尿微量蛋白對2型糖尿病早期腎損傷的診斷價值

劉靈燕， 鐘政榮， 陳福祥

(上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院檢驗科，上海 201900；*通訊作者，E-mail:fuxiang_chen@hotmail.com)

尿微量蛋白對2型糖尿病早期腎損傷的診斷價值

劉靈燕， 鐘政榮， 陳福祥*

(上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院檢驗科，上海 201900；*通訊作者，E-mail:fuxiang_chen@hotmail.com)

目的 探討尿視黃醇結合蛋白(urinary retinol binding protein,uRBP)、β2-微球蛋白(β2-microalbumin,β2-M)和N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(β-N-acetyl glucosaminidase,NAG)對2型糖尿病患者早期腎損傷的臨床診斷價值。 方法 按照尿白蛋白肌酐比值(microalbuminm/creatinine,mAlb/Cr)收集三組糖尿病患者尿液樣本，每組70例：正常蛋白尿組(mAlb/Cr<30 mg /g)、微量蛋白尿組(mAlb/Cr為30-300 mg/g)和大量蛋白尿組(mAlb/Cr>300 mg/g)。同期收集健康體檢尿液標本70例為健康對照組。檢測各組uRBP、β2-M和NAG的含量，分別比較每兩組的uRBP、β2-M和NAG含量的差異；并對這三項指標診斷早期腎損傷的效率作ROC曲線，分析其cut off值、靈敏度、特異度及陰陽性預測值。 結果 大量蛋白尿組、微量蛋白尿組的uRBP明顯高于正常蛋白尿組和健康對照組(P<0.05)；大量蛋白尿組、微量蛋白尿組、正常蛋白尿組的β2-M、NAG明顯高于健康對照組(P<0.05)。通過ROC曲線分析，當uRBP的cut off值為1.12 mg/L時，uRBP診斷早期腎損傷的曲線下面積為0.886，靈敏度為82%，特異度為81%，陽性預測值為0.882，陰性預測值為0.818；當β2-M的cut off值為0.30 mg/L時，β2-M診斷早期腎損傷的曲線下面積為0.810，靈敏度為90%，特異度為64%，陽性預測值為0.714，陰性預測值為0.865；當NAG的cut off值為8.26 U/L時，NAG診斷早期腎損傷的曲線下面積為0.683，靈敏度為81%，特異度為51%，陽性預測值為0.623，陰性預測值為0.729。 結論 uRBP和β2-M是監測早期腎損傷的可靠指標，聯合uRBP、β2-M和NAG的檢測對早期腎損傷的診斷具有重要意義。

尿白蛋白肌酐比; 尿視黃醇結合蛋白; β2-微球蛋白; N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶

糖尿病是一種嚴重危害人類健康的慢性代謝性疾病，糖尿病腎病是糖尿病患者最常見的并發癥之一[1]，且發病率呈上升趨勢，目前已成為終末期腎病的第二大發病原因，臨床上積極適當的干預措施能明顯減少和延緩糖尿病腎病的發生，尤其在病程早期干預治療效果甚佳。 因此對糖尿病腎病的早期診斷具有重要意義。尿微量蛋白檢測是反映腎損傷的早期靈敏指標[2]，可作為糖尿病腎病的早期診斷依據，并對該病的治療和預后有重要價值[3]。本研究收取210例2型糖尿病患者和70例健康對照組尿標本，根據mAlb/Cr將2型糖尿病患者分為大量蛋白尿組、微量蛋白尿組和正常蛋白尿組[4,5]，通過檢測尿視黃醇結合蛋白(urinary retinol binding protein, uRBP)、β2-微球蛋白(β2-microalbumin, β2-M)和N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(β-N-acetyl glucosaminidase,NAG)的含量，分析這些尿微量蛋白對糖尿病腎損傷的診斷價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選擇2015-05～2015-12在我院確診為2型糖尿病的210例患者設為研究組，患者病情均符合1999年WHO診斷標準，排除急、慢性感染、惡性腫瘤及其他內分泌疾病，無肝臟疾病。同期收集健康體檢者70例為健康對照組。研究組根據尿白蛋白肌酐比mAlb/Cr比值分為三組：正常蛋白尿組(mAlb/Cr<30 mg/g)70例，男42例，平均年齡(67.34±15.63)歲,女28例，平均年齡(70.75±11.39)歲；微量蛋白尿組(mAlb/Cr為30-300 mg/g)男40例，平均年齡(71.78±15.58)歲,女30例，平均年齡(73.24±13.86)歲；大量蛋白尿組(mAlb/Cr>300 mg/g) 男38例，平均年齡(72.63±14.59)歲,女32例，平均年齡(71.39±12.66)歲。健康體檢者70例，男37例，平均年齡(67.45±13.24)歲,女33例，平均年齡(64.18±12.58)歲。各研究組與健康對照組分別留取空腹晨尿。

