銀杏與刺梨葉及桿中黃酮含量比較研究

李欣燃，田茹玉，陳勝賢，張華興

（六盤水師范學院 生物科學與技術學院，貴州六盤水 553004）

0 引言

黃酮類化合物（Flavonoids） 又稱黃酮體，屬于多酚類物質，在自然界中廣泛存在，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎、抗衰老、抗腫瘤、清熱解毒、調節血脂和鎮靜等多種生物活性及保健功能[1-4]。用藥歷史達600 余年的銀杏葉具有多種藥理作用[5]，而黃酮是銀杏葉中主要的生物活性成分之一，其在銀杏葉中的含量是銀杏葉采摘的重要指標。目前，對銀杏葉中黃酮相關研究報道較多[6-7]，銀杏葉也被公認為黃酮含量較多的植物，同時也是黃酮類化合物主要提取原料之一。

刺梨是繅絲花（Rosa Rosa roxburghiif.roxburghii） 的別名，又名黃金果或刺梨子，屬于薔薇科薔薇屬落葉灌木，主要分布于貴州、云南、四川等地，其中以貴州居多[8]?，F代研究表明，刺梨具有延緩衰老[9]、抗腫瘤[10]、抗細胞凋亡和自噬[11-12]和延緩腎臟纖維化[13]等多種生物學活性，其所含有的黃酮類化合物是其發揮生物學活性的重要物質基礎之一[14-16]。目前，對于刺梨葉的化學成分已有相關報道，而對于其生物活性的研究相對較少。盡管已有研究證明刺梨葉中含有豐富的黃酮類化合物，但是對于其含量還未有一個相對比較的標準。至于刺梨桿，其化學成分及生物活性更是未見報道。刺梨葉、刺梨桿在刺梨的培育過程中多作為廢棄物處理，為探明刺梨葉、刺梨桿中總黃酮含量，確定刺梨葉、刺梨桿進一步的開發利用價值，以銀杏葉、桿為參照，對刺梨葉、桿中黃酮含量進行檢測分析，旨在為進一步開展刺梨葉、桿有效成分生物活性分析積累基礎資料。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

銀杏葉、銀杏桿、刺梨葉、刺梨桿，均采自貴州省六盤水市六盤水師范學院，采摘后通風放置1 周，于80 ℃下烘干備用。

1.2 測定樣品液制備

將烘干處理后的銀杏葉、銀杏桿、刺梨葉、刺梨桿分別置于研缽中研至粉末，精確稱取各樣品1 g，按料液比1∶50 加入80%乙醇，放置80 ℃水浴鍋中加熱2 h，以轉速3 000 r/min 離心10min，取上清液待測。

1.3 蘆丁標準品制備

精確稱取蘆丁標準品10 mg 于50 mL 容量瓶中，加入80%乙醇定容，搖勻，使其完全溶解，即得0.2 g/L 蘆丁標準液；取10，8，6，4，2 mL 于25 mL 容量瓶中，加80%乙醇至10 mL，加入5%NaNO2溶液1 mL，搖勻后，放置室溫6 min，加入10% Al(NO3)3溶液1 mL，搖勻后，室溫放置6 min，加入4% NaOH 溶液10 mL，用80%乙醇溶液稀釋至25 mL，得蘆丁對照液，放置室溫15 min，于波長510 nm 處測其吸光度。

1.4 總黃酮含量檢測

采用Al(NO3)3-NaNO2分光光度比色法[17]，測得各提取液中黃酮含量，分別取4 種待測液各1 mL，置于25 mL 容量瓶中，加入80%乙醇至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻后放置室溫6 min；加10% Al(NO3)3溶液1 mL，混勻后室溫放置6 min；加4% NaOH 溶液10 mL，以80%乙醇定容至25 mL，混勻，放置室溫15 min，于吸光度最大的510 nm 處測定其吸光度，每個樣品重復測定3 次，取平均值，計算總黃酮含量。

