銀鯧不同組織中4種同工酶的表達差異

劉 磊，張晨捷，彭士明，高權新，施兆鴻

（1.中國水產科學研究院東海水產研究所，農業部東海與遠洋漁業資源開發利用重點實驗室，上海 200090；2.上海海洋大學水產與生命學院，上海 201306）

銀鯧不同組織中4種同工酶的表達差異

劉 磊1，2，張晨捷1，彭士明1，高權新1，施兆鴻1，2

（1.中國水產科學研究院東海水產研究所，農業部東海與遠洋漁業資源開發利用重點實驗室，上海 200090；2.上海海洋大學水產與生命學院，上海 201306）

采用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術，分析了銀鯧（Pampus argenteus）脾臟、肝臟、肌肉、心臟、腎臟等5種組織中酯酶（EST）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷氨酸脫氫酶（GDH）、乙醇脫氫酶（ADH）等4種同工酶的表達模式，并對各種同工酶的酶譜進行了分析。結果表明：這4種同工酶在銀鯧5種組織中的分布均存在一定的組織特異性，其與各組織的生理機能密切相關。銀鯧4種同工酶共記錄出61條酶帶，其中EST被檢測出的酶帶數量最多也較復雜，ADH同工酶酶帶數量最少，只有6條酶帶被檢測到，LDH和GDH分別檢測到16條和9條酶帶；組織特異性主要表現在位點表達和酶活性強弱不同這兩個方面，GDH1和ADH2只在肝臟中表達。

銀鯧；同工酶；組織特異性

同工酶（isozyme）是指由一個或多個基因座位編碼、存在于同一種（或屬）的生物或同一個體的不同組織中，甚至存在同一組織或同一細胞中，催化同一種化學反應，但酶分子結構有所不同的一類酶。同工酶在生物發育分化及代謝調節中必不可少，魚類同工酶的研究始于1960年，至今技術已經十分成熟，研究方法較多。作為一種生化遺傳指標，已經廣泛用于魚類物種鑒定［1－2］、親緣關系分析［3－4］、種群遺傳［5－6］、系統發育［7］等各個方面。

銀鯧（Pampus argenteus）屬鱸形目鯧亞目鯧科鯧屬，為暖溫性近海中上層集群性經濟魚類［8］，銀鯧主要分布于印度洋、印度-太平洋區、朝鮮和日本西部海域，在中國沿海地區也有分布［9］，是東海主要捕撈經濟魚類之一，屬名貴食用魚類。迄今對銀鯧的研究，主要集中在種群洄游和資源量評估［9－10］、資源動態［8－11］、生殖力及人工繁養殖［12－14］、生理及生態［15－17］等方面。而對銀鯧同工酶的研究還較少，本研究對銀鯧4種同工酶［酯酶（EST）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷氨酸脫氫酶（GDH）、乙醇脫氫酶（ADH）］進行了組織特異性的初步分析，以期為其種質資源、人工選育和遺傳研究提供同工酶譜和生化遺傳學的參考指標。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗魚取自江蘇省啟東的上海市水產研究所啟東科研基地，為東海水產研究所本所自行繁育的1齡銀鯧，從養殖池中隨機撈取10 ind，平均體質量為（18.8±7.2）g，平均叉長為（9.1± 1.1）cm。采樣時間為2015年8月。

1.2 酶液樣品制備

解剖銀鯧，迅速摘取脾臟、肝臟、肌肉、心臟、腎臟5種組織，沖去血污，于濾紙上靜置吸去水分，裝入管中冷凍備用。實驗時，切取一小塊樣品，加入預冷的磷酸緩沖液（0.1 M，pH 7.0），加入比例按照1∶4（質量／體積），勻漿機中勻漿后4℃靜置3 min，然后12 000轉離心10 min，取上清液備用。取等體積的上清液與上樣緩沖液（20%的蔗糖溶液與1%的溴酚藍）混勻即可上樣電泳。

