以花色苷含量和感官評分為指標,確定無醇楊梅果酒的發酵工藝。正交試驗的具體因素水平見表2。

表2 正交試驗因素水平表

2 結果與分析

2.1 無醇楊梅果酒最適釀造菌株的篩選

酵母在厭氧發酵過程,會利用葡萄糖產生酒精和CO2,因此可以根據失重控制果酒的發酵程度。通過測定不同CO2失重下產生的酒精度數,得出失重為(0.27±0.02) g/100 mL時酒精度為0.5%vol,以此作為發酵終點的判定標準。4株自篩酵母發酵無醇楊梅果酒的發酵指標如表3所示。

表3 不同菌株發酵無醇楊梅果酒的發酵指標

由表3可知,4株菌株發酵的無醇楊梅果酒酒精度均為0.5%,與GB 15037—2006[16]關于無醇葡萄酒的相關規定相符?;ㄉ蘸坑酗@著差異(P<0.05),以147號菌株的發酵液花色苷含量最高,其次是151號菌株;與楊梅原汁相比,4株菌發酵的無醇楊梅果酒花色苷含量有明顯下降,原因可能是花色苷結構不穩定,發酵過程容易受到溫度、氧氣和酵母菌等的影響,其中,氧氣會導致花色苷氧化降解,酵母細胞壁會對花色苷有吸附作用[17-18]。殘糖和總酸含量無顯著差異(P>0.05),其中糖分下降較多,原因可能是151號菌株為產香酵母,產香能力較強,發酵期間產生了大量的揮發性香氣成分,消耗大量糖分;此外,酵母利用糖分進行細胞增殖,并產生大量代謝產物。感官評分有顯著差異(P<0.05),以151號菌株的發酵液感官評分最高,達到78.6分,110號其次,為73.8分;就色澤而言,前3株酵母的發酵液呈紫紅色,152號菌株的發酵液呈紅色;就香氣而言,4株酵母的發酵液楊梅果香味均突出,110號與151號菌株的發酵液醇香和果香最為濃郁,147號菌株的發酵液有濃郁的酸果香,152號菌株的發酵液為醇香和清香;就滋味而言,4株菌株發酵的無醇果酒楊梅味均突出;就口感而言,4種發酵液的口感均比較純正、柔和,其中151號菌株的發酵液余香最明顯。綜合以上分析,選擇151號菌株為發酵無醇楊梅果酒的最適釀造菌株。

2.2 無醇楊梅果酒發酵工藝的單因素試驗

在預實驗的基礎上,固定接種量為4%,保持楊梅汁自然pH及糖分。由于實驗統一發酵終點為失重等于(0.27±0.02) g/100 mL,無醇楊梅果酒的酒精度、殘糖和總酸含量無顯著差異,故選擇花色苷含量和感官評分為評價指標。

2.2.1 不同發酵溫度對無醇楊梅果酒品質的影響

溫度是影響果酒發酵的重要因素,不僅與菌株的產酒能力和產香能力有關,而且決定了果酒的香氣和口感。實驗固定加渣量為10 g/L,通氧發酵時間為1 h,在22~34 ℃研究了不同發酵溫度對無醇楊梅果酒品質的影響,結果如圖1所示。

圖1 發酵溫度對無醇楊梅果酒品質的影響Fig.1 Effect of temperature on fermentation of non-alcohol Chinese bayberry wine

由圖1可知,發酵溫度對無醇楊梅果酒的花色苷含量和感官評分有顯著影響(P<0.05)。當發酵溫度在22~34 ℃時,花色苷含量呈先上升后下降的趨勢,在26 ℃時取最大值;當發酵溫度為22 ℃時,可能因為偏離了151號菌株的最適生長溫度(28 ℃),酵母菌的生理活性較低,楊梅渣不能被酵母菌充分分解,渣中的花色苷溶出較少,此外,酵母發酵周期相比較長,與酒體接觸時間較長,花色苷吸附量相對增多;當發酵溫度超過26 ℃時,酵母菌代謝旺盛,數目較多,細胞壁對花色苷的吸附量增加[17-18]。另外,花色苷在高溫下結構不穩定,容易降解,所以花色苷含量呈下降趨勢[19];當發酵溫度為34 ℃時,花色苷含量不足26 ℃時花色苷含量的71%。當發酵溫度在26~30 ℃時,感官評分無顯著差異(P>0.05);當發酵溫度為22 ℃時,感官評分呈顯著下降(P<0.05),是26 ℃時感官評分的88.92%;當溫度超過26 ℃時,可能由于酵母容易衰老,自溶產生不良風味和代謝產物,影響酒體的風味和口感,導致感官評分減小。綜上所述,選擇26 ℃為發酵溫度。