1.2 臨床樣本收集

分別收集研究組和健康對照組空腹尿液標本，于1 500 r/min離心15 min后取上清液分裝凍存至-20 ℃，凍存樣本的檢測均在1個月之內進行。

1.3 儀器和試劑及樣本檢測

尿視黃醇結合蛋白(uRBP)檢測試劑由四川新健康成生物股份有限公司提供，采用膠乳增強免疫比濁法在全自動生化分析儀Beckman Coulter UniCel DxC800上進行檢測。尿肌酐(uCr)檢測試劑由貝克曼庫爾特公司提供，采用肌氨酸氧化酶法在全自動生化分析儀Beckman Coulter UniCel DxC800上進行檢測。N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)由日本和光純藥工業株式會社提供，采用4HP-NAG底物法在全自動生化分析儀Beckman Coulter UniCel DxC800上進行檢測。尿微量白蛋白(MAlb)，β2-微球蛋白(β2-M)試劑均由西門子醫學診斷產品有限公司提供，采用散射比濁法在全自動生化分析儀BN ProSpec機器上進行檢測。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 研究組與健康對照組尿液uRBP、β2-M和NAG的含量比較

隨病程延長，尿uRBP和β2-M呈增長趨勢，NAG在健康對照組和患者組之間差異顯著，但隨尿蛋白增加，NAG增加不明顯(見表1)。與健康對照組相比，微量蛋白尿組和大量蛋白尿組的uRBP明顯升高(P<0.05)，正常蛋白尿組、微量蛋白尿組和大量蛋白尿組的β2-M、NAG均明顯升高(均P<0.05)。與正常蛋白尿組比較，微量蛋白尿組和大量蛋白尿組的uRBP明顯升高(P<0.05)，大量蛋白尿組的β2-M明顯升高(P<0.05)。與微量蛋白尿組比較，大量蛋白尿組的uRBP明顯升高(P<0.05,見表1)。

表1 糖尿病組與健康對照組微量蛋白比較

Table 1 Comparison of urine microalbuminuria between diabetic group and control group

組別nuRBP(mg/L)β2?M(mg/L)NAG(U/L)健康對照組700．18±0．070．21±0．036．84±2．70正常蛋白尿組701．10±0．995．34±10．19?15．79±14．36?微量蛋白尿組703．98±4．13?#8．65±12．54?13．51±7．64?大量蛋白尿組705．59±3．54?#Δ10．58±11．34?#17．43±12．72?