1.3 電泳方法

采用不連續聚丙烯酰胺垂直平板電泳。濃縮膠的濃度均為4%，pH值6.8；分離膠乳酸濃度為8%，其它濃度為12.5%，pH值8.8。電極緩沖液為三羥甲基氨基甲烷-甘氨酸（Tris-Gly）。10 mA恒流預電泳1 h，電泳120 V恒壓電泳，電泳時間各種酶有所不同。電泳結束后進行染色。

1.4 染色及酶譜分析

同工酶的染色方法參照文獻［18－20］稍作改進，37℃避光染色，至條帶出現后停止染色，蒸餾水沖洗，脫色后7%乙酸溶液保存，經相機拍照保存，照片經調光處理后使用。

EST同工酶染色方法如下：稱取100 mg 4-苯甲酰氨基-2，5-二甲氧基氯化重氮苯氯化鋅鹽（Fast Blue RR Salt，簡稱固藍RR鹽）、50 mg乙酸-1-萘酯（1-Naphthyl acetate）和50 mg乙酸-2-萘酯（2-Naphthyl acetate）共同溶于10 mL丙酮中，待溶解完成后，加入90 mL 0.1 M磷酸溶液（PB），現配現用。

LDH同工酶染色液按照氧化型輔酶Ⅰ溶液（NAD＋，5 mg·mL－1）∶乳酸鈉（1 mg·mL－1）∶氯化鈉（0.1 M）∶氯化硝基四氮唑藍（NBT，1 mg· mL－1）∶甲硫吩嗪（PMS，1 mg·mL－1）∶磷酸鹽緩沖液（PBS，0.5 M pH 7.5）＝4.0∶2.5∶2.5∶10.0∶1.0∶5.0比例進行配制，現配現用。

GDH同工酶染色液按照氧化型輔酶Ⅰ溶液（NAD＋，5mg·mL－1）∶谷氨酸鈉（1M pH 7.0）∶蒸餾水∶氯化硝基四氮唑藍（NBT，1 mg·mL－1）∶甲硫吩嗪（PMS，1mg·mL－1）∶磷酸鹽緩沖液（PBS，0.5 M pH 7.5）＝12∶5∶30∶30∶2∶25比例進行配制，現配現用。

ADH同工酶染色液按照氧化型輔酶Ⅰ溶液（NAD＋，5 mg·mL－1）∶95%乙醇∶蒸餾水∶氯化硝基四氮唑藍（NBT，1 mg·mL－1）∶甲硫吩嗪（PMS，1 mg·mL－1）∶三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液（Tris-HCl，0.2 M pH 8）＝5∶2∶20∶15∶1∶7比例進行配制，現配現用。

同工酶的命名［21］，以各酶帶的相對遷移率（Rf）從大到小依次命名，即離陰極最近的編為1號，依次順序編為2，3，4，……。

2 結果與分析

2.1 EST

從銀鯧的EST電泳圖譜（圖1）可以看出，在銀鯧的5種組織中都有EST的條帶顯示，但條帶的顏色深淺不同，說明檢測到了酯酶的活性，但活性強弱有所差別。比較銀鯧5種組織中的EST電泳條帶可知：肝臟是檢測到EST同工酶最多的組織，酶帶多且染色深，活性最強，其次是心和肌肉組織；肝和心臟中EST條帶分布較均勻，肌肉中條帶在EST6～EST12位點之間分布多于EST6位點之前；脾和腎中檢測到的條帶數目少且顏色淺，顯示EST活性弱；脾是EST同工酶最少的組織，酶帶少且染色淺，活性最弱，銀鯧EST同工酶在5種組織中的表達具有顯著的組織特異性。