2.2.2 加渣量對無醇楊梅果酒品質的影響

楊梅果酒多采用清汁發酵,但是釀造過程花色苷容易被吸附或降解,保留率較低(<25%),產品色澤較差。適當添加一定量的楊梅渣,不僅能提高發酵酒的色澤,還能增強酒體的楊梅風味。實驗固定發酵溫度為最佳值,通氧發酵時間為1 h,在10~130 g/L范圍內研究楊梅渣添加量對無醇楊梅果酒品質的影響,結果如圖2所示。

圖2 加渣量對無醇楊梅果酒品質的影響Fig.2 Effect of slag volume on fermentation of non-alcohol Chinese bayberry wine

由圖2可知,加渣量對無醇楊梅果酒的花色苷含量和感官評分有顯著影響(P<0.05)。在給定范圍內,花色苷含量呈先上升后下降的趨勢,在加渣量為50 g/L時取得最大值;加渣量為50 g/L的發酵液花色苷含量比加渣量為10 g/L的增加19.19%;當加渣量在50~130 g/L時,隨著加渣量的增加,花色苷含量呈下降趨勢,可能因為加渣量較多時,楊梅渣因為不能充分分散而堆積在一起,酵母菌不能與楊梅渣充分接觸,渣里的色素不能充分溶出,所以花色苷含量減小了。當加渣量在50~90 g/L時,感官評分無顯著差異;當加渣量小于50 g/L時,一方面由于色澤相比較淺,另一方面由于楊梅汁味相比較弱,所以感官評分有所下降;當加渣量大于90 g/L時,由于楊梅渣比較密集,通氧效果較差,只有局部發酵,酵母的產香能力下降,所以感官評分有所減少。綜上所述,選擇50 g/L為加渣量。

2.2.3 通氧發酵時間對無醇楊梅果酒品質的影響

酵母只在厭氧條件下代謝糖類產生酒精,無醇果酒要求酒精度為0.5%vol~1%vol,因此厭氧發酵時間不宜過長;但發酵時間過短會造成酒體醇香和果香不足,導致感官品質下降;適當通入一定量的氧氣,能提高產香菌株的產香性能。因此本實驗選擇在厭氧發酵之前增加通氧發酵階段,固定發酵溫度和加渣量為最佳值,在1~10 h內研究通氧發酵時間對無醇楊梅果酒品質的影響,結果如圖3所示。

圖3 通氧發酵時間對無醇楊梅果酒品質的影響Fig.3 Effect of aerobic fermentation time on fermentation of non-alcohol Chinese bayberry wine

由圖3可知,通氧發酵時間對無醇楊梅果酒的花色苷含量和感官評分有顯著影響(P<0.05)。當通氧發酵時間為1~4 h時,花色苷含量無顯著差異;當通氧發酵時間超過4 h時,花色苷含量呈顯著下降(P<0.05);通氧發酵時間越長,該趨勢越明顯,通氧發酵10 h的花色苷含量是通氧發酵1 h的90.80%,一方面可能因為隨著通氧發酵時間的延長,酵母生長速度加快,細胞壁對花色苷的吸附量增加[17-18]。另一方面可能因為長時間增加氧氣,會破壞花色苷結構的穩定性,造成花色苷的降解。感官評分呈先上升后下降的趨勢,在通氧發酵時間為4 h時取得最大值;當通氧發酵時間在1~4 h內,隨著時間的增加,酵母產香能力增強;當通氧發酵時間超過4 h時,隨著氧氣含量的增加,酯類氧化反應增強,發酵液容易產生異味,導致感官品質下降。綜上所述,選擇4 h為通氧發酵時間。

2.3 無醇楊梅果酒發酵工藝的正交試驗優化

由單因素試驗可以看出,發酵溫度、加渣量和通氧發酵時間都對無醇楊梅果酒的品質有顯著影響(P<0.05)。為進一步優化各試驗參數,選取發酵溫度、加渣量和通氧發酵時間3個因素進行L9(34)正交試驗,以花色苷含量(Y1)和感官評分(Y2)為考察指標,對無醇楊梅果酒的發酵工藝進行優化。表4為無醇楊梅果酒發酵工藝優化的正交試驗結果及分析。

