蘋果汁中多菌靈的高效液相色譜法研究

摘 要：多菌靈是蘋果生產中常用的農藥，具有毒性，會引發胸悶、惡心、抽搐等癥狀，國標中明確規定了蘋果汁中的多菌靈殘留量要求?；诖?，在蘋果汁投入市場前，需進行多菌靈含量檢測，本文主要探究蘋果汁中多菌量的高效液相色譜法，論述其應用過程與要點，為蘋果汁中多菌靈檢測提供幫助。

關鍵詞：蘋果汁;多菌靈;高效液相色譜法

蔬菜水果中的多菌靈檢測方法較為多樣，如紫外光譜法及高效液相色譜法等。液相色譜法的應用最為普遍，但其對試劑要求較高;紫外光譜法前處理過程較為復雜，其檢測結果準確性偏低。就此，探究一種高效、靈敏度高的蘋果汁中多菌靈檢測方法具有鮮明現實意義。

1 蘋果汁中多菌靈的高效液相色譜法實驗

1.1 儀器與試劑

實驗所用儀器包括旋轉蒸發儀、溶劑過濾器、pH計、氮吹儀與高效液相色譜系統;實驗所用試劑包括多菌靈標準儲備液（200μg/mL）、氯化鈉溶液（100g/L）、鹽酸（2mol/L）、乙酸乙酯、甲醇等。

1.2 樣品處理

在蘋果汁中多菌靈的高效液相色譜檢測中，需采用合理處理方法，提取蘋果汁中的多菌靈，保障檢測的準確性。常用的蔬菜水果中多菌靈提取方法較多，本實驗選擇兩種，通過對比分析，選出最優的樣品處理方法。

1.2.1 方法一：快速樣品前處理方法

應用高速組織搗碎機對蘋果進行均質處理，將均質后的蘋果置于50mL離心管中，添加10mL乙腈，進行渦旋混勻處理，再添加4g無水硫酸鎂、1g硫化鈉及1g無水醋酸鈉，渦旋2min后，以4000r/min的轉速進行離心處理，處理時間5min;靜置后吸取5mL上清液，與125mg的N-丙基乙二胺、750mg無水硫酸鎂共同置于15mL離心管中，以上述同樣參數，進行渦旋與離心處理;最后，靜置后吸取2mL上清液，進行45℃水浴處理，再應用氮吹儀將溶液吹干，使用乙腈溶解殘渣，用0.45μm的濾膜過濾溶液，完成樣品溶液的制備。

1.2.2 方法二：乙酸乙酯提取方法

應用高速組織搗碎機制備蘋果汁，貯存于-20℃的冰箱中備用。在樣品前處理中，稱取10g蘋果汁置于250mL平底燒瓶中，再添加30mL的氯化鈉溶液，應用pH計測量溶液的pH值，添加鹽酸調節，使其pH處于6-7之間;然后，向平底燒瓶中添加50mL的乙酸乙酯溶液，將平底燒瓶置于恒溫振蕩提取器中，處理一個小時;其次，對振蕩后的液體進行真空抽濾處理，再應用乙酸乙酯清洗燒瓶內的濾渣，將其與濾液混合，靜置分層后收集乙酸乙酯相，并應用乙酸乙酯進行水相的清洗，共清洗兩次;最后，將混合溶液過硫酸鈉柱，置于旋轉蒸發儀中，進行旋轉蒸發處理，在溶液近干時停止儀器，向溶液內添加乙酸乙酯，應用氮吹儀將溶液吹干，添加甲醇至1.5mL，完成樣品溶液的制備。

對比結果顯示，方法二的多菌靈回收率更高。就此，本實驗選擇乙酸乙酯提取方法進行樣品前處理。同時，在本實驗中，為驗證高效液相色譜法在多菌靈檢測方面的準確性，本文共進行三個樣品的測定。

1.3 樣品檢測

在樣品檢測中，選擇菲羅門硅烷基柱作為高效液相色譜檢測的色譜柱，其規格為250mm×4.60mm，5μm;色譜柱的溫度設定為室溫;色譜柱的進樣量設定為10μL;將磷酸鹽緩沖液和甲醇作為流動相，要求混合液的濃度為0.02mol/L，二者配比為1：1，在置于色譜柱前，需對混合液進行過濾出現，選擇0.45μm規格的濾膜;流動相的流速設定為0.8mL/min。在檢測時，將檢測波長設定為280nm，在發現樣品的譜圖和多菌量標準液的譜圖色譜峰值保留時間相同時，即可完成檢測。其中，色譜圖中的色譜峰值保留時間作為多菌靈的定性分析數據;色譜圖中的色譜峰面積作為多菌靈的定量分析數據，保障檢測結果的準確性[1]。

2 實驗結果與分析

2.1 實驗結果

在本實驗選擇的三個樣品中，測定的多菌量含量分別為4.997×10-2、5.834×10-2、6.722×10-2，均小于國標中限定的0.5，說明蘋果汁符合規范要求，可正常投入市場。