圖1 銀鯧不同組織EST圖譜Fig.1 EST pattems in various tissues of P.argenteus

2.2 LDH

在銀鯧5種組織LDH同工酶圖譜中，不同組織的LDH表現出明顯的組織特異性（圖2）。電泳圖譜共檢測到5條酶帶，每種組織的酶帶數2～5條不等。在脾臟中檢測到2條酶帶LDH4和LDH5，且LDH4染色較深，活性LDH4＞LDH5；在肝臟組織中共檢測到5條酶帶，活性強弱依據酶帶深淺為LDH4＞LDH2＞LDH3＞LDH1＞LDH5；在肌肉組織中共檢測到LDH4和LDH2兩條酶帶，其中LDH2染色極淺，其活性較弱；在心臟中檢測到3條酶帶，活性LDH5＞LDH4＞LDH2；腎臟中清晰的檢測到4條酶帶，其中LDH2和LDH3染色清晰，說明其穩定性強，LDH4染色最深，活性最強，LDH5染色最淺，活性最弱。綜上，LDH1酶帶只在肝組織中檢測到，其它組織中并未發現LDH1酶帶。

圖2 銀鯧不同組織LDH圖譜Fig.2 LDH pattems in various tissues of P.argenteus

2.3 GDH

由銀鯧的不同組織的GDH電泳圖譜（圖3）可見，GDH在銀鯧脾、肝臟、肌肉、心臟、腎臟各組織中都有分布，共檢測到5條酶帶。其中GDH1僅在肝臟中檢測到且染色較淺，活性比較弱；GDH2及GDH3在腎臟中檢測到明顯的條帶，活性居中；而GDH4在5種組織中都有酶帶出現，酶帶較寬，在肝臟、肌肉和腎中染色較深，活性最強，心臟中的活性次之，在脾臟活性最弱；GDH5僅在心臟中檢測到明顯酶帶，染色較深，活性較強。腎臟是檢測到GDH同工酶最多的組織，有3條酶帶，脾臟是GDH同工酶最少的組織，只檢測到1條酶帶，且染色較淺，活性弱，銀鯧GDH同工酶在5種組織中的表達具有顯著的差異性。

圖3 銀鯧不同組織GDH圖譜Fig.3 GDH pattems in various tissues of P.argenteus

2.4 ADH

銀鯧不同組織的ADH電泳圖譜見圖4，銀鯧ADH同工酶共檢測到2條酶帶，ADH2僅在肝臟中檢測到酶帶，染色淺，活性低，在其它4種組織中未檢測到ADH2活性。ADH1在銀鯧脾、肝臟、肌肉、心臟、腎臟各組織中都檢測到了酶帶，但其染色程度有差異，在心臟中ADH1酶帶染色最深，活性最強。肝臟中檢測到2條酶帶，其它組織只有1條酶帶，且染色程度差異明顯，ADH同工酶在銀鯧5種組織中的表達具有一定的組織差異。

圖4 銀鯧不同組織ADH圖譜Fig.4 ADH pattems in various tissues of P.argenteus

3 討論

3.1 銀鯧同工酶表達的組織特異性

表1 銀鯧各組織同工酶酶帶數統計表Tab.1 Enzyme band number in various tissues of P.argenteus

本實驗對銀鯧4種同工酶的研究發現，在5種組織中各種同工酶都有一定程度的表達，由表1可見，肝臟中酶的含量最為豐富，4種同工酶都檢測到活性且總酶帶數量最多，共檢測到18條酶帶，活性幾乎是幾種組織中最高的；其次為心臟；再次之為肌肉和腎臟；脾臟酶含量最少，共檢測到5條酶帶，且各酶帶染色淺，說明其表達量較低，活性弱。腎臟中，EST酶表達較弱，只有3條酶帶，且染色淺，活性低，而其余3種酶表達較活躍，僅次于肝臟中3種酶的表達。對卵形鯧鯵（Trachinotus ovatus）同工酶表達的研究發現［22］，EST同工酶在肝臟和腎臟中表達了兩個座位，在肌肉、脾臟和心臟只表達一個座位，而與之不同，本研究中銀鯧腎臟組織中EST同工酶表達弱；卵形鯧鯵LDH同工酶在腎臟中表達最強，而在脾臟中沒有表達，這與本研究中銀鯧的研究結果相類似，銀鯧的LDH同工酶在腎臟中表達較強，而在脾臟中表達弱；卵形鯧鯵與本實驗銀鯧組織同工酶表達有異有同，說明同工酶在不同種之間表達也存在較大差異性。

