尿源性膿毒癥患者血清H-FABP、IL-9、sTREM-1水平及相關性研究

張銘立,劉建琳,魏 偉,程 琳,趙艷福

膿毒癥是臨床中較為常見的一種并發癥，屬于一種全身炎癥反應綜合征，其發病主要是因為感染導致機體出現應激反應。尿源性膿毒癥是因為患者泌尿系統感染導致發病，在膿毒癥中占9%～30%[1]。尿源性膿毒癥在行泌尿外科腔鏡手術患者中常發生，具有較高的病死率[2]，因此引起了廣大專家和學者的關注。心型脂肪酸結合蛋白(heart-type fatty acid binding protein, H-FABP)作為一種可溶性蛋白質，其功能與肌紅蛋白相似，但是其分子質量低，主要在細胞質中廣泛存在，常作為心肌損傷標志物[3]，目前在膿毒癥患者中研究也越來越多。Th9細胞屬于一種新發現的Th細胞亞群，已經有研究證實，Th9細胞在過敏反應、自身免疫性疾病的發生過程中發揮著重要作用，白細胞介素-9(interleukin-9, IL-9)是Th9細胞產生的一種代表性因子[4]?？扇苄运铇蛹毎|發受體1(soluble triggering receptors expressed on myeloid cells-1, sTREM-1)主要是通過TREM-1溶解產生，主要存在于血液和尿液中，參與急性炎癥反應過程[5]。本研究旨在探討H-FABP、IL-9、sTREM-1在尿源性膿毒癥患者血清中的水平及相關性，為臨床研究尿源性膿毒癥的發病機制提供理論依據。

1 資料與方法

1.1納入和排除標準 ①納入標準：所有患者均符合《嚴重膿毒癥和膿毒癥休克管理指南》中關于膿毒癥的診斷標準[6]：尿源性感染，序貫器官衰竭評分(sequential organ failure assessment, SOFA)≥2分；所有患者均進行中段尿細菌培養；患者及其家屬對本研究均知情，簽署知情同意書。②排除標準：合并腫瘤、血液疾病者；免疫功能異常者；合并全身性炎癥反應綜合征者；精神異?；颊?；進行免疫調節治療者。本研究經過我院倫理委員會批準。

1.2臨床資料 選取2019年5月—2020年5月在我院就診的符合以上納入標準和排除標準的尿源性膿毒癥患者70例為尿源性膿毒癥組，其中男42例，女28例；年齡39～78(55.58±15.60)歲。另取同期在我院就診非尿源性膿毒癥患者70例為非尿源性膿毒癥組，其中男40例，女30例;年齡40～80(57.00±16.00)歲;原發感染部位:肺部感染35例，腹腔感染19例，導管相關性感染12例，膽道感染4例。2組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.3方法

1.3.1不同亞型膿毒癥評估及分組：①參考《嚴重膿毒癥和膿毒癥休克管理指南》中的診斷標準：膿毒癥為感染明確，SOFA≥2分；嚴重膿毒癥為感染明確，SOFA≥2分，伴有急性器官功能障礙；膿毒癥休克為患者在進行體液復蘇治療后，需要輔助血管活性藥物維持血壓平衡，平均動脈壓>65 mmHg，血乳酸≥2 mmol/L。按照該診斷標準，將70例尿源性膿毒癥患者分為普通膿毒癥組44例，嚴重膿毒癥組16例，膿毒癥休克組10例。②急性腎損傷評估：根據改善全球腎臟病預后組織(KDIGO)中關于急性腎損傷的診斷標準[7]。按照膿毒癥是否合并急性腎損傷，分為腎損傷組18例，非腎損傷組52例。

機床廠原有的主電路需要完善的二次回路控制保護，其中的斷路器起到主要保護作用，斷路器控制回路的主要功能是對斷路器進行通、斷操作。原有的二次回路過于簡單，不能顯示斷路器分、合狀態，也沒有相應的報警、指示信號，并且當發生過流時，不能及時控制斷路器跳閘，給生產工作帶來不便，新的斷路器控制回路要能夠解決上述問題。