表4 正交試驗結果及分析

注:A:發酵溫度,℃;B:加渣量,g/L;C:通氧發酵時間,h;Y1:花色苷含量,mg/L;Y2:感官評分,分;**(P<0.01):差異極顯著;*(0.01

對于花色苷含量,如表4所示,由直觀分析可知,9號的花色苷含量最高,1號的花色苷含量最低。由極差分析可知:影響花色苷含量的主次順序為B>C>A,即加渣量對發酵無醇楊梅果酒的花色苷含量影響最大,其次是通氧發酵時間,發酵溫度影響最小。由方差分析可知,加渣量(B)對發酵無醇楊梅果酒中的花色苷含量影響顯著(0.010.05)。因此,最優方案為A3B3C2,即發酵溫度28 ℃,加渣量70 g/L,通氧發酵時間4 h。

對于感官評分,如表4所示,由直觀分析可知,9號的感官評分最高,1號的感官評分最低。由極差分析可知:影響感官評分的主次順序為A>C>B,即發酵溫度對發酵無醇楊梅果酒的感官評分影響最大,其次是通氧發酵時間,加渣量影響最小。由方差分析可知,發酵溫度(A)對發酵無醇楊梅果酒的感官評分影響極顯著(P<0.01),加渣量(B)和通氧發酵時間(C)影響顯著(0.01

由于花色苷含量與感官評分的最優方案相同,因此確定發酵無醇楊梅果酒的最優方案為A3B3C2,該組合與正交試驗設計的9號相同,按照最優實驗方案進行3次驗證試驗,結果如表5所示。結果表明,無醇楊梅果酒的花色苷含量和感官評分與正交試驗設計的9號相符,因此確定A3B3C2為發酵無醇楊梅果酒的最優實驗方案,即發酵溫度28 ℃,加渣量70 g/L,通氧發酵時間4 h。

表5 無醇楊梅果酒的理化指標

2.4 無醇楊梅果酒香氣成分分析

果酒的香氣成分是水果(品種香氣)、果酒發酵過程形成的次級代謝產物(發酵香味)和陳釀階段形成的揮發性化合物的獨特混合[20]。實驗采用GC-MS對無醇楊梅果酒的香氣成分進行分析(以楊梅汁為對照),結果如表6所示。

表6 楊梅汁和無醇楊梅果酒香氣成分的組成及其相對含量

注:“—”表示未檢出。

由表6可知,實驗共檢出49種香氣成分,其中楊梅汁共檢出35種香氣成分,占總峰面積的96.06%,無醇楊梅果酒共檢出33種香氣成分,占總峰面積的96.79%。楊梅汁和無醇楊梅果酒共有19種相同香氣成分,發酵過程新增加了14種香氣成分。

楊梅汁主要香氣成分是烯萜類(48.06%)和醛類(19.84%)化合物,特征成分石竹烯類化合物占總香氣成分的38.82%,賦予楊梅汁柑橘香和溫和的丁香香氣。無醇楊梅果酒的主要香氣成分是酯類(30.31%)、高級醇類(19.39%)和烯萜類(31.22%)化合物,其中酯類和高級醇類的相對含量分別增加了165.41%和42.47%,烯萜類相對含量下降了35.04%。無醇楊梅果酒的特征成分是乙酸乙酯(10.10%)、辛酸乙酯(2.86%)、壬酸乙酯(2.74%)、癸酸乙酯(3.37%)、庚醇(3.55%)、1-辛醇(4.05%)、1-石竹烯(7.10%)、α-石竹烯(9.99%)、氧化石竹烯(9.71%)和壬醛(3.99%),其中乙酸乙酯具有香蕉和蘋果香味,辛酸乙酯和壬酸乙酯具有白蘭地酒香味,癸酸乙酯有梨果香和白蘭地酒香,庚醇有花香和酒香,1-辛醇有柑橘味和香甜味,壬醛有濃郁的香橙味。無醇楊梅果酒的石竹烯類化合物相對含量是楊梅汁的76.33%,酒體楊梅風味濃郁;酯類以乙酯為主,占總香氣成分的22.50%。無醇楊梅果酒不僅保持了楊梅的原果清香,而且增加了酒體的果香和醇香,風味更加濃郁。

