液相色譜-質譜聯用法測定人血漿氯吡格雷的濃度及其藥動學研究

刁連娜

液相色譜-質譜聯用法測定人血漿氯吡格雷的濃度及其藥動學研究

刁連娜

目的 采用液相色譜-質譜聯用法對健康受試者體內的人血漿氯吡格雷含量進行分析，并對氯吡格雷在人體內的藥動學進行研究。方法 選取鞍山市長大醫院2015年6月至2016年6月收治的26例健康受試者為研究對象，對其進行氯吡格雷藥物口服，并在口服后對患者的肘靜脈血進行藥動學分析，主要采用液相色譜-質譜聯用法進行檢驗，對受試者血漿中的氯吡格雷含量及其衍生物含量進行分析，總結氯吡格雷在患者體內的藥動學結果。結果 相同添加值情況下，氯吡格雷與活性巰基代謝物的日間、日內精密度檢測結果差異無統計學意義（P＞0.05），而兩組受試者藥動力學指標檢測結果差異也無統計學意義（P＞0.05）。結論 通過液相色譜-質譜聯用法測定人體內血漿中的氯吡格雷含量及其代謝產物含量的藥動學結果準確、操作簡單，能夠有效指導臨床檢驗。

氯吡格雷；液相色譜-質譜聯用法；藥動學分析

【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2017.04.007

氯吡格雷是臨床常用藥物，主要通過口服用藥進行治療?；颊咴诳诜盟幒?，經過代謝和反應生成氯吡格雷羧酸。此外，氯吡格雷還能夠在人體內形成經細胞色素P450酶系代謝成活性巰基代謝物，該成分能夠與人體內血小板膜受體結合，抑制血小板聚集，由于氯吡格雷羧酸與血小板膜受體的結合是不可逆的，因此氯吡格雷經常被應用于溶栓、抗栓疾病的治療中[1-2]。但氯吡格雷在治療腦梗死、腦中風等疾病過程中，易出現不良反應，對患者康復產生影響。為了分析氯吡格雷在抗栓、溶栓治療中的應用優勢，臨床對于氯吡格雷應用的毒性與風險進行了分析，對患者血液中的活性巰基代謝物含量、濃度、藥動學等指標進行分析，但由于活性巰基代謝物屬于十分活潑的巰基，在臨床檢驗和分析過程中經常無法準確檢驗，且需要在血液采集過程中加入活性巰基代謝物保護劑，操作十分繁瑣，對檢驗十分不利[3-4]。為此，臨床采用液相色譜-質譜聯用法對人血漿中氯吡格雷的濃度進行分析，取得了一定的應用效果，本研究對所選26例健康受試者的臨床檢驗資料進行總結，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年6月至2016年6月于我院行健康體檢的26例健康受試者為研究對象，其中男14例，女12例，年齡30～42歲，平均（35± 3）歲，體重55～70 kg，平均（62±8）kg。所有健康受試者均在本研究前了解該試驗過程、方法等內容，并自愿在知情同意書上簽字，試驗期間受試者并未進行劇烈運動，嚴格限制受試者吸煙、飲酒或酒精類飲料。

1.2 方法

1.2.1 藥物與器械 儀器選用Agilent 1200液相色譜-串聯質譜聯用儀，主要包括高壓泵、進樣器、柱溫箱、電噴霧離子化接口以及設計軟件。藥物則選擇硫酸氫氯吡格雷片，分別由南京正大天晴制藥有限公司和賽諾菲安萬特制藥有限公司生產，規格均為每片75 mg。按照儀器與試劑說明書嚴格進行操作。色譜柱：WATERS ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm× 50 mm，1.8 μm），流動相：水和乙腈，兩種溶液均含有 0.1%甲酸。儀器設置中將柱溫設置為 30 ℃，將10 μl樣本放置于儀器中進行測定，時間為1.5 min，0～0.7 min時流動相B含量由20%逐漸上升為90%，并在0.7～1.2 min時保持90%的濃度，1.2～1.3 min時流動相B含量由90%逐漸下降為20%，并在1.3～1.5 min內保持在20%濃度。

1.2.2 試驗方法 首先將26例受試者分別分為試驗組與參照組，試驗組患者采用賽諾菲安萬特制藥有限公司生產的硫酸氫氯吡格雷片，參照組患者采用南京正大天晴制藥有限公司生產的硫酸氫氯吡格雷片，患者均在禁食、禁水12 h后清晨空腹用藥，方式為口服，用250 ml溫水送服75 mg硫酸氫氯吡格雷片，在服藥后4 h兩組患者統一發放早餐。待患者用藥后15 min至48 h內分別進行不同時間的肘靜脈血采集，時間分別為15 min、30 min、45 min、60 min、1.0 h、1.5 h、2.0 h、3.0 h、4.0 h、6.0 h、8.0 h、12.0 h、24.0 h、36.0 h以及48.0 h，將不同時點采集的標本進行離心處理，離心機設置為每分鐘4000 r，離心5 min，離心半徑為26 cm，取上層清液放置于-20 ℃冰箱中待檢。

