冠心病患者冠狀動脈病變與免疫細胞的相關研究

高榮華，張韶輝

冠心病患者冠狀動脈病變與免疫細胞的相關研究

高榮華1，張韶輝1

目的 冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┗颊吖跔顒用}粥樣硬化病變與免疫細胞的關系。方法 選取2014年1月～2016年1月于濟寧醫學院附屬醫院治療的冠心病患者100例，其中急性心肌梗死（AMI）組患者35例、不穩定型心絞痛（UAP）組患者40例、穩定型心絞痛組（SAP）患者25例。同時選取30例健康者作為對照組。采用流式細胞儀檢測各組外周血CD4+CD25+調節性T細胞（Treg）和單核細胞CD36比例，同時檢測高敏C反應蛋白（hs-CRP）、白細胞介素-17（IL-17）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平。結果 AMI組和UAP組外周血CD4+CD25+Treg比例分別為（8.60±1.55）%和（8.17 ±1.43）%，低于對照組的（10.40±1.43）%和SAP組的（10.72±1.66）%，差異有統計學意義（P均＜0.05）。與對照組比較，SAP組、AMI組和UAP組單核細胞CD36比例均升高；AMI組和UAP組高于SAP組，差異有統計學意義（P均＜0.05）。對照組、SAP組、UAP組以及AMI組hs-CRP、IL-17和TNF-α水平均呈升高趨勢，差異有統計學意義（P均＜0.05）。相關性分析結果顯示，冠心病患者CD4+CD25+Treg和單核細胞CD36比例與hs-CRP、IL-17、TNF-α等炎癥因子水平無明顯相關（P均＞0.05）。結論 冠心病患者冠狀動脈粥樣斑塊的不穩定與炎癥和免疫反應有關，外周血單核細胞CD36比例明顯增加，CD4+CD25+Treg比例明顯減低，炎癥因子水平升高。

冠狀動脈疾??；調節性T細胞；單核細胞

冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┦桥R床上較為常見的心血管疾病，主要由冠狀動脈粥樣硬化導致管腔狹窄或阻塞引起心肌缺血、缺氧或壞死，其發病率較高，且近年來發病人數持續上升[1]。冠心病患者的臨床癥狀多為胸痛、心前區不適、心悸、乏力等，嚴重者可出現心力衰竭、猝死等，嚴重影響人們的生活質量[2]。炎癥因子如高敏C反應蛋白（hs-CRP）、白細胞介素-17（IL-17）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等在冠心病的發生和發展中發揮重要作用，能擴大斑塊的脂質中心并破壞纖維組織的完整性，導致斑塊不穩定甚至破裂，最終促使冠心病的發生[3]。也有研究表明[4]，免疫反應與動脈粥樣硬化有關。為進一步探討冠心病與免疫反應的關系，本研究對冠心病患者和正常人群的外周血CD4+CD25+調節性T細胞（Treg）、單核細胞CD36、hs-CRP、IL-17和TNF-α等進行檢測分析。

1 資料與方法

1.1 研究對象和分組 選取2014年1月～2016年1月于濟寧醫學院附屬醫院治療的冠心病患者100例，其中急性心肌梗死（AMI）組患者35例、不穩定型心絞痛（UAP）組患者40例、穩定型心絞痛組（SAP）患者25例。納入標準：①符合國際心臟病學會及WHO《缺血性心臟病的命名及診斷標準》中冠心病的標準；②近6個月內未進行心臟外科或介入手術治療；③患者及家屬知情同意并簽署同意書。排除標準：①合并心力衰竭、心肌病、先天性心臟病、肺心病、風濕性心臟病及其他嚴重心臟瓣膜??；②合并腫瘤、創傷、感染、自身免疫性疾病等。另選取30例健康者納入對照組（冠狀動脈造影正常，無器質性疾?。?。

1.2 標本采集及處理 所有入選者均于清晨空腹狀態下抽取靜脈血約10 ml（UAP組患者于最后一次胸痛發作后的24 h內采血，AMI組患者于發病后24 h內），分為兩份，肝素抗凝后以3000 r/min離心10 min，取上清液，-80℃保存備用，用于檢測炎癥因子；另一份未抗凝，并于采集4 h內采用流式細胞儀測定。

1.3 檢測方法 TNF-α和IL-17采用酶標免疫分析法測定，采用酶標儀（HC-880，德國拜發公司）及試劑盒（北京陸橋科技公司）測定，檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。hs-CRP采用全自動生化分析儀（C8000，美國雅培公司）以及配套試劑盒（四川新成生物科技有限公司）測定，采用膠乳免疫透射比濁法進行檢測。流式細胞術測定入選者外周血中CD4+CD25+Treg和單核細胞CD36，流式細胞儀為谷美特科技有限公司生產，型號為Coulter Epics XL，鼠抗人CD25抗體、鼠抗人CD4抗體和鼠抗人Ig G1免疫球蛋白均購自美國 Beckman-Coulter公司，檢測步驟嚴格按照說明書進行。

1.4 統計學處理 數據處理采用SPSS 19.0軟件，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間均數比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗。相關性分析采用Pearson相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組基線資料比較 各組年齡、性別比、總膽固醇和三酰甘油比較，差異無統計學意義（P均＞0.05）（表1）。

2.2 各組外周血CD4+CD25+Treg和單核細胞CD36比較 AMI組和UAP組外周血CD4+CD25+Treg比例分別為（8.60±1.55）%和（8.17± 1.43）%，低于對照組的（10.40±1.43）%和SAP組的（10.72±1.66）%，差異有統計學意義（P均＜0.05）。與對照組比較，SAP組、AMI組和UAP組單核細胞CD36比例均升高；AMI組和UAP組高于SAP組，差異有統計學意義（P均＜0.05）（圖1～2、表2）。