與健康對照組比較，*P<0.05；與正常蛋白尿組比較，#P<0.05；與微量蛋白尿組比較，ΔP<0.05

2.2 尿uRBP、β2-M和NAG的診斷價值

ROC曲線顯示，uRBP在cutoff值為1.12 mg/L時，診斷早期腎損傷的曲線下面積為0.886(P<0.001，見圖1)，靈敏度為82%，特異度為81%，陽性預測值為0.882，陰性預測值為0.818。β2-M在cutoff值為0.30 mg/L時，診斷早期腎損傷的曲線下面積為0.810(P<0.001)，靈敏度為90%，特異度為64%，陽性預測值為0.714，陰性預測值為0.865。NAG在cutoff值為8.26 U/L時，診斷早期腎損傷的曲線下面積為0.683(P<0.001)，靈敏度為81%，特異度為51%，陽性預測值為0.623，陰性預測值為0.729(見表2,3)。

圖1 uRBP,β2-M 和 NAG的ROC曲線分析圖Figure 1 ROC curve analysis of uRBP,β2-M and NAG for type 2 diabetic nephropathy

表2 各項指標ROC曲線下面積

Table 2 Area under the ROC curve of each index

指標 cutoffAUCP95%可信區間上限下限uRBP1．12mg/L0．8860．0010．8400．932β2M0．30mg/L0．8100．0010．7480．872NAG8．26U/L 0．6830．0010．6090．758

表3 各項指標的cut off值、靈敏度、特異度及陰陽性預測值

Table 3 Cut off value, senstivity, specificity,positive predictive value and negative predictive value of each index for type 2 diabetic nephropathy

指標cutoff靈敏度特異度陽性預測值陰性預測值uRBP1．12mg/L82%81%0．8820．818β2M0．30mg/L90%64%0．7140．865NAG8．26U/L 81%51%0．6230．729

3 討論

糖尿病腎病是糖尿病主要的微血管并發癥，發病早期無明顯臨床癥狀，傳統腎功能和尿常規檢查往往正常，因此，病情的診斷在很大程度上依賴于早期實驗室檢查。視黃醇結合蛋白(retinol binding protein, RBP)是血液中維生素A的特異性轉運蛋白，屬小分子蛋白，正常尿中含量甚微[6]。當腎近曲小管受損時，尿uRBP排泄量增加，能敏感地反映腎近曲小管的損害程度，目前認為是腎小管損傷的早期監測指標之一[7]。尿β2-M也是近端腎小管蛋白質重吸收的評估指標，尿液中β2-M的增加可以反映腎小管細胞的受損情況[8]。尿NAG是近端腎小管上皮細胞溶酶體內最具活性的葡萄糖苷酶，不能被腎小球濾過，被認為是腎小管細胞特異性的尿液標志物，能夠敏感地反映腎小管實質受損情況[9]。本研究收集210例糖尿病患者尿液標本，通過尿微量白蛋白與肌酐比值來評價腎損傷的嚴重程度并進行分組，該方法與傳統24 h尿蛋白檢測相比，操作簡單、準確度高，是美國糖尿病學會指南的推薦方法[10]。尿微量白蛋白與肌酐比值結果比單獨尿蛋白檢測有著更多優點。首先，其不要求患者留取24 h尿液，留取隨機尿即可，送檢方便。其次，尿微量白蛋白與肌酐比值還排除了時間、尿量等因素對檢測結果的影響，使檢測結果更可靠[9]。

研究結果顯示，隨病程延長，尿uRBP和β2-M呈增長趨勢(P<0.05)，說明尿uRBP和β2-M隨腎損傷嚴重程度逐漸增高，這與報道結果一致[11,12]。NAG在健康對照組和患者組之間差異顯著，但隨著尿蛋白增加，NAG增加不明顯。正常蛋白尿組與健康對照組相比，uRBP變化不明顯，差異無統計學意義，而β2-M和NAG增加明顯，差異有統計學意義，可能是由于后兩者分子量較前者小，β2-M分子量大約在11.8 kD，NAG分子量在13-14 kD，而uRBP分子量大約在21 kD。當腎臟受損情況發生時，分子量小的蛋白分子先濾過腎小球，當超出腎小管重吸收能力時，會排泄至尿液中。微量蛋白尿組和大量蛋白尿組與前兩組比較，uRBP增長明顯，而β2-M和NAG變化不明顯，說明在糖尿病腎病的正常蛋白尿期，β2-M和NAG對微量蛋白的檢測更靈敏，而當病程進展到微量蛋白尿期和大量蛋白尿期時，uRBP對糖尿病腎病的診斷更靈敏，是早期糖尿病腎病的良好診斷指標，且uRBP濃度隨病程嚴重程度增加而增大。這與Yuan等[13]報道的觀點一致。陳燕等[14]研究發現，102例糖尿病患者尿蛋白定性陰性占79例，其中尿微量蛋白陽性占54例，說明尿蛋白正常時，不能排除糖尿病腎病的發生。

