王曉麗 陳治水 周靜霞
(聯勤保障部隊第九八八醫院檢驗科 焦作 454000)
在全球范圍內結核病都屬于普遍存在的問題,結核桿菌侵犯支氣管、氣管及周圍組織則稱之為支氣管結核,如果是單純病癥患者,難以通過CT或胸片診斷出來,所以很多患者無法及時確診和治療[1]。如今纖維支氣管鏡廣泛應用,可以一并進行診斷和治療,肺泡灌洗后對灌洗液進行檢測,能確診是否存在結核桿菌,不過目前有著多種檢測方法,診斷效果也各不相同[2]。
本次研究對象是我院2017年11月~2018年11月期間收治的56例肺結核患者(納入觀察組),同時選取28例非結核性肺部疾病患者(納入對照組)。觀察組中菌陽肺結核、菌陰肺結核患者各28例,均符合中華醫學會的《肺結核診斷和治療指南》,其中男31例,女25例,年齡19~71歲,平均年齡(42.3±7.5)歲;對照組男15例,女13例,年齡20~72歲,平均年齡(42.7±7.4)歲。兩組基線資料經過對比,差異無統計學意義(P>0.05)。
1.2.1灌洗液采集
根據患者實際情況選擇適合規格的纖維支氣管鏡,術前禁食6h,術前30min肌肉注射阿托品、霧化吸入2%利多卡因行鼻腔喉頭表面麻醉;術中將纖維支氣管鏡經鼻腔送入聲門后,將2%利多卡因滴入氣管行局部麻醉,過程中要行鼻導管供氧,還要監測血樣飽和度、呼吸、心率等指標;纖維支氣管鏡抵達病變位置后,活檢、刷檢后進行肺泡灌洗,共灌洗3次,之后吸出灌洗液放置于無菌瓶中,采集20mL進行實驗室檢驗。
1.2.2熒光定量PCR檢測法(FQ-PCR)
取1~1.5mL灌洗液進行離心處理,時長5min,速度為12 000r/min,去除上層清液,在沉淀物中加入1mL無菌生理鹽水混勻,再次離心處理5min,速度為12 000r/min,去除上層清液,將50μL DNA提取液放入沉淀物中混勻,放入100℃恒溫環境中10min;之后放在冰箱中冷卻到室溫后,再次離心處理5min,速度12 000r/min,取2μL上層清液置于PCR反應管中,以8 000r/min速度離心處理數秒,再將其放在PCR儀中,進行擴增處理;先在93℃環境下預變性2min,再依次93℃45s、55℃60s,共計10個循環,之后再依次93℃45s、55℃120s,共計30個循環;最后進行熒光檢測,對結果進行解讀。
1.2.3結核抗體檢測法(膠體金法)
將2滴封閉液滴入反應板的反應孔中,等待薄膜吸入;取40μL灌洗液標本,滴入反應孔中,等待薄膜吸入;之后滴入6滴洗活液,等待薄膜吸入;再滴入2滴金標液,等待薄膜吸入。質控點為紅色,反應孔內存在紅色斑點則為陽性。
1.2.4培養檢測法
灌洗液標本行常規處理,再根據《全國結核病菌學檢驗標準化規程》操作,分離培養時應用全自動分枝桿菌培養監測儀。
1.2.5涂片檢測法
以中國防癆協會發布的《結核病診斷細菌學檢驗規程》為操作標準,用萋-尼氏抗酸染色法,結果觀察用油鏡,陽性判斷標準為≥3條抗酸桿菌/300視野。
對比分析4種檢測的結核桿菌陽性率。
使用SPSS23.0軟件對研究中所得數據進行記錄和分析,計數資料采用率(%)表示,行χ2檢驗。當組間差異較大時,呈現統計學意義(P<0.05)。
菌陽肺結核組檢測陽性率:FQ-PCR法明顯高于結核抗體法、涂片法,差異呈統計學意義(χ2=10.220/31.540,P<0.05);FQ-PCR法與培養法相同,差異無統計學意義(χ2=0.000,P>0.05)。菌陰肺結核組檢測陽性率:FQ-PCR法明顯高于結核抗體法、涂片法,差異呈統計學意義(χ2=14.292/39.030,P<0.05);FQ-PCR法略高于培養法,差異無統計學意義(χ2=2.276,P>0.05)。與對照組相比較,菌陽肺結核組和菌陰肺結核除了涂片法,其它方法均明顯更高,組間對比差異呈統計學意義(P<0.05)。4種檢測方法有著不同的敏感性,菌陰肺結核和菌陽肺結核組FQ-PCR法、培養法的陽性率均明顯高于結核抗體法和涂片法,差異存在統計學意義(P<0.05),見表1。
表1 4種檢測中結核分支桿菌的陽性率[n(%)]
結核病一直都是影響人類健康且具有傳染性的疾病,為了控制病情蔓延、提升患者的生存質量,要及早進行診斷和治療[3]。目前該病的診斷方式主要是細菌學檢驗,痰涂片鏡檢是常規方法,具有經濟、無創、簡單等特點,不過會受到多種因素干擾,所以準確性不高,特別是在支氣管結核病的診斷中效果不理想,所以逐漸被灌洗液檢測替代。通過纖維支氣管鏡獲得肺泡灌洗液標本,該標本中細菌濃度高、污染低,從而診斷結果更有保障,但是不同的檢測方法對結核桿菌的檢測結果不同,診斷效果也存在一定差異性。
涂片檢測法屬于經濟、快捷、簡便的方式,不過檢查率僅為30%~40%,也不能區分非結核桿菌和結核桿菌,所以靈敏度、特異性均不高;且檢測液難以控制定量,也就影響了最終診斷結果。如今,分子生物學技術不斷更新,FQ-PCR檢測技術被逐漸應用,它集光譜技術、雜交技術、核酸擴增技術于一身,檢測環境為封閉狀態,可以避免受到外界因素干擾,配合特異性探針隨時檢測,實現自動分析一體化,結核桿菌DNA<10copies也能穩定檢測出。
本次研究中,菌陽肺結核組FQ-PCR法的陽性率為89.29%,明顯高于結核抗體法的50%、涂片法的14.29%,差異呈統計學意義(P<0.05);菌陰肺結核組的陽性率為82.14%,明顯高于結核抗體法的32.14%,差異呈統計學意義(P<0.05);對照組與菌陰肺結核組對比,FQ-PCR法陽性率差異顯著,呈現統計學意義(P<0.05)。由此可證實,在支氣管結核診斷中,熒光定量PCR檢測法有著較高的診斷準確率,而且檢測速度快,如果為了進一步提升診斷效果可以與其它檢測方法聯合使用。