1.2.3 標本檢驗方法 對離心后的血液樣本進行取樣，劑量為50 μl/樣，向樣本中加入50 mmol/L三（2-羧乙基）膦鹽酸鹽（TCEP），劑量為25 μl，利用渦旋處理5 min，然后加入乙腈溶液，乙腈溶液中含有氯甲酸芐酯（CBZ），乙腈溶液劑量為200 μl，CBZ含量為100 ng/ml，再進行渦旋處理，時間為2 min，然后進行離心處理，時間為5 min。將處理后的標本取上層清液，在避光條件下進行測定和操作。

1.3 觀察指標 將控制檢驗的添加值和測定值均設定為4.00，平行檢測3次，分析不同時點患者體內氯吡格雷及活性巰基代謝物的標準差、相對偏差、日內精密度、日間精密度差異，日間精密度是對所選2日間的血檢結果進行取值，日內精密度則是對2日內不同時點血液檢測結果進行取值，同時對氯吡格雷及其衍生物的藥動學指標進行分析和比較。

1.4 統計學分析 采用SPSS 19.0統計學軟件對數據進行分析處理，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 氯吡格雷及其衍生物測定精準度比較 相同添加值情況下，氯吡格雷與活性巰基代謝物的日間、日內精密度檢測結果差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 氯吡格雷及活性巰基代謝物平行測定3次的精準度比較(±s)

表1 氯吡格雷及活性巰基代謝物平行測定3次的精準度比較(±s)

組別 例數標準差(ng/ml)相對偏差(%)日內精密度(%)日間精密度(%) 0.001 0.00 5.24 6.15 0.004 -0.58 8.95 4.27氯吡格雷 26 0.005 -2.03 2.57 8.15 0.061 -0.76 8.51 10.48活性巰基代謝物 26 0.082 2.78 8.54 9.11 0.089 -0.87 7.49 8.06

2.2 藥動力學比較 兩組受試者藥動力學指標檢測結果顯示差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 兩組受試者藥動力學比較(±s)

表2 兩組受試者藥動力學比較(±s)

組別 例數Cmax (ng/mL) Tmax (h) t1/2 (h) AUC0-48(hng/mL) AUC0-∞(hng/mL)參照組 13 1.81±1.09 1.02±0.87 3.58±1.25 4.48±4.67 4.51±4.71試驗組 13 1.92±1.35 0.84±0.52 3.47±1.62 4.45±4.33 4.76±4.44

3 討論

氯吡格雷在我國臨床上主要應用于腦梗死、腦中風的治療中，能夠有效降低血液中血小板凝結效果，達到溶栓、抗栓等目的?；颊咴诜寐冗粮窭缀?，其血液中產生一定的活性巰基代謝物，該代謝物是與血小板相結合的主要成分，活性巰基代謝物是氯吡格雷治療腦梗死、腦中風的主要作用物質，是保證患者臨床療效的主要成分[5-6]。隨著氯吡格雷在臨床上應用逐漸增加，患者在用藥過程中經常出現的不良發應也越來越明顯，對氯吡格雷的臨床應用產生了一定影響，因此，對氯吡格雷進行藥物檢驗和藥動力學研究十分必要。但在檢驗過程中，對氯吡格雷在人體內產生的衍生物檢驗有一定難度，因患者在服用氯吡格雷后，其體內所產生的活性巰基代謝物含量相對較低，且在血液中活性強，容易與血液中血小板發生反應，形成二硫鍵后無法得到有效檢出，因此對臨床檢驗有一定影響[7-8]。液相色譜-質譜聯用法在氯吡格雷及其衍生物的測定中應用價值極高，既解決了氯吡格雷及其衍生物的檢測問題，還能夠對活性巰基代謝物在人體血液中的穩定性與藥代動力學指標進行系統觀察。而且通過不同時點的檢驗，對氯吡格雷的檢驗結果更加精確，能夠有效指導氯吡格雷的臨床藥物檢驗工作。

本研究結果顯示，通過液相色譜-質譜聯用法檢測人血漿中氯吡格雷濃度和藥動力學指標，相同添加值情況下，氯吡格雷與活性巰基代謝物的日間、日內精密度檢測結果差異無統計學意義，而兩組受試者藥動力學指標檢測結果差異也無統計學意義，說明該方法檢驗結果相對穩定，可以有效測定人血漿中氯吡格雷濃度和代謝物濃度的變化，還能避免在血漿樣本采集和處理過程中活性巰基代謝物含量減少的問題。此外，通過對兩組藥動力學比較分析也可得知，通過液相色譜-質譜聯用法檢測人血漿中氯吡格雷濃度和藥動力學指標，檢驗結果能夠隨人體藥物種類的差異得出不同結果，檢驗結果更加準確。

綜上所述，通過液相色譜-質譜聯用法檢測人血漿中氯吡格雷濃度和藥動力學指標，不但能直接檢驗，且檢驗結果十分精準。

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鞍山市長大醫院，遼寧鞍山 114007