通過ROC曲線分析發現，uRBP、β2-M和NAG所在曲線都位于ROC曲線對角線左上方，說明這三個指標對糖尿病腎損傷都有診斷價值。另外，uRBP曲線下面積最大，說明與β2-M和NAG相比，uRBP的診斷準確性最高。β2-M對腎損傷診斷靈敏度最高，為90%，而uRBP特異度最高，為81%，NAG診斷靈敏度較高，但特異度較低，uRBP的陰性、陽性預測值均最高。綜合分析得出，uRBP和β2-M是監測早期腎損傷的可靠指標，聯合uRBP、β2-M和NAG的檢測對早期腎損傷的診斷具有重要意義。

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Diagnostic value of urine microalbuminuria in early renal damage of type 2 diabetic nephropathy

LIU Lingyan, ZHONG Zhengrong, CHEN Fuxiang*

(NinthPeople’sHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai201900,China;*Correspondingauthor,E-mail:fuxiang_chen@hotmail.com)

ObjectiveTo investigate the diagnostic value of urinary retinol binding protein(uRBP),β2microalbumin(β2-M) and β-N-acetyl glucosaminidase(NAG) in early renal damage of type 2 diabetic nephropathy.MethodsA total of 210 urine specimens of type 2 diabetes patients were collected according to microalbuminm/creatinine(mAlb/Cr)(n=70 in each group): normal albuminuria group(mAlb/Cr<30 mg/g), microalbuminuria group (mAlb/Cr 30-300 mg/g) and macroalbuminuria group(mAlb/Cr>300 mg/g). During the same time period, 70 urine specimens of healthy individuals were collected as control group. Levels of URBP, β2-M and NAG in all groups were detected.ResultsURBP levels in macroalbuminuria group and microalbuminuria group were significantly higher than those in normal albuminuria group and control group(P<0.05). β2-M and NAG levels were significantly higher in macroalbuminuria group, microalbuminuria group and normoalbuminuri group than that in control group(P<0.05). According to the ROC curves, the cut off value of RBP>1.12 mg/L predicted the presence of early nephropathy with sensitivity of 82%, specificity of 81%, positive predictive value(PPV) of 0.882, negative predictive value(NPV) of 0.818 and area under the curve(AUC) of 0.886. Cut off value of β2-M>0.30 mg/L predicted the presence of early nephropathy with sensitivity of 90%, specificity of 64%,PPV of 0.714, NPV of 0.865 and AUC of 0.810. Cut off value of NAG>8.26 U/L predicted the presence of early nephropathy with sensitivity of 81%,specificity of 51%,PPV of 0.623, NPV of 0.729 and AUC of 0.683.ConclusionURBP and β2-M are reliable indicators for monitoring the early renal damage. Combination of uRBP, β2-M and NAG will benefit a lot for diagnosis of early renal damage.

urinary albumin creatinine ratio; retinol binding protein; β2-microalbumin; β-N-acetyl glucosaminidase

上海第三人民醫院院優秀青年教師基金資助項目(13YYQ02)

劉靈燕，女，1987-06生，碩士，初級檢驗技師,E-mail:sunshinesmilelly@sina.com

2016-11-04

R692

A

1007-6611(2017)01-0040-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.01.009