2.4H-FABP、IL-9、sTREM-1水平相關性 H-FABP與IL-9呈正相關(r=0.515，P=0.001)，H-FABP與sTREM-1呈正相關(r=0.361，P=0.002)，IL-9與sTREM-1呈正相關(r=0.309，P=0.009)。見圖1。

2.2不同亞型膿毒癥患者H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比較 與普通膿毒組比較，嚴重膿毒癥組、膿毒癥休克組H-FABP、IL-9、sTREM-1水平均升高，且膿毒癥休克組H-FABP、IL-9、sTREM-1水平高于嚴重膿毒癥組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2 結果

2.3腎損傷與非腎損傷腎源性膿毒癥患者H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比較 腎損傷組H-FABP、IL-9、sTREM-1水平均高于非腎損傷組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表1 2組膿毒癥患者H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比較

尿源性膿毒癥發病特點是較隱匿且病情進展迅速，嚴重時會導致患者引發膿毒癥休克，甚至是死亡，目前關于其發病機制尚不明確[8]。臨床中大部分泌尿系結石表現為感染性結石，其結石成分不同含有的細菌內毒素也存在差異，結石容易引起患者出現尿潴留、泌尿系統梗阻，導致細菌逆行進入血液，最終導致尿源性膿毒癥發生[9-10]。目前臨床中主要采用C反應蛋白、降鈣素原、白細胞計數等方式對膿毒癥患者進行診斷，但是其特異性較低，在患者療效及病情嚴重程度評估等方面存在明顯的不足[11]，不能滿足臨床需求。

表2 不同亞型尿源性膿毒癥患者H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比較

2.1H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比較 尿源性膿毒癥組H-FABP、IL-9、sTREM-1水平均高于非尿源性膿毒癥組，差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表3 尿源性膿毒癥是否合并急性腎損傷患者的H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比較

1.3.2H-FABP、IL-9、sTREM-1水平檢測：抽取2組入院當天空腹靜脈血5 ml，離心速度3000 r/min，10 min后提取上層血清，采用酶聯免疫吸附法檢測H-FABP、IL-9、sTREM-1水平。將提前稀釋好的血液標本100 μl加入相應的微孔板反應孔中，第1孔只加樣品稀釋液為零孔，混合均勻，在37℃下處理90 min，甩去孔內液體，吸干水分；將準備好的抗體加入到每孔中0.1 ml，在37℃下處理60 min，底物四甲基聯苯胺(TMB)空白孔不加；甩去孔內液體，每孔中加滿磷酸鹽緩沖液(PBS)0.01 mmol/L，浸泡1～2 min，甩去孔內液體，吸干水分；每孔中加入90 μl的TMB，避光處理15～20 min；每孔中加入90 μl TMB終止液，即藍色變為黃色。在波長450 nm處分析H-FABP、IL-9、sTREM-1的水平。

式中：和分別為語言變量和對應的三角模糊數，當Rij?時，Fij表示Rij相對于產生的損失，Rij越優，產生的損失越大；當Rij時，Fij表示Rij相對于產生的損失，Rij越劣，產生的損失越大；當時，Fij表示Rij相對于既無獲得收益也無產生損失。

圖1 尿源性膿毒癥患者H-FABP、IL-9、sTREM-1水平相關性A. IL-9與H-FABP相關性；B. sTREM-1與H-FABP相關性；C. sTREM-1與IL-9相關性；H-FABP為心型脂肪酸結合蛋白，IL-9為白細胞介素-9，sTREM-1為可溶性髓樣細胞觸發受體

3 討論

應對全球氣候變化是人類共同的責任，我們必須增強適應氣候能力，從減災走向低碳經濟，增強區域間合作和政府政策的協調，加強關于氣候變化有關問題更多的研究，把全球氣候變化帶來的經濟方面的危機變成經濟未來發展的機遇，努力緩解全球氣候變暖問題，促進可持續發展。