2.5 無醇楊梅果酒的有機酸成分分析

采用HPLC對無醇楊梅果酒的9種有機酸成分進行測定(以楊梅汁為對照),結果如表7所示。

表7 楊梅汁和無醇楊梅果酒的有機酸成分測定結果

由表7可以看出,楊梅汁中含量最高的是檸檬酸,超過13 g/L,其次是蘋果酸,約為1.5 g/L,其他7種有機酸含量相對較少,均小于0.1 g/L。當楊梅汁發酵成無醇楊梅果酒后,檸檬酸、草酸、酒石酸、L-乳酸和富馬酸含量分別減少了24.81%、2.99%、9.33%、86.43%和53.91%;L-蘋果酸、抗壞血酸、乙酸和琥珀酸則分別上升了1.70%、5.00%、780.00%和133.32%;無醇楊梅果酒的乙酸含量增幅較大,但遠小于葡萄酒中乙酸的閾值0.2g/L;琥珀酸是最富味覺反應的一種酸,不僅能夠提供酸味,而且能參與酒味形成,在陳釀階段有助于形成更豐富的酯類物質。無醇楊梅果酒的有機酸主要是檸檬酸(10.06 g/L)和L-蘋果酸(1.52 g/L),占9種有機酸總量的96.96%。

3 結論

本研究從前期篩選的4株酵母中選出最適發酵無醇楊梅果酒的151號菌株,然后從發酵溫度、加渣量和通氧發酵時間3方面優化無醇楊梅果酒的發酵工藝,結果表明:加渣量對花色苷含量有顯著影響(P<0.05),發酵溫度的增加在一定程度上利于花色苷從楊梅渣中溶出,通氧發酵時間過長會造成花色苷含量降低;發酵溫度、加渣量和通氧發酵時間都對感官結果有顯著影響(P<0.05),以發酵溫度影響最大,添加一定量的楊梅渣對增強楊梅風味有很大幫助,增加通氧發酵階段利于產香酵母的生長和產香性能的提高。無醇楊梅果酒的最佳發酵條件為:發酵溫度28 ℃,加渣量70 g/L,通氧發酵時間4 h,在此條件下獲得的無醇楊梅果酒酒精度為0.5%vol,花色苷含量為155.1 mg/L,殘糖含量為23.5 g/L,總酸含量為8.4 g/L,感官評分為91.7分。無醇楊梅果酒的特征成分是乙酸乙酯、辛酸乙酯、壬酸乙酯、癸酸乙酯、庚醇、1-辛醇、1-石竹烯、α-石竹烯、氧化石竹烯和壬醛,無醇楊梅果酒不僅較大程度地保持了楊梅特征成分石竹烯類化合物,而且果香和醇香更加濃郁。對無醇楊梅果酒酸味起較大貢獻作用的是檸檬酸和L-蘋果酸,含量分別為10.06和1.52 g/L,其他7種有機酸含量均小于0.2 g/L。

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Optimization of fermentation processing of non-alcohol Chinese bayberry wine and its quality analysis

LI Jie-ying1, DU Jing1, HAN Fei2, YU Pei-bin2, DING Shao-dong1, FAN Liu-ping1*

1(The School of Food Science and Technology, state key lab of food science & technology, Jiangnan University, Wuxi 214122) 2(Academy of state admisistration of grain, Beijing 100037 ) 3(National Engineering Laboratory for Cereal Fermentation Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122)

Single factor experiment and orthogonal design were employed to optimize the fermentation process of non-alcohol Chinese bayberry wine. The optimum conditions were as following: fermentation temperature of 28 ℃, slag volume of 70 g/L and aerobic fermentation time of 4 h. The aroma components of non-alcohol Chinese bayberry wine and Chinese bayberry juice were analyzed. Results showed that the main aroma components of Chinese bayberry wine were esters(30.31%), high alcohols(19.39%) and terpenes(31.22%), of which the relative content of esters and high alcohols increased by 165.41% and 42.47%, terpenes only decreased by 35.04%. The main organic acids of non-alcohol Chinese bayberry wine were citric acid andL-malic acid, taking up 96.96% of the total content of 9 kinds of organic acids. The non-alcohol Chinese bayberry wine obtained by this fermentation process had a low alcohol content of 0.5%, anthocyanins content of 155.1 mg/L. It not only possessed a purple color and rich flavor, but also kept most of original fragrance of Chinese bayberry fruit.

non-alcohol; Chinese bayberry wine; fermentation technology; anthocyanins; aroma components

10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201612014

本科生(范柳萍教授為通訊作者,E-mail:fanliuping@jiangnan.edu.cn)。

公益性行業(農業)科研專項(201303073-1);國家糧食公益性行業科研專項(201313011-6-4);江蘇省科技富民強縣項目(SBN2014010290,BN2014058)

2016-05-03,改回日期:2016-07-03

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