銀鯧5種組織的4種同工酶都表現出組織特異性，具體表現在以下2個方面：首先是位點的表達，某些位點的同工酶可能是某種組織所特有的，在其它組織中不表達或者活性太低無法檢測到。比如ADH同工酶，在肝臟中檢測到兩條酶帶，而其它組織中只檢測到ADH1酶帶，ADH2是肝臟組織中所特有的；又如GDH1僅在肝臟中檢測到酶帶，GDH5僅在心臟組織中檢測到酶帶，肝臟和腎臟中EST酶帶數基本相同，但是其相同位點酶帶表達有所差異，等等，以上這些說明組織特異性確實可表現在位點表達的差異上。其次，酶活性的強弱不同。同一位點在不同組織中的相對含量有所不同，其可通過染色深淺來加以判斷。如ADH1在5種組織中都有表達，但在心臟組織中酶帶顏色深，含量豐富，其次是腎臟和肌肉，活性最弱的是脾和肝臟；GDH4在5種組織中酶帶相同，表達量不同，在肝臟、肌肉、腎臟中高表達，活性強，其次是心臟中，最弱的是在脾臟中。同時，不同位點在不同組織中的相對活性不同，如EST同工酶，在肝臟、肌肉、心臟中表達活躍，酶帶數量多，而在脾和腎臟中檢測到的酶帶少，在肌肉中酶帶集中于EST6～EST12之間，而肝臟和心臟中酶帶分布均勻。

3.2 銀鯧不同組織同工酶表達的特異性及其與功能的關系

硬骨魚類的EST一般認為是單體或二聚體酶，由多個位點編碼，多態現象非常普遍，條帶多且復雜［23－24］。EST是一種水解酶類，除維持正常的能量代謝外，還可以水解非正常存在的酯類化合物，具有解毒的功能［25］。銀鯧的肝臟和心臟中EST同工酶表達最強，這與肝臟的消化吸收、降解代謝廢物和毒素等生理生化功能相關，心臟中酶表達強可能與其活躍的能量代謝相關，銀鯧肌肉中EST同工酶表達僅次于肝臟和心臟，這可能與銀鯧的習性有關，銀鯧生性愛動，肌肉比較發達，這需要活躍的能量代謝，因此造成其EST同工酶高度表達。

LDH為四聚體［26－28］，是一種糖酵解酶，主要與乳酸的產生和利用有關［29］，它在無氧條件下能將丙酮酸還原為乳酸，產能以維持機體的能量需求。銀鯧5種組織中共檢測到5條酶帶，肝臟中LDH活性表現的最強，肝臟高強度的生理活動需要消耗大量能量，LDH催化乳酸氧化形成丙酮酸，參與有氧代謝。肌肉是機體無氧代謝較為旺盛的組織，銀鯧肌肉中LDH表現出2條酶帶，主要是催化丙酮酸轉化為乳酸，參與無氧代謝。一般認為C基因控制的LDH表型在部分魚類的肝臟中表達［30］，而這與銀鯧組織中特異的LDH1酶帶相對應。

GDH是一種線粒體酶，GDH除催化L-谷氨酸脫氫外，還具有催化其它氨基酸如L-纈氨酸、L-2-氨基丁酸及L-亮氨酸脫氨，它以NAD、NADP或者同時利用兩者作為輔酶，參與到谷氨酸的合成與分解中［31］。本研究中，在銀鯧腎臟中檢測到GDH同工酶3條酶帶，腎臟具有排泄分泌代謝產物的功能，它還具有重吸收的功能，能夠將氨基酸、葡萄糖等全部重吸收，重吸收的相關氨基酸能夠參與谷氨酸的合成與再分解中，此過程GDH表現活躍，這與5種組織中腎臟GDH活性最強的實驗結果相符合。

