降糖藥安全評價中致Beagle犬低血糖的獸醫救治*

齊衛紅 程金偉 王金照 盧難看 王書元 修中飛 王 超 霍 艷 李芊芊

(1.中國食品藥品檢定研究院安全評價研究所，藥物非臨床安全性評價研究北京重點實驗室，北京 100176)(2.北京協尓鑫生物資源研究所有限責任公司，北京 102434)

獸醫在藥物安全性評價中起著至關重要的作用，在滿足藥物安全評價實驗順利進行的同時，也要關注實驗中動物應有的福利，使受試動物感覺舒適、營養充足、能夠自由表達天性，并且及時接受獸醫治療,履行國際實驗動物評估和認可委員會[1](Association for assessment and accreditation of laboratory animal care，AAALAC)對動物福利保護的內容。血糖是維持大腦功能的主要能量來源，實驗中動物出現低血糖癥狀，如救治不及時，極易造成腦損害致使動物死亡[2]，對實驗造成無法挽回的損失。中國食品藥品檢定研究院安全評價所開展一種降糖藥物(供試品A)4周的長期毒性研究。本文詳細歸納了研究中動物出現的癥狀，以及針對不同癥狀獸醫所采取的不同措施,并且以此為例，淺談獸醫在藥物安全評價中所起到的作用。

1 材料和方法

1.1 動物

Beagle犬，6月齡，25只雌性，25只雄性,共50只動物，普通級。繁育單位：北京瑪斯生物技術有限公司。實驗動物生產許可證號：SCXK(京)2016-0001。

1.2 飼養環境

溫度：16～26 ℃，日溫差≤4 ℃；濕度：40%～70%；換氣次數：至少8次/h；照明時間：12 h(上午8：00開燈～下午8：00關燈)；飼養籠種類：不銹鋼金屬籠(L×W×H：100 cm×75 cm×100 cm)；飼養密度：1只/籠。

1.3 飼料

犬用全價顆粒飼料,制造單位：北京科澳協力飼料有限公司。

1.4 供試品與對照品

供試品:A批號：25L1151203;對照品：優泌樂25,批號：C432081。

1.5 血糖檢測儀

羅氏卓越型血糖儀及配套試紙(德國羅氏診斷有限公司)。

1.6 實驗方法

1.6.1動物給藥途徑：皮下注射給藥，給藥部位為下肢皮下。

1.6.2給藥時間：每天給藥1次，每天上午給藥，連續給藥4周。

1.6.3分組及給藥劑量：見表1。

表1 動物實驗分組Table 1 Animal Groups

1.6.4血糖監測方法：動物前肢乙醇消毒后使用放血針刺破皮膚，出血后使用血糖試紙采集血樣，用羅氏卓越型血糖儀檢測血糖數據。

1.7 低血糖判定標準及救治原則

1.7.1低血糖的判定標準：動物給予降糖藥后出現精神沉郁、體溫下降、少動、不能站立，步態強拘，表情冷漠，反射機能亢進，呼吸急促，黏膜蒼白，全身強直性或間歇性抽搐[3-4]等癥狀，其中任何一項或幾項同時發生都視為低血糖表現，需及時取血檢測血糖值。血糖數據在2 mmol/L以下者確定為低血糖。本中心犬正常血糖均值雄性4.5～6.5 mmol/L，雌性4.2～6.7 mmol/L。

1.7.2低血糖的救治原則：應在短期內提高血糖濃度，改善低血糖癥狀，防范低血糖性腦損害的發生。注意維持病犬的正常體溫，降低腦水腫發生機會，具體步驟為先灌胃100 mL濃度25%蔗糖溶液，觀察動物10 min,癥狀是否改善。如改善，動物放回籠中休息。如無改善或有加重趨勢則立即采取靜脈滴注方式給予200 mL濃度5%葡萄糖溶液，速度90 mL/h。補液中觀察動物癥狀，如緩解可回籠休息。如補液過程中癥狀繼續加重如四肢抽搐、昏迷、躁狂等癥狀則靜脈推注20 mL25%葡萄糖溶液。給糖后動物癥狀恢復時再連續觀察4 h。定時補充飼料、飲水，增加觀察頻率。