表1 各組基線資料比較

圖1 各組CD4+CD25+Treg流式細胞術檢測圖

圖2 各組單核細胞CD36流式細胞術檢測圖

2.3 各組炎癥因子水平比較 對照組、SAP組、UAP組以及AMI組hs-CRP、IL-17和TNF-α水平均呈升高趨勢，差異有統計學意義（P均＜0.05）（表3）。

2.4 相關性分析結果 將患者外周血CD4+CD25+Treg和單核細胞CD36分別與hs-CRP、IL-17和TNF-α進行相關分析，結果顯示CD4+CD25+Treg與hs-CRP、IL-17、TNF-α無相關性（P均＞0.05），單核細胞CD36與hs-CRP、IL-17和TNF-α無相關性（P均＞0.05）。

表2 各組外周血CD4+CD25+Treg和單核細胞CD36比較

表3 各組炎癥因子水平比較

3 討論

冠心病發病率和死亡率較高，是目前全球死亡率最高的疾病之一[5]。冠心病與冠狀動脈粥樣硬化密切相關，同時高血壓、高血脂、高血糖和不良生活方式等也加速冠心病的形成[6]。目前臨床上通常將冠心病分為5種類型：心絞痛型、心肌梗死型、無癥狀心肌缺血型、心力衰竭型和猝死型，患者的常見癥狀有典型胸痛、心前區不適、心悸、乏力、發熱、出汗、驚恐、惡心、嘔吐、心力衰竭等，嚴重影響其生活質量，甚至導致死亡[7,8]。

目前臨床上多采用藥物和介入治療冠心病，并已取得初步成效，但冠心病的發病機制至今尚未完全清楚[9]。有研究表明[10-12]，冠狀動脈硬化病變是一種炎癥反應，由炎癥細胞和血管內皮細胞表面粘附分子介導，而C反應蛋白在其發生和發展過程中發揮著重要作用。研究表明[13,14]，冠狀動脈粥樣硬化病變與T淋巴細胞介導的免疫反應有關，高血壓、高血脂等致病因素可造成血管內皮細胞損傷，分泌各種細胞因子，激活平滑肌細胞和巨噬細胞，從而釋放更多的細胞因子，激活T淋巴細胞并促使免疫反應的發生，CD4+CD25+Treg是一種功能成熟的T細胞亞群，可通過負向調節來抑制自身反應性T細胞的作用，進而減少免疫性疾病的發生，并通過轉化生長因子（TGF-β）、IL-10等多種細胞因子進行免疫調節[15]。

為了進一步探討冠狀動脈粥樣硬化與免疫細胞的關系，本研究分別選取了AMI、UAP和SAP患者，分別檢測了各組外周血CD4+CD25+Treg、單核細胞CD36比例，以及hs-CRP、IL-17和TNF-α水平。結果表明，AMI組和UAP組外周血CD4+CD25+Treg比例明顯低于SAP組和對照組，單核細胞CD36明顯高于SAP組和對照組，提示CD4+CD25+Treg與單核細胞CD36在冠狀動脈粥樣硬化發生、發展過程中有一定的調控作用。同時，對照組、SAP組、UAP組以及AMI組hs-CRP、IL-17和TNF-α水平均呈升高趨勢，提示冠狀動脈粥樣硬化與炎癥反應關系密切。但患者外周血CD4+CD25+Treg和單核細胞CD36比例與炎癥因子水平無相關性。其原因可能是樣本量不足，研究具有一定局限性和缺陷，仍需擴大樣本量作進一步的深入研究。

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本文編輯：姚雪莉

Correlation between coronary artery lesions and immune cells in patients with coronary heart disease

GAO Rong-hua*, ZHANG Shao-hui.*Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Jining Medical University, Jining 272100, China.

GAO Rong-hua, E-mail: 13854778476@163.com

Objective To discuss the relationship between coronary atherosclerosis and immune cells in patients with coronary heart disease (CHD). Methods CHD patients (n=100) were chosen from the Affiliated Hospital of Jining Medical University from Jan. 2014 to Jan. 2016, and divided into acute myocardial infarction group (AMI group, n=35), unstable angina pectoris group (UAP group, n=40) and stable angina pectoris group (SAP group, n=25). At the same time, 30 healthy controls were chosen into control group. The percentages of peripheral CD4+CD25+regulatory T cells (Treg) and monocyte CD36 were detected by using flow cytometer, and meanwhile the levels of high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP), interleukin-17 (IL-17) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) were detected in all groups. Results The percentage of CD4+CD25+Treg was (8.60±1.55)% in AMI group and (8.17±1.43)% in UAP group, and were lower than that in control group [(10.40±1.43)%] and SAP group [(10.72±1.66)%, all P<0.05]. The percentage of monocyte CD36 increased in SAP group, AMI group and UAP group compared with control group, and was higher in AMI group and UAP group than that in SAP group (all P<0.05). The levels of hs-CRP, IL-17 and TNF-α showed an ascending trend in all groups (all P<0.05). The results of correlation analysis showed that the percentages of CD4+CD25+Treg and monocyte CD36 were not correlated to levels of inflammatory factors including hs-CRP, IL-17 and TNF-α (all P>0.05) in CHD patients. Conclusion The instability of coronary artery atherosclerotic plaque is related to inflammation and immune reactions, percentage of peripheral monocyte CD36 increases significantly, percentage of CD4+CD25+Treg decreases significantly, and levels of inflammatory factors increase in CHD patients.

Coronary artery lesions; Regulatory T cells; Monocytes

R543.3

A

1674-4055(2017)06-0727-03

1272100 濟寧,濟寧醫學院附屬醫院心內科

高榮華,E-mail:13854778476@163.com

10.3969/j.issn.1674-4055.2017.06.25