2.2 實驗分析

2.2.1 樣品處理分析

在蘋果汁樣品的前處理中，需選擇合理試劑進行多菌靈的提取。在本實驗進行前，選擇乙酸乙酯、二氯甲烷及乙腈三種提取劑進行多菌靈回收率的測定。測定結果顯示，乙酸乙酯的多菌靈回收率為103.85±1.06;二氯甲烷的多菌靈回收率為39.23;乙腈的多菌靈回收率為22.975± 7.37?？梢?，乙酸乙酯的回收率最高，可提高蘋果汁中多菌靈檢測的靈敏度，本實驗選擇乙酸乙酯作為最終的多菌靈提取劑。

2.2.2 色譜條件分析

在多菌靈檢測中，色譜條件會影響檢測的準確性。在本實驗進行前，對180-780nm波長范圍內的吸收光譜進行分析。對比顯示，在280nm波長處，光譜圖上的雜峰較少，基線較為穩定，且整個光譜圖清晰度較高。就此，本實驗將色譜柱的檢測波長設定為280nm。同時，在實驗前，設置不同流動相配比與流速梯度，分別進行多菌靈分析，對比各個方案下的光譜圖。對比顯示，在流動相選擇磷酸鹽緩沖液和甲醇時，光譜圖最為清晰;在二者配比為1：1時，光譜圖的雜峰較少;在流動相的流速設定為0.8mL/min時，出峰時間和峰型最為合理。就此，本實驗將色譜檢測的流動相選為磷酸鹽緩沖液與甲醇，二者配比設定為1：1，流動相的流速設定為0.8mL/min。

2.2.3 標準曲線分析

在實驗結果分析中，需應用多菌靈標準液繪制標準曲線，明確高效液相色譜法在檢測多菌靈時的檢出限。在標準曲線繪制中，對200μg/mL的多菌靈儲備液進行稀釋處理，分別制備成1μg/mL、3μg/mL、5μg/mL、7μg/mL、10μg/mL、12μg/mL、15μg/mL、18μg/mL、20μg/mL。按照實驗前確定的色譜條件，進行檢測，獲得相應的色譜

圖，明確不同濃度多菌靈的色譜峰面積，將多菌靈色譜峰面積作為標準曲線的Y軸;將多菌靈的濃度作為標準曲線的X軸，計算標準曲線的線性方程，為Y=4.9984X+11.093，

方程的R2值為0.9996，說明線性方程的準確性較高，即根據色譜峰面積，應用該方程計算多菌靈濃度，具備較高的準確性。同時，將信噪比設定為S/N=3，計算高效液相色譜法測定多菌靈的最低檢測限為0.1341mg/mL。

2.2.4 回收率分析

稱取10g蘋果汁樣品，分別與25μL、50μL、75μL、

150μL標準多菌靈儲備液混合，獲得不同濃度的多菌靈樣品液。按照上述樣品前處理流程，進行樣品中多菌靈的提取與濃縮，每個添加量檢測三次，做平行實驗。將檢測數據為基礎，應用外標法進行定量處理，計算不同濃度樣品溶液的平均回收率及相對標準偏差。計算結果顯示，25μL樣品溶液的平均回收率為99.4±8.9%;50μL樣品溶液的平均回收率為102.7±3.365;75μL樣品溶液的平均回收率為102.3±2.871;150μL樣品溶液的平均回收率為93.2±6.932。計算的多菌靈檢測限為0.02mg/kg，符合國標中蘋果汁樣品中多菌靈限量0.5mg/kg的要求[2]。

根據上述實驗分析內容可知，在蘋果汁中多菌靈的檢測中，蘋果汁樣品的前處理、高效液相色譜法的色譜條件，直接關系到多菌靈檢測的準確性，檢測人員可借鑒本文提出的前處理方法，將乙酸乙酯作為提取劑，配合旋轉蒸發儀與氮吹儀，以高回收率提取多菌靈，保障多菌靈檢測準確性;在實驗前設置不同色譜條件，對比分析不同色譜條件下的色譜圖，選出最佳色譜條件，保障多菌靈檢測靈敏度?？偟膩碚f，在蘋果汁中多菌靈的檢測中，高效液相色譜法的檢測限為0.02mg/kg，符合國家標準要求，擬合標準曲線的線性方程相關系數接近于1，說明檢測準確性與精密度較高，可在蘋果汁中多菌靈檢測中推廣應用。

3 結論

綜上所述，在蘋果汁中多菌靈的檢測中，高效液相色譜法表現出前處理流程簡單、檢測效率高、檢測結果準確性與精密度高、檢測靈敏度強、回收率高等優勢，可在蔬菜水果的多菌靈殘留量快速檢測中推廣應用，提高蔬菜水果中農藥檢測的效率，保障食品流通安全。

參考文獻：

[1]楊麗芬，楊忠平，邵林，等.QuEChERS-高效液相色譜法測定蘋果中多菌靈和噻菌靈[J].食品安全質量檢測學報， 2020，11（07）：2257-2262.

[2]夏姍姍，韋沙迪，王愛臣，等.30%咪鮮胺錳鹽·多菌靈水分散粒劑的高效液相色譜分析[J].化工設計通訊， 2019，45（03）：148+151.

作者簡介：

沈方（1990- ），女，漢族，籍貫：江蘇省新沂市新安鎮，學歷：本科，畢業于南京財經大學，現有職稱：助理工程師，研究方向：中級工程師。