ADH是一種催化醇脫氫形成醛或酮的酶，一般為二聚體酶［23］。ADH同工酶大量存在于人和動物肝臟中，它的生理作用是適應厭氧酵解的需求。從本研究結果可以看出，肝臟中檢測到2條ADH酶帶，但染色顏色淺，肌肉、心臟和肝臟中只有1條酶帶但染色深，活性強，這與昆明裂腹魚（Schizothorax grahami）［32］及花鰻鱺（Anguilla marmorata）［27］的研究結果存在某些類似性，與膠齒鯛（Symphysodon spp.）［33］的研究結果有差異，其肝臟中染色深且十分穩定，其余組織染色淺且極易失活，這可能與人工養殖銀鯧長期適應生存環境相關。

4 小結

本研究結果表明：銀鯧的4種同工酶在酶帶組成和表達的活性方面表現出高度的組織特異性，同工酶的表達差異與各組織執行的生理功能密切相關。同工酶的組織特異性表現在同工酶在組織中的表達活性強弱、位點表達特異性等。作為種質標準生化遺傳學指標的同工酶電泳技術，同工酶的種類很多，不同標準有不同的檢測方法，本研究選取了4種同工酶用來分析銀鯧的生化遺傳結構，可為將來制定銀鯧種質標準提供技術參考。

［1］ GOLIA，DIANA R R，ROBERTO CR，et al.Genetic diversity of two Philippine native freshwater goby species（Perciformes：Gobiidae）：implications for conservation［J］.Aquatic Conservation：Marine and Freshwater Ecosystems，2014，24（5）：592－600.

［2］ 楊元昊，周繼術，李 蕾，等.蘭州鲇不同組織同工酶及群體遺傳結構初步分析［J］.淡水漁業，2015，45（1）：25－29.YANG Y H，ZHOU J S，LI L，et al.Preliminary analysis on isozymes in different tissues and population genetic structure of Silurus lanzhouensis［J］.Freshwater Fisheries，2015，45（1）：25－29.

［3］ 楊鳳香，胡 閩，房振華，等.3種文昌魚的同工酶表型比較［J］.福建師范大學學報（自然科學版），2015，31（3）：83－87.YANG F X，HU M，FANG Z H，et al.Comparison on isozymic phenotypes among three Amphioxus Species［J］.Journal of Fujian Teachers University（Natural Science），2015，31（3）：83－87.

［4］ LUDGER L，WILFRIED S，BERNHARD H，et al.Genetic variation of chloroplast and nuclear markers in natural populations of hazelnut（Corylus avellana L.）in Germany［J］.Plant Systematics and Evolution，2013，299（2）：369－378.

［5］ 丁立云，曹義虎，賀 剛，等.同工酶分析技術及其在水產動物研究中的應用［J］.江西水產科技，2013（3）：31－35.DING L Y，CAO Y H，HE G，et al.Activity of analysis technology and its application in aquatic animal research［J］.Jiangxi Fishery Sciences and Technology，2013（3）：31－35.

［6］ TATJANA O，TIINA T.Genetic diversity and differentiation in six species of the genus Rhinanthus（Oroban chaceae）［J］.Plant Systematics and Evolution，2012，298（5）：901－911.

［7］ WANG G Z，TAN SH，LIS J，et al.Genetic diversity and differentiation of three populations of Penaeus monodon Fabricus.［J］.Acta Oceanologica Sinica，2008，27（1）：113－121.

