松香局部應用對牙本質小管封閉效果的實驗研究

唐成芳，左艷萍，曾輝，周芳，楊黎燕，馬新揚，朱勇

作者單位：西安醫學院,a口腔醫學院,b藥學院，陜西 西安 710021

牙本質過敏癥(Dentin hypersensitivity，DH)是指牙齒在受到外界刺激，如溫度冷熱、化學物質酸甜以及機械作用摩擦或咬硬物等所引起的一種異常酸痛癥狀，是中老年甚至青少年的口腔多發常見癥，具有發作迅速、疼痛尖銳、時間短的特點，是困擾醫患雙方的非齲難題[1-3]。牙本質過敏癥的發生主要與牙本質暴露、牙本質小管呈開放狀態有關，鏡下觀察表明牙本質敏感程度取決于牙本質小管的數量、開放比例以及小管開放程度[4-5]。因而，封閉牙本質小管被認為是減小牙本質通透率，緩解牙本質敏感的重要措施[1,3,6]。

松香為松科植物馬尾松、油松或同屬種植物的樹脂除去揮發油后，所留存的成分為松香酸酐、游離松香酸及少量槲皮素、α-及β-蒎烯等樹脂烴、揮發油的固體樹脂[7-8]。自古記載，松香具有祛風燥濕，排膿拔毒，生肌止痛及治風蟲牙痛等功效[8]。據此推測,松香具有封閉牙本質小管和抗炎鎮痛的潛能，可能為DH的防治提供簡便易得的方法或措施。松香在抗病毒、抗腫瘤等方面已被證實有確切療效[8,9-10]，以松香為基質含氟防齲涂料也被應用到DH，然單獨應用松香防治DH的效果還不明確，也尚未見相關報道。本實驗自2017年1—12月觀察不同濃度松香乙醇液口腔局部涂刷應用對牙本質小管封堵形貌，并測量樹脂突的深度以及牙本質小管口開放面積，為松香防治DH提供實驗依據，以期為臨床DH防治提供簡便可行的方式。

1 材料與方法

1.1 實驗材料與設備松香,無水乙醇，37%磷酸凝膠(DenFilTM，韓國)，柯伯脂氟保護漆(PULDENT，美國Puldent公司,美國)，源于20～30歲病人拔除的第三磨牙(收集于西安交通大學口腔醫院)，慢速切割機(UNIPOL-830，科晶有限公司，沈陽)，場發射掃描電鏡(FESEM S-4800，Hitachi，日本)，分析天平(塞多利斯,塞多利斯斯泰帝公司，德國)。

1.2 實驗方法

1.2.1樣本制備及溶液制備 取新近拔除完整無隱裂、齲壞等病變的第三磨牙40顆，按照文獻描述方法制備牙本質塊80個[12]。此外，室溫下以無水乙醇為溶劑配制10%，20%，30%，40%，50%及60%的松香乙醇溶液，避光保存備用。

1.2.2分組及處理 將80個試件隨機分到無水乙醇，氟保護漆，10%，20%,30%,40%,50%及60%松香組等8個組，每組10個。各組試件超聲清洗干凈，試件咬合面用37%磷酸凝膠酸蝕30 s,蒸餾水沖洗3次，第次10 s,氣槍輕吹去除多余水分后，分別用無水乙醇、氟保護漆，10%，20%,30%,40%,50% 及60%松香乙醇溶液均勻涂刷2次，每次10 s,自然干燥。

1.3 指標觀察與測定

1.3.1表面及剖面形貌觀察 沿制備的引導凹槽將各牙本質標本一剖為二，噴金，用FE-SEM觀察牙本質表面牙本質小管口封堵情況,以及剖面松香滲入牙本質小管的狀況；每個試樣表面和剖面分別采集3組圖像，以便圖像分析。

1.3.2牙本質小管開口面積百分比及小管樹脂突滲入深度測定 按照文獻的描述方法[11]應用Image-Pro Plus 6.0 圖像分析軟件測量試樣表面的牙本質小管開口面積(area of dentin tubular openings，ADTO)和剖面的樹脂突長度(length of resin tag,LRT)，并計算牙本質小管開口相對面積(percentage area of dentin tubular openings，PADTO)。

