血清TK1、FOLR1在卵巢癌患者中的表達及臨床意義*

楊 琴，李雪鋒，龔 鈿，趙紅利，孟宜波

(眉山市人民醫院：1．婦科；2．ICU，四川眉山 620010)

卵巢癌是女性生殖系統3大惡性腫瘤之一，多發生于圍絕經期的婦女[1]。由于卵巢深陷于盆腔，且卵巢癌患者在發病早期缺乏特異臨床表現，大部分患者在確診時已處于晚期。據統計報道[2]，早期卵巢癌患者在得到及時有效的治療后，其5年生存率在92%左右，而晚期的卵巢癌患者即使進行了針對性治療，其5年生存率也只有30%左右，早診斷、早治療是改善卵巢癌患者生存率的重要舉措。胸苷激酶1(TK1)是與細胞分裂、增殖密切相關的酶，參與了DNA的合成和損傷修復[3]，其在胃癌、肝癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤中高表達[4-6]，并且可以直接通過檢測血清中TK1的水平來反映細胞增殖情況，方便快捷，因此，TK1對惡性腫瘤診斷和預后評估的作用逐漸受到重視。葉酸結合蛋白1(FOLR1)是一種膜蛋白，可通過受體介導的內吞作用來吸收葉酸[7]，LI等[8]的研究顯示，FOLR1可影響鼻咽癌的耐性藥，魚志琪等[9]的研究顯示，FOLR1的表達水平與卵巢癌的發展密切相關。目前，較少關于血清TK1、FOLR1與卵巢癌的研究報道，本研究分析了TK1、FOLR1在卵巢癌患者血清中的表達及其對卵巢癌的診斷價值，以期為臨床診治卵巢癌提供新的思路，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年1月至2017年12月在眉山市人民醫院接受治療的卵巢癌患者50例作為卵巢癌組，另根據卵巢癌組的一般資料匹配同期在本院接受治療的良性卵巢腫瘤患者50例作為良性卵巢腫瘤組。卵巢癌組患者年齡36～67歲，平均(52.97±9.45)歲。體質量42～71 kg，平均體質量(48.62±4.21)kg。絕經情況：絕經38例，未絕經12例。國際婦產科聯盟(FIGO)分期：Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期32例。分化程度：高分化16例，中低分化34例。淋巴結轉移：有淋巴結轉移27例，無淋巴結轉移23例。腫瘤最大徑：≥5 cm 28例，<5 cm 22例。組織分型：漿液性腺癌38例，黏液性腺癌7例，其他5例。良性卵巢腫瘤組患者年齡33～69歲，平均(53.51±9.69)歲。體質量41～70 kg，平均體質量(49.38±4.54)kg。絕經情況：絕經39例，未絕經11例。組織分型：黏液性囊腺瘤22例，漿液性囊腺瘤16例，其他12例。2組患者的年齡、體質量、絕經情況等差異無統計學意義(P>0.05)，均衡可比。所有研究對象對本次研究均知情同意，且本研究已通過本院倫理委員會的批準。

1.2納入、排除標準 納入標準：(1)卵巢癌組和良性卵巢腫瘤組患者所患疾病均經過臨床病理檢驗確診；(2)入組前未接受過放化療；(3)卵巢癌組患者均為新發病例；(4)病歷資料完整。排除標準：(1)合并有其他惡性腫瘤者；(2)預計生存時間低于3個月者；(3)存在血液系統疾病者；(4)不同意此次研究者。

1.3檢測方法 抽取2組研究對象的空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min，提取血清，采用酶聯免疫吸附法檢測血清中TK1、FOLR1的水平。TK1試劑盒購自上海恒斐生物科技有限公司；FOLR1試劑盒購自武漢博士德生物有限公司；全自動酶標儀為680酶標儀，購自美國Bio-Rad公司。嚴格按照試劑盒說明書指導相關操作。

1.4實驗室質量控制 由于本研究前后歷時5年，故按中國藥典2010版附錄XIX B藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導原則之《生物樣品分析方法的基本要求》制訂實驗室檢測質量控制方法，主要為：每半年更新測試樣本的標準物，每年替換一次新的質控樣品，按質控樣品水平對測試結果進行修正，使新舊標準物對照的樣本水平相對標準偏差(RSD)控制在RSD10%以內，回收率控制在85%～115%，并由本院高年資的檢驗醫師具體負責。