［8］ 李建生，胡 芬，嚴利平.東海區銀鯧資源合理利用的研究［J］.自然資源學報，2014，29（8）：1420－1429.LI J S，HU F，YAN L P.Study on the rational utilization of Pampus argenteus pesources in the east China sea region［J］.Journal of Natural Resources，2014，29（8）：1420－1429.

［9］ 張秋華，程家驊，徐漢祥，等.東海區漁業資源及其可持續利用［M］.上海：復旦大學出版社，2007：183－200.ZHANG Q H，CHENG JH，XU H X，et al.Fishery resources and its sustainable utilization in Donghai district［M］.Shanghai：Fudan University Press，2007：183－200.

［10］ 鄭元甲.東海大陸架生物資源與環境［M］.上海：上?？茖W技術出版社，2003：274－278.ZHENG Y J.Biological resources and the environment in the east China sea continental shelf［M］.Shanghai：Shanghai Science and Technology Publishing House，2003：274－278.

［11］ 袁楊洋，葉振江，劉 群，等.黃海南部春季銀鯧漁場分布與溫度之間的關系［J］.中國海洋大學學報（自然科學版），2009，39（1）：333－337.YUAN Y Y，YE Z J，LIU Q，et al.Spatio tempora l variation of fishing ground of Pampus argenteus in the Southern Yellow sea in spring［J］.Periodical of Ocean University of China（Natural Science），2009，39（1）：333－337.

［12］ 崔青曼，袁春營，李小雙.渤海銀鯧生殖力的研究［J］.海洋通報，2009，28（6）：66－69.CUI Q M，YUAN C Y，LI X S.The study on fecundity of silver pomfret Pampus argenteus in Bohai Bay［J］.Marine Science Bulletin，2009，28（6）：66－69.

［13］ 施兆鴻，趙 峰，王建鋼，等.舟山漁場銀鯧人工授精及孵化［J］.漁業現代化，2009，36（1）：18－21，34.SHI Z H，ZHAO F，WANG J G，et al.Artificial insemination and incubation of silver pomfret（Pampus argenteus）from Zhoushan fishing ground［J］.Fishery Modernization，2009，36（1）：18－21，34.

［14］ 施兆鴻，趙 峰，傅榮兵，等.銀鯧人工育苗技術研究［J］.海洋漁業，2009，31（1）：53－57.SHIZ H，ZHAO F，FU R B，et al.Study on artificial larva rearing techniques of silver pomfret（Pampus argenteus）［J］.Marine Fisheries，2009，31（1）：53－57.

［15］ 張晨捷，彭士明，王建鋼，等.鹽度對銀鯧Na＋／K＋-ATP酶活力及血清滲透壓調節激素濃度的影響［J］.海洋與湖沼，2013，44（5）：1395－1402.ZHANG C J，PENG S M，WANG J G，et al.The effects of salinity on Na＋／K＋-ATPase activity and plasma osmoregulatory hormone concentration in silver pomfret Pampus argenteus［J］.Oceanologia Et Limnologia Sinica，2013，44（5）：1395－1402.

［16］ 王建建，施兆鴻，高權新，等.野生銀鯧消化道內潛在產酶益生菌產酶條件的初步研究［J］.海洋漁業，2015，37（6）：533－540.WANG JJ，SHIZ H，GAO Q X，et al.On enzymeproduction conditions of potential probiotics in digestive tracts of wild Pampus argenteus［J］.Marine Fisheries，2015，37（6）：533－540.

［17］ 謝明媚，彭士明，張晨捷，等.急性溫度脅迫對銀鯧幼魚抗氧化和免疫指標的影響［J］.海洋漁業，2015，37（6）：541－549.XIE M M，PENG S M，ZHANG C J，et al.Effects of acute temperature stress on antioxidant enzyme activities and immune indexes of juvenile Pampus argenteus［J］.Marine Fisheries，2015，37（6）：541－549.

