電針足三里對重度失血性休克大鼠肝臟氧自由基的影響△

陸化梅 于國軍 郭永娟 耿智隆

(1.河南省洛陽正骨醫院(河南省骨科醫院)麻醉科 洛陽 471000；2.解放軍聯勤保障部隊第940醫院麻醉科(原蘭州軍區總醫院) 蘭州 730000)

肝臟是人體的“生化工廠”，失血性休克及再灌注后肝臟可產生大量氧自由基，氧自由基導致的脂質過氧化反應是肝損傷的主要機制之一，也是SIRS、MODS的病理生理基礎[1]。穴位電針對機體的調節受多種因素的影響，本研究以電針刺激足三里穴為切入點，觀察失血性休克后肝臟氧自由基變化，探討其對肝臟的保護作用及可能的機制。

1 材料與方法

1.1 一般材料

健康成年雄性SD大鼠60只，體重280g～320g，購于蘭州大學動物實驗中心。實驗前適應性飼養5d，環境溫度控制在22℃～26℃，濕度控制在40%～70%，自由進食飲水，每12h晝夜交替一次。

1.2 實驗方法

1.2.1重度失血性休克模型制備

實驗前12h禁食，自由飲水,溫度控制在22℃～26℃，腹腔給予3%戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉，右股動脈插管監測平均動脈壓(MAP)和放血，右股靜脈插管用于輸液。采用改良wigger's法[2]復制重度失血性休克模型，30min內使MAP降低至35mmHg，通過放血或自體血回輸維持MAP(35±5)mmHg水平60min。實驗全程動物保持自主呼吸，肛溫控制在(37±0.5)℃。

1.2.2穴位電針處理

穴位定位參照《腧穴名稱與定位》[3]，采用0.3mm×25mm針灸針，刺入雙側足三里穴，進針深度5mm，接電針儀，疏密波2/15Hz，強度0.1mA，30min。非穴位電針組以相同參數刺激雙側足三里穴旁開0.5cm非經非穴處。

1.2.3實驗方案及分組

采用隨機數字表法將60只大鼠隨機分為6組，每組10只。對照組(C組)對照組動物只麻醉，不放血；休克組分為2個亞組：單純休克組(S組)和休克復合穴位電針組(SEN組)，復制重度失血性休克模型，休克1h時間點處死大鼠；乳酸林格液復蘇組分為3個亞組：乳酸林格液復蘇組(LR組)、乳酸林格液復合穴位電針1組(LREN1組)和乳酸林格液復合穴位電針2組(LREN2組)。LREN1組，液體復蘇同時電刺激30min；LREN2組，放血同時電針刺激30min；各復蘇組，在休克1h后給予三倍失血量LR液復蘇，30min內恒速輸注，輸注完畢后，給予生理鹽水6ml/kg·h維持輸注4h。

1.2.4指標檢測

(1)動態觀察各組大鼠不同時間點MAP變化、記錄失血量。

(2)肝組織MDA、SOD、NF-κB、ET-1及iNOS測定：休克組在休克1h即刻，其余各組在復蘇后4h時間點，采用穿刺心臟法處死大鼠，取部分肝組織測定ET-1、NF-κB、iNOS、SOD活性以及MDA蛋白含量。

1.2.5肝組織病理學觀察

取部分肝組織，經甲醛固定、脫水、切片、染色，光鏡下觀察肝組織病理學變化，透射電鏡下觀察肝細胞超微結構改變。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 各組大鼠出血量、MAP基礎值比較

與C組比較，各組休克1h時間點MAP降低，液體復蘇0.5h時間點，各復蘇組MAP上升，復蘇后2h時間點 MAP降低，各復蘇組間差異無統計學意義。

2.2 肝組織中MDA、SOD、NF-κB、ET-1及iNOS的變化

與C組比較，其余各組MDA、NF-κB、ET-1及iNOS升高，SOD降低(P<0.05)；與休克各組比較，各復蘇組以上指標升高，SOD降低(P<0.05)；與LR組比較，LREN1組及LREN2組以上指標降低，SOD升高(P<0.05)，LREN2組降低更明顯，SOD升高更明顯(P<0.05)，見表1。

表1 各組大鼠肝組織SOD、MDA、NF-κB、ET-1及iNOS變化

2.3 肝組織病理學改變

光鏡下觀察(圖1)可見：C組，竇內皮細胞正常；S組，匯管區水腫，中性粒細胞浸潤，枯否細胞增多;SEN組，肝細胞輕度腫脹，少許中性粒細胞浸潤；LR組，肝組織結構紊亂，中央靜脈和血竇淤血，大量中性粒細胞聚集，肝細胞可見大量空泡狀變性及點狀壞死；LREN1組，肝血竇淤血、肝細胞少量空泡變性及中央靜脈及匯管區少量中性粒細胞浸潤；LREN2組，肝細胞輕度腫脹，少量散在中性粒細胞浸潤。

C組

2.4 各組大鼠電鏡下肝組織變化

電鏡下(圖2)可見：C組，肝細胞超微結構基本正常，細胞核結構完整，線粒體及嵴完整，粗面內質網結構完整，排列整齊；S組，細胞膜和核膜變形，線粒體透亮化，嵴疏松，毛細膽管膽汁淤積；SEN組，肝細胞線粒體輕度腫脹，毛細膽管正常；LR組，局灶性肝細胞溶解壞死，細胞染色質邊集，核膜溶解，嵴消失，大量空泡形成； LREN1組，細胞核輕度變異，線粒體腫脹，粗面內質網擴張；LRNEN2組，肝血竇腔輕度增大，枯否細胞線粒體損傷較輕。

C組

3 討論

NO與ET-1在缺血再灌注中扮演雙重角色[4]。而休克后NO的過量生成，主要由于iNOS的表達和活性增高導致。過量的NO與超氧陰離子(·O2-)生成過氧亞硝酸陰離子，進而生成過量氧自由基促進失血性休克再灌注后血管低反應的發生，加重器官損傷。ET是調節血管基礎緊張性的中心遞質，以ET-1的作用最強[5]。在休克早期，組織缺血缺氧促進ET-1的合成和釋放，ET-1選擇性收縮外周和內臟血管參與血壓的維持，保證心腦等重要器官的血供；而在再灌注期，ET-1的升高導致組織灌注不良以及促進大量的NO生成造成組織損傷。因此，ET-1與NO升高程度及失衡，是微循環灌注難以改善、器官進一步損傷進而促進休克向不可逆發展的重要原因之一[1]。本研究結果顯示，失血性休克后，肝臟中ET-1與iNOS均升高，休克期ET-1的升高顯著(P<0.05)，而液體再灌注后iNOS升高顯著(P<0.05)。與LREN1組比較，LREN2組ET-1及iNOS均降低(P<0.05)，肝功能及肝損傷減輕。

MDA是氧自由基代謝產生的脂質過氧化產物，氧自由基產生的可能機制包括黃嘌呤氧化酶形成增多、補體活化、NF-κB激活及兒茶酚胺的自動氧化等。本研究結果顯示，失血性休克及液體復蘇后，NF-κB活化，ET-1及iNOS的生成增多，氧自由基生成增多，肝功能及肝組織損傷明顯，但休克期電針刺激雙側足三里穴能抑制液體復蘇后ET-1及iNOS的合成，減少NF-κB活化及氧自由基的產生，減輕肝臟再灌注損傷。