2 結果

2.1 表面及剖面形貌乙醇組牙本質表面見牙本質小管完全開放，呈圓形或類圓形，剖面牙本質小管清晰可見，管壁光滑，管口處管壁疏松多孔；氟保護漆組表面牙本質小管口完全封閉，牙本質表面基本被膜狀物覆蓋；剖面見管壁內被覆厚薄不一的膜狀物，但未形成明顯的樹脂突。

松香乙醇組依據濃度不同牙本質小管呈不同程度封閉，剖面可見樹脂突形成。10%松香乙醇組觀察到小管口明顯的變小，少數完全封閉但仍隱約可見小管的輪廓，剖面見自管口向下約10～70 μm長度的管壁被覆致密膜狀物；20%松香乙醇組牙本質小管大部分被封閉且被封閉的管口處較牙本質其余部分略凹陷，少數管口變小，剖面致密膜狀物較10%組長，少量樹脂突形成；30%松香乙醇組表面牙本質小管完全封閉，小管輪廓隱約可見，樹脂突明顯增多；40%～60%松香乙醇涂膜組牙本質被覆致密膜狀物，牙本質小管輪廓不清，剖面見牙本質小管內充滿15～60 μm的樹脂突，管壁的裸露膠原被樹脂包裹。見圖1，2。

2.2 ADTO、PADTO、LRT結果ADTO、PADTO、LRT資料及數據見表1。整體比較(單因素方差分析)知：各指標整體均差異有統計學意義(P<0.05)。多重比較并結合主要數據分析：ADTO乙醇組最大，顯著高于氟保護漆組，兩組間ADTO、PADTO差異有統計學意義(P<0.05)。松香乙醇10%至30%組，ADTO、PADTO隨濃度增加呈減少趨勢，至30%組及以上牙本質小管完全封閉。10%組松香乙醇組ADTO、PADTO顯著低于乙醇溶劑組，高于氟保護漆組(P<0.05)；30%～60%松香組牙本質小管口完全封閉，與氟保護漆組相當(P>0.05)；20%松香乙醇組ADTO、PADTO低于10%組且高于30%松香乙醇組，但與兩者均差異無統計學意義(P>0.05)。

乙醇組、氟涂膜10%松香乙醇組無明顯樹脂突。20%～50%松香乙醇組LRT逐漸增加，且組間兩兩比較均差異有統計學意義(P<0.05)，50%松香乙醇組LRT略高于到60%松香乙醇組，但兩組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。

表1 各組牙本質小管開口面積、開口相對面積及樹脂突長度

3 討論

作為口腔常見多發癥的DH發病機制還不十分明確，目前普遍接受的學說是液體流動學說，當暴露的牙本質受到外界溫度機械等刺激時引起牙本質 小管內的液體異常流動，從而將外界的刺激傳遞至牙髓內神經纖維進而產生一過性的尖銳疼痛[1-2]?；谠搶W說，認為可采用抑制牙髓神經或牙本質神經纖維，提高閾值來降低敏感性或機械的封閉/減小開放的牙本質小管來降低牙本質通透性并阻止小管液的流動的方式防治DH[1,12]。目前氟化物誘導礦化法、磷酸鈣/草酸鈣等鈣鹽局部沉積、粘結覆蓋法，激光熔融等封閉牙本質小管[12-13]。蜂膠、地骨皮等也被用于牙本質過敏癥的治療，結果均表明蜂膠、地骨皮等對牙本質過敏具有較好的治療效果[14-15]。本實驗探討了松樹分泌的天然樹脂—松香單獨用于開放牙本質小管的封閉效果觀察，并對比了不同濃度松膠溶液的封閉效果。