［18］ 李 林，李 煦.遺傳標記及其在生物技術中的應用［J］.現代農業科技，2008（10）：39－40.LI L，LI X.Genetic Marker and its application in biotechnology［J］.Modern Agricultural Sciences and Technology，2008（10）：39－40.

［19］ 牛紅軍，李 楊.同工酶技術及其優化［J］.生物學通報，2014，49（5）：11－13.NIU H J，LI Y.Isozyme technology and its optimization［J］.Bulletin of Biology，2014，49（5）：11－13.

［20］ 郭堯君.蛋白質電泳實驗技術［M］.北京：科學出版社，2005：42－77.GUO X J.The technology of protein electrophoresis experiment［J］.Beijing：Science Press，2005：42－77.

［21］ 楊 玲，盧 紅，劉羽清，等.東平湖鯉8種同工酶的組織特異性研究［J］.中國農學通報，2014，30（14）：26－32.YANG L，LU H，LIU Y Q，et al.Study on the tissue specificity of 8 isozymes in cyprinus carpio from Dongping Lake［J］.Chinese Agricultural Science Bulletin，2014，30（14）：26－32.

［22］ 齊旭東，區又君.卵形鯧鲹不同組織同工酶表達的差異［J］.南方水產，2008，4（3）：38－42.QIX D，OU Y J.Expression of five kinds of isozyme in different tissues of Trachinotus ovatus［J］.South China Fisheries Science，2008，4（3）：38－42.

［23］ 李 嫻，王成武，安 麗，等.淡水黑鯛5種同工酶的組織特異性研究［J］.中國農學通報，2011，27（7）：380－384.LI X，WANG CW，AN L，et al.Studies on 5 isozymes in different tissues of Hephaestus Fuliginosus［J］.Chinese Agricultural Science Bulletin，2011，27（7）：380－384.

［24］ DATTATREY A K，PRATAP K P，LAXMIKANTA A，et al.Assessment of genetic diversity among some elite cultivars of ginger（Zingiber officinale Rosc.）using isozyme and protein markers［J］.Brazilian Journal of Botany，2014，37（4）：469－479.

［25］ 周健博，李明云.光唇魚不同組織的同工酶譜［J］.水產科學，2010，29（4）：229－231.ZHOU J B，LI M Y.Isozyme patterns in various tissues of Acrossocheilus fasciatus［J］.Fisheries Science，2014，37（4）：469－479.

［26］ TSENG Y，LEE J，CHANG JC，et al.Regulation of lactate dehydrogenase in tilapia（Oreochromis mossambicus）gills during accli-mation to salinity challenge［J］.Zoological Studies，2008，47（4）：473－480.

［27］ 王冰寒，吳少偉，黎祖福，等.花鰻鱺不同組織同工酶研究［J］.安徽農業科學，2011，39（7）：4027－4029.WANG B H，WU S W，LI Z F，et al.Study on isozyme in different tissues of Anguilla marmorata［J］.Journal of Anhui Agricultural Sciences，2011，39（7）：4027－4029.

［28］ 段 虎，劉鴻艷.細鱗裂腹魚同工酶組織特異性研究［J］.西南大學學報（自然科學版），2010，32（6）：27－30.DUAN H，LIU H Y.Study onisozymic tissue specificity in Schizothorax chongi Fang［J］.Journal of Southwest Agricultural University（Natural Science），2010，32（6）：27－30.

［29］ 楊從戎，苗 亮，李明云.黑鯛不同組織的9種同工酶譜［J］.生物學雜志，2014，31（3）：38－42.YANG C S，MIAO L，LIM Y.Distribution of nine enzymes in various organs of Sparus macrocephalus［J］.Journal of Biology，2014，31（3）：38－42.

［30］ 劉鴻艷，謝從新.魚類同工酶應用及研究進展［J］.水利漁業，2006，26（5）：1－3.LIU H Y，XIE C X.Application and research advances of isozymes in fishes［J］.Reservoir Fisheries，2006，26（5）：1－3.