2 結果

2.1 動物癥狀及血糖檢測

連續給藥15 d開始至給藥結束各給藥組動物陸續發生低血糖癥狀。癥狀發生在給藥后2～3 h，臨床觀察發現各組動物出現精神沉郁、雙目無神、眼瞼低垂，自主活動減少，趴臥籠中，肢體震顫，躁狂等低血糖癥狀。依據以上原則及時救治，確保實驗順利進行。動物癥狀及血糖檢測結果見表2。

表2 動物癥狀及血糖值Table 2 Clinical symptoms and blood glucose values

2.2 特殊病例介紹

末次給藥后，20只動物短時間內相繼出現低血糖癥狀，個別動物反復出現狀況，需要救治，占動物總數的40%。其中最為典型的雌性高劑量組FD504動物，給藥后2 h開始出現少動、俯臥等癥狀，檢測血糖值為1.0 mmol/L，動物抱出籠舍于治療區,口服給予25%蔗糖液100 mL，3 min后動物站立、自由活動，動物抱回籠舍。30 min后再次巡視動物，發現FD504動物俯臥籠中、目光呆滯、四肢抽搐，將動物快速抱出籠舍，靜脈滴注5%葡萄糖溶液100 mL/h或90 mL/h。滴注60 mL后動物癥狀恢復，自由活動10 min后送回籠舍。給藥后4 h左右，巡視中發現FD504動物躺臥籠中，體溫下降，全身發涼，反射遲鈍，全身出現陣發性痙攣，很快陷入昏迷狀態。將動物抱出，快速進行血樣采集、心電圖檢測、體溫測量(動物有生命體征時收集必要數據)。動物靜推25%葡萄糖20 mL,熱水袋組成墊子為動物保溫，并給動物口服羊初乳+生理鹽水+25%蔗糖溶液100 mL。1h后動物意識恢復，可蹣跚站起。將動物移入籠中，籠底鋪熱水袋保溫。30 min后動物癥狀徹底恢復，自由進食、飲水。

3 討論

3.1 實驗中獸醫的作用

實驗動物飼養管理和使用指南中規定“對所有動物都應由受過培訓、熟悉疾病癥狀的人員觀察其發病、外傷或異常行為等癥狀?！睂嶒為_始前獸醫針對實驗可能致使動物發生低血糖的情況，對參與實驗人員進行動物低血糖癥狀診斷、救治的培訓。實驗中對發病動物及時施救。本次實驗中獸醫先期進行培訓，實驗中期面對動物大量、頻繁出現低血糖癥狀，及時向專題負責人及中心動物管理和使用委員會(IACUC) 申請降低給藥劑量，高劑量組(A供試品)2.8IU/kg降為 2.1 IU/kg使實驗繼續開展。實驗中全體人員依據預案，及時施救確保動物全部完成實驗。

3.2 救治用藥

藥物臨床使用前安全性評價中為確保實驗的準確性、客觀性、充分暴露供試品潛在的威脅，試驗期間對動物的異常癥狀應盡量不用藥物干預。如外傷采取局部消毒，視傷口具體情況獸醫決定是否縫合。必須用藥時盡量采用藥理作用明確的藥物，盡量少對動物機體產生其他影響。本實驗中針對動物低血糖只采取口服補充蔗糖，靜脈補充葡萄糖及生理鹽水，軀體保暖等方式救治。

GLP條件下的藥物安全性評價中，對動物的使用與AAALAC要求的動物福利經常存在一些矛盾。獸醫在實際工作中則需要協調二者關系，既要保證藥物安全性評價實驗順利進行又要關注實驗動物福利，針對可能出現的對動物不利的情況采取必要的措施確保動物福利得到保障[5-6]。