切割牙本質會在牙本質表面形成一層由牙本質碎屑等組成的玷污層從而封堵牙本質小管，研究表明磷酸酸蝕可去除牙本質表面形成的玷污層[16]，因而本實驗結合前期預實驗結果采用了37%磷酸凝膠酸蝕30 s去除玷污層并使牙本質小管完全開放作為因酸致牙本質敏感的體外模型。氟保護漆是以樹脂為基質的含氟緩釋劑，能在口腔內快速成膜，對牙體組織具有良好保護作用，并在局部緩慢釋放氟與牙本質中大量存在的鈣離子產生氟化鈣晶體，形成被用于防齲和牙本質過敏防治[14，17]?？虏Ｗo漆是從熱帶樹木分泌的柯伯樹脂為基質生產的氟保護漆，因松香與柯伯脂皆為天然樹脂，故本實驗選柯伯脂氟保護漆作為對照分析松香對暴露牙本質的封閉效果。實驗結果提示：各組松香均與氟保護漆一樣能在暴露牙本質上快速形成涂膜，并減小/封閉暴露的牙本質小管；此外，30%濃度以上的松香還可在牙本質管腔形成明顯的樹脂突，與乙醇溶液對照組和氟保護漆組有顯著差異(P<0.05)，結果表明松香能在牙本質表面形成涂膜和小管內樹脂突，具備優于氟保護漆的即刻封閉效果。

本實驗松香封閉牙本質的功效，可能與天然樹脂——松香及乙醇溶劑的特性有關。(1)松香是從松樹生物分泌的“固態液體”去除揮發油后的以樹脂酸為主并含少量脂肪酸、萜類的固形成分[7-8,18]。松香具有可溶于乙醇、丙酮等有機溶劑，遇熱融化，不溶于水的特點；溶劑無水乙醇無毒，具有較好的滲透性和揮發性，因而涂布于牙本質表面的具有良好流動性的松香乙醇溶液可快速滲透入小管和牙本質表面，包裹脫礦的膠原纖維，并在牙本質表面形成一層保護層并可在牙本質小管內形成粗大樹脂突，從而封閉牙本質小管。其作用原理與由雙酚甲基丙烯酸縮水甘油酯二甲基丙烯酸三甘醇酯，光引發劑和溶劑乙醇組成的低黏度樹脂被用于齲病和封閉牙本質小管相似，其借助高滲透性及流動性滲入到病損微孔或牙本質小管內，進而堵塞和充填微孔或牙本質小管，在齲損內或牙本質表面形成屏障，發揮功效[19]。(2)據《本草綱目》松脂性味苦、甘、溫、無毒，主治癰疽惡瘡，頭瘍白禿，排膿拔毒，生肌止痛，塞牙孔、殺蟲的功效。風蟲牙痛，刮松上脂，滾水泡化，一漱即止。古方提示，松膠軟化后漱口具有治療齲齒或牙疼、抗病毒、抗癌及皮膚病等功效。松香用于抗癌，牙周塞治，抗病毒等與其具有提高免疫，收濕斂瘡、去腐生肌的作用有關[8,9-10]。本法采用乙醇作為溶劑使松香呈流動的液態獲得封閉牙本質小管的效果與古法開水泡化松香治療風熱牙疼可能都與液態松脂溶液滲入暴露牙本質封閉了齲洞或開放的牙本質小管有關。此外，據《本草綱目》，松脂/松香可能還具有抑制/殺滅致齲菌或鎮靜牙髓神經的作用，但其科學功效及機理需要進一步研究證實。

本實驗表面形貌還提示松香濃度越高，其封閉牙本質的小管的效果越強?？赡茉驗樗赡z乙醇溶液的濃度越低，流動性和滲透性越強，更易順著空隙滲入膠原纖維和牙本質小管，單位體積低濃度松膠溶液中溶劑揮發后被覆于牙本質表面和管腔內的固形成分較少，因而僅縮小了牙本質開口的管徑或封閉后仍可見小管輪廓；反之，松膠乙醇溶液濃度越高，流動性則相對較弱，則能在牙本質表面形成致密膜狀物和樹脂突。FE-SEM剖面形貌也證實了上述觀點，在10%及20%低濃度松香組剖面僅見小管內壁覆蓋致密膜狀物，30%及40%松膠組剖面管腔內則可見樹脂突形成，且40%組樹脂突相對粗大。結合本實驗中的TADTO，PADTO及LRT結果，認為50%松膠組效果較佳，其既能完全封閉牙本質小管，又能形成粗大樹脂突，且樹脂突長度可達40 μm。

本實驗證實松膠乙醇溶液局部涂布可在牙本質表面形成保護膜和小管內樹脂突，封閉開放的牙本質小管，且50%松膠溶液即可達到較好即刻封堵效果。然而其能否經受刷牙等磨損及長期封堵效果還有待進一步研究。

(本文圖1，2見插圖7-4)