［31］ 鄭小青，梅依霞，洪炆飛，等.姚江水系中華鱉不同組織3種同工酶的表達差異［J］.江蘇農業科學，2015，43（7）：244－247.ZHENG X Q，MEI Y X，HONG W F，et al.Differentially expressed on 3 kinds of isozyme in different tissues from Yao river drainages［J］.Jiangsu Agricultural Sciences，2015，43（7）：244－247.

［32］ 胡思玉，陳永祥，趙海濤，等.昆明裂腹魚同工酶組織特異性研究［J］.畢節學院學報，2011，29（4）：100－105.HU SY，CHEN Y X，ZHAO H T，et al.Research on the tissue specificity of isozymes of Shizothorax Graham［J］.Journal of Bijie University，2011，29（4）：100－105.

［33］ 張誠儀，陳再忠.七彩神仙魚同工酶表達的組織特異性分析［J］.上海海洋大學學報，2010，19（6）：744－749.ZHANG C Y，CHEN Z Z.Tissue divergence of isoenzyme expression in Symphysodon spp.［J］.Journal of Shanghai Fisheries University，2010，19（6）：744－749.

Differential expression of 4 kinds of isozyme in different tissues of Pampus argenteus

LIU Lei1，2，ZHANG Chen-jie1，PENG Shi-ming1，GAO Quan-xin1，SHI Zhao-hong1，2
（1.Key and Open Laboratory of Marine and Estuarine Fisheries of Ministry of Agriculture，East China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Shanghai 200090，China；2.College of Fisheries and Life，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306，China）

Isozyme，as a product of gene expression，is not only an important physiological index but also a reliable genetic index.It can provide valuable biochemical genetic indicators to study the tissue specificity of isozyme system，genetic diversity and variety improvement of Pampus argenteus.Polyacrylamide gel electrophoresis was used to investigate the expression pattern and isozyme zymogram of four isozymes（EST，LDH，GDH and ADH）in 5 tissues（spleen，liver，muscle，heart and kidney）of Pampus argenteus.The results showed that：four isozymes in the five tissues showed distinct specificities，which was attributed to the physiological functions of different tissues.A total of61 isozyme bands were examined，of which EST were the most complex and sufficient，6 isozyme bands were examined in ADH，the least in 4 kinds of isozymes，16 and 9 isoenzyme bands were examined in LDH and GDH respectively.EST was active in the liver and heart tissue，followed by muscle tissue，and then it showed in the kidney，the weakest expression in bands，distributed evenly in liver and heart，they mainly distributed from EST6 to EST12 in muscle；spleen LDH isozyme bands were examined in the liver，active strength was in the sequence of LDH4＞LDH2＞LDH3＞LDH1＞LDH5，4 and 3 isozyme bands were examined in the kidney and heart，2 isozyme bands in muscle and spleen tissue；3LDH isozyme bands were examined in kidney，2 isozyme bands in heart and liver，in muscle and spleen tissue；2 ADH isoenzyme bands were examined in the liver，and in other tissues respectively.Tissue specificity was mainly expressed in two aspects：different site expressions and enzyme activities，for example，GDH1 and ADH2 isozyme bands were only present in liver，EST was active in the liver and heart tissue，LDH1 isozyme bands was only present in liver tissue.In this paper，4 kinds of isozymes show a high level of tissue specificity in enzyme site expression and activity，and the expression of isozyme differences is closely related to the physiological functions.The paper will provide technical references for Pampus germplasm standards in the future.

Pampus argenteus；isozyme；tissue specificity

S 965.3

：A

1004－2490（2017）01－0068－08

2016－01－09

國家科技支撐項目（2011BAD13B01）

劉 磊（1990－），男，碩士研究生，從事海水魚類養殖生物學研究。E-mail：Katharineyaya＠126.com

施兆鴻，研究員。Email：shizh＠eastfishery.ac.cn