1.5 精密度和重復性試驗

制備刺梨葉總黃酮提取液，平行試驗5 份，按照Al(NO3)3-NaNO2分光光度比色法檢測計算總黃酮含量及相對標準偏差（RSD），每份樣品重復測定5 次。

1.6 穩定性試驗

取刺梨葉總黃酮提取液，檢測時間為提取后0和30 min，按照Al(NO3)3-NaNO2分光光度比色法測定其吸光度，重復5 次，計算分析其總黃酮含量的變化。

1.7 數據分析

試驗數據處理采用Prism5 軟件，各組樣品中總黃酮含量采用配對T 檢驗法進行分析，若p 值≤0.05，則表示具有統計學差異。

2 結果與分析

2.1 蘆丁標準工作曲線

以蘆丁標準品對照液質量濃度為橫坐標X，以吸光度為縱坐標Y，繪制蘆丁標準曲線。并進行線性擬合，得到線性回歸方程：Y=1.301X+0.050，R2=0.990。

蘆丁標準曲線見圖1。

圖1 蘆丁標準曲線

由圖1 可知，蘆丁溶液質量濃度為0.2～0.8 mg/mL時呈現良好的線性關系。

2.2 不同樣品中總黃酮提取含量比較

不同樣品中總黃酮含量的比較見表1。

表1 不同樣品中總黃酮含量的比較/mg·g-1

由表1 可知，刺梨葉、桿樣品與銀杏葉、桿樣品中黃酮含量差異顯著，變化幅度從1.91 mg/g 至9.87 mg/g，其中刺梨葉和刺梨桿提取液中總黃酮含量較高，分別為9.87 mg/g 和9.08 mg/g，銀杏桿中黃酮含量最低，僅為1.91 mg/g。

不同部位黃酮含量見圖2。

圖2 不同部位黃酮含量

由圖2 可知，刺梨的各部分總黃酮含量顯著高于銀杏相應部位含量，且p＜0.001；刺梨葉和刺梨桿總黃酮含量無顯著性差異；刺梨桿總黃酮含量顯著高于銀杏葉黃酮含量，p＜0.05；而銀杏葉總黃酮含量顯著高于其桿部黃酮含量，p＜0.001。

2.3 精確度和重復性檢測結果

取刺梨葉提取其總黃酮含量，做5 個平行試驗。相對標準偏差為6.47% ，說明采用Al(NO3)3-NaNO2分光光度比色法測定樣品總黃酮含量的方法可行性好、精確度高、重復性好。

精確度和重復性檢測結果見表2。

表2 精確度和重復性檢測結果

2.4 穩定性檢測結果

將刺梨葉總黃酮提取液經顯色反應后于室溫放置30 min，分別測定0 和30 min 后刺梨葉總黃酮提取液含量。再將提取液于4 ℃放置30 min 后，刺梨葉中提取的總黃酮含量明顯降低為原來的85.67%，提取液中黃酮含量下降差異顯著（見圖3），表明提取液經顯色反應后穩定性較差，試驗中需盡快完成檢測。

穩定性檢測結果見表3，刺梨葉總黃酮提取液穩定性檢測見圖3。

表3 穩定性檢測結果

圖3 刺梨葉總黃酮提取液穩定性檢測

3 結論

黃酮類化合物是植物體內重要的代謝產物，對人體健康具有重要價值[18-19]。為此，尋找黃酮含量豐富的植物體對其進行生物活性研究已是國內外科學工作者的研究熱點之一。刺梨首載于《本草綱目拾遺》[20]，屬于傳統中藥，具有多種藥理作用。已有研究證明刺梨果中含有豐富的黃酮類化合物，而且這類物質是刺梨果發揮生物活性的基礎成分之一。鑒于此，推測刺梨的葉和桿中應含有豐富的黃酮類物質，研究目的之一即是探明刺梨葉和桿中黃酮化合物含量。銀杏葉因其多種藥理作用而被人所重視，并已得到很好的研究開發應用，其中黃酮即是銀杏葉發揮藥理活性的主要有效成分之一，同時在銀杏葉中，黃酮化合物含量高也為人所熟知。以銀杏葉為參照，對銀杏桿、刺梨葉、刺梨桿中黃酮含量進行檢測，以期確定銀杏桿、刺梨葉和刺梨桿的開發利用價值。

采用紫外分光光度比色法，分別對銀杏葉、銀杏桿、刺梨葉和刺梨桿中總黃酮含量進行測定。此方法操作及樣品處理相對簡便，精密度高、重復性好[17，21]，可方便快速地對銀杏及刺梨葉和桿中總黃酮含量進行測定。試驗結果表明，對于銀杏而言，葉片中黃酮含量遠遠高于桿中黃酮含量，說明銀杏桿的開發利用價值不高；而對于刺梨，葉片和桿之間的黃酮含量差異不大，同時其黃酮含量顯著高于銀杏葉中黃酮含量，說明刺梨的葉、桿均具有較大的開發利用價值。