2 結 果

2.1TK1、FOLR1在卵巢癌患者和良性卵巢腫瘤患者血清中的表達 卵巢癌組患者血清中TK1、FOLR1水平均明顯高于良性卵巢腫瘤組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 TK1、FOLR1在卵巢癌患者和良性卵巢腫瘤患者血清中的表達

2.2卵巢癌患者血清中TK1、FOLR1水平與臨床病理特征的關系 卵巢癌患者血清中TK1水平與年齡、絕經情況、腫瘤最大徑、組織分型無關(P>0.05)，與FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移有關(P<0.05)。卵巢癌患者血清中FOLR1水平與年齡、絕經情況、腫瘤最大徑無關(P>0.05)，與FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移、組織分型有關(P<0.05)。見表2。

表2 卵巢癌患者血清中TK1、FOLR1的表達水平與臨床病理特征的關系

2.3血清TK1、FOLR1對卵巢癌的診斷價值 將血清TK1、FOLR1指標數據劃分成若干組段，建立對卵巢癌診斷價值的ROC分析模型。ROC結果顯示，血清TK1取1.21 pmol/L時診斷卵巢癌的靈敏度為0.701，特異度為0.782，ROC曲線下面積為0.786。血清FOLR1取224.16 pg/mL時診斷卵巢癌的靈敏度為0.883，特異度為0.871，ROC曲線下面積為0.891。見圖1。

注：A為TK1；B為FOLR1

圖1血清TK1、FOLR1診斷卵巢癌的ROC曲線

2.4血清TK1、FOLR1聯合診斷對卵巢癌的診斷價值 本研究進一步設計了TK1、FOLR1聯合診斷模式：以達到各指標的閾值(TK1=1.21 pmol/L、FOLR1=224.16 pg/mL)為陽性檢出，當樣本被判斷2個指標均陽性或均陰性時，做出陽性或陰性的診斷。若一陽一陰時則進行復查，復查不變時給以FOLR1指標結果。經計算，TK1、FOLR1聯合診斷模式能進一步提高診斷的靈敏度和特異度，分別達到0.895和0.889。見圖2。

注：A表示偏陽診斷界點(1個指標達到閾值即給陽性診斷)；B表示偏陰診斷界點(1個指標未達閾值即給陰性診斷)；C表示聯合診斷界點(2個指標均達或不達閾值，給陽或陰性診斷；若1個指標達1個指標不達閾值行復查，復查不變取FOLR1結果)

圖2血清TK1、FOLR1聯合診斷卵巢癌的ROC曲線

3 討 論

TK1是一種細胞增殖標志物，以三磷酸腺苷為底物，在鎂離子的參與下，可將胸腺嘧啶核苷轉化為單磷酸胸腺嘧啶，在合成 DNA 前體中起到重要的作用[10]。TK1是細胞周期中S期的關鍵酶，其表達水平受到S期DNA合成速度的影響，具有細胞周期依賴性，在G1期表達水平較低，在G1/S期交界時TK1水平逐漸升高，一直持續到G2/M期，之后TK1的表達水平開始明顯下降[11-12]。由于腫瘤細胞失去正常細胞周期性，具有無限增殖的特點，因此，處于S期、G2期的細胞比例高，腫瘤細胞內大量的TK1被釋放入血，導致血清中的TK1水平升高[13]。本研究結果顯示，卵巢癌組患者血清中TK1水平均明顯高于良性卵巢腫瘤組(P<0.05)，這主要是因為卵巢癌是惡性腫瘤，與良性卵巢腫瘤相比，腫瘤細胞增殖旺盛，DNA合成劇增，血清中的TK1水平更高。此外，本研究結果顯示，卵巢癌患者血清中TK1的表達水平與年齡、絕經情況、腫瘤最大徑、組織分型無關(P>0.05)，與FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移有關(P<0.05)，可見血清中TK1的表達水平可反映卵巢癌的FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移情況，這可能是因為FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移均受到細胞增殖的影響。薄維波[14]的研究顯示，卵巢癌患者血清中TK1水平與FIGO分期、分化程度有關，但與淋巴結轉移無關，與本研究存在一定差異，這可能是由于2個研究TK1檢測方法不一致所導致，并且該研究還顯示TK1是卵巢癌患者預后的獨立危險因素，這提示TK1對卵巢癌患者的預后有較好的預測價值，在后續的研究中將進一步驗證。

FOLR1定位于染色體11q13.3～14.1上，相對分子質量為(38～40)×103，其蛋白分子暴露在胞外，由糖基化磷脂酰肌醇錨定在細胞膜上[15]。FOLR1對葉酸及其衍生物具有高度親和力，可介導細胞外葉酸進入細胞內，由于葉酸可以調節細胞的增殖、分裂，當葉酸缺乏時可對腫瘤細胞的DNA復制、修復產生重大的影響，因此，FOLR1的表達對細胞分裂、增殖有重要的作用[16]。本研究結果顯示，卵巢癌組患者血清中的FOLR1水平均明顯高于良性卵巢腫瘤組(P<0.05)，這說明FOLR1在卵巢癌患者血清中呈高表達，曾正蓮等[17]的研究顯示，FOLR1在卵巢癌組織中呈高表達，由于FOLR1可以從細胞表面脫落至血液中，卵巢癌組織中的FOLR1表達水平也會影響到血清中FOLR1的表達。本研究結果還顯示，卵巢癌患者血清中FOLR1的表達水平與年齡、絕經情況、腫瘤最大徑無關(P>0.05)，與FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移、組織分型有關(P<0.05)，這說明卵巢癌患者血清中FOLR1的表達水平可反映FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移、組織分型情況，可能在卵巢癌的發生、發展中起重要作用。SARA等[18]的研究顯示，卵巢癌患者FOLR1的高表達與順鉑的靈敏度有關，可評估卵巢癌化療耐藥情況，可見FOLR1還有望成為提高卵巢癌化療靈敏度的新靶點。

由于卵巢癌患者在疾病早期無特異性的臨床表現，大部分患者在確診時已進入中晚期，延誤了最佳的治療時機，尋找高效的診斷方法一直是臨床關注的重點。血清腫瘤標志物可用于腫瘤的診斷、鑒別、療效評估、預后預測等，且具有檢測方便、重復檢查性好等特點。TK1、FOLR1均可以通過測量血清中的表達水平來進行相關診斷，并且均可通過酶聯免疫吸附法來進行測定，具有方便、經濟等優點。本研究結果顯示，血清TK1取1.21 pmol/L時對卵巢癌的靈敏度為0.701，特異度為0.782，曲線下面積為0.786。血清FOLR1取224.16 pg/mL時對卵巢癌的靈敏度為0.883，特異度為0.871，曲線下面積為0.891。若將TK1、FOLR1這2個指標進行聯合應用，則靈敏度和特異度還有一定的升高。糖類抗原125(CA125)是臨床廣泛應用的卵巢癌血清腫瘤標志物，吳磊等[19]的研究結果顯示，血清CA125對卵巢癌的靈敏度為76.67%，特異度為60.00%，曲線下面積為0.683，與之對比，說明血清TK1、FOLR1對卵巢癌具有較高的診斷價值，且FOLR1的靈敏度、特異度和曲線下面積均高于TK1、CA125，說明其漏診率、誤診率更低，診斷價值更高。

綜上所述，TK1、FOLR1在卵巢癌患者血清中呈高表達，且TK1的表達水平與患者的FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移有關，FOLR1的表達水平與患者的FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移、組織分型有關。血清TK1、FOLR1對卵巢癌具有較高的診斷價值，兩者聯合診斷時能夠一定程度提高靈敏度和特異度。由于本研究選取病例數較少，且為單中心研究，血清TK1、FOLR1在卵巢癌中的應用價值還有待多中心、大樣本量的研究進行驗證。

4 結 論

TK1、FOLR1在卵巢癌患者血清中呈高表達，且表達水平可反映患者的部分臨床病理參數，尋找卵巢癌靈敏度和特異度較高的診斷指標是臨床醫生關注的重點，目前未見TK1聯合FOLR1診斷卵巢癌的報道，本研究發現聯合診斷模式可以進一步提高對卵巢癌的診斷價值。