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H-FABP在人體多種器官和組織中廣泛存在，當心肌細胞發生損傷，H-FABP會從心肌細胞向血液中釋放，導致血液中H-FABP含量增加[12]。既往研究證實，大多數膿毒癥患者伴隨心肌損傷癥狀[13-14]。但目前關于H-FABP對膿毒癥患者病情嚴重程度評估的相關研究較少。本研究結果顯示，尿源性膿毒癥組H-FABP高于非尿源性膿毒癥組，與齊洪娜等[15]研究結果一致；該研究認為在膿毒癥心肌損傷患者中H-FABP顯示高表達。本研究結果同時顯示，膿毒癥休克組和腎損傷組H-FABP水平明顯高于嚴重膿毒癥組和非腎損傷組，提示IL-9可能參與了尿源性膿毒癥的發病過程。

硫酸銅溶液在濃縮結晶槽內完成蒸發、冷卻結晶之后，邊攪拌邊用氣動雙隔膜泵抽取至真空帶式過濾機進料口；硫酸銅晶體在帶式過濾機上過濾、洗滌、吸干［1］，然后通過埋刮板給料運輸機輸送至流化床受料斗，進入干燥包裝工序。實驗數據表明過濾后的硫酸銅含水率在5%～10%，與原過濾器含水5%～9%基本一致，可滿足后段工序流化床干燥設備的工藝要求。

IL-9是Th9細胞中主要的細胞因子，屬于一種重要的炎性因子，在機體生理、免疫過程中發揮著關鍵性的作用。相關研究指出，在小鼠模型中對其注射致死劑量的綠膿桿菌再注射IL-9，小鼠死亡率顯著降低，提示Th9細胞在膿毒癥中起到一定的保護功能[16]。本研究結果顯示，尿源性膿毒癥組IL-9高于非尿源性膿毒癥組，且膿毒癥休克組和腎損傷組IL-9水平最高，提示IL-9參與了尿源性膿毒癥的發病。

TREM-1屬于免疫球蛋白超家族中的主要成員之一，主要在成熟的中性粒細胞、單核-巨噬細胞等細胞表面進行表達，發揮一定的促炎作用。在一些感染性疾病如化膿性關節炎、肺炎、腹膜炎中，患者體液中sTREM-1水平相對較高，并且與患者感染的嚴重程度有關[17-20]。Aksaray等[21]學者研究指出，sTREM-1作為TREM-1可溶性形式，在膿毒癥的臨床診斷中具有一定的價值。本研究證實，尿源性膿毒癥患者血清中sTREM-1濃度較高。Alkan等[22]研究指出，sTREM-1水平的高低與膿毒癥患者病情嚴重程度呈正相關。本研究結果顯示，尿源性膿毒癥組sTREM-1高于非尿源性膿毒癥組，且膿毒癥休克組sTREM-1水平最高；與上述文獻報道一致。在急性腎損傷早期，腎小管、腎間質均可出現不同程度的損傷，尿液中的各種生物標志物異常，在疾病早期預警中起到重要作用[23-24]。本研究結果顯示，腎損傷組sTREM-1水平高于非腎損傷組，提示sTREM-1可能參與了尿源性膿毒癥急性腎損傷過程。本研究結果顯示，與嚴重膿毒癥組和非腎損傷組比較，膿毒癥休克組和腎損傷組H-FABP、IL-9、sTREM-1水平均顯著升高，提示H-FABP、IL-9、sTREM-1水平與尿源性膿毒癥的病情發展有關。H-FABP、IL-9、sTREM-1三者之間呈正相關，并且隨尿源性膿毒癥病情發展，其含量水平不斷升高。

綜上所述，H-FABP、IL-9、sTREM-1在尿源性膿毒癥患者血清中表達水平升高，與患者病情嚴重程度、有無急性腎損傷有關；且三者之間呈正相關，并參與了尿源性膿毒癥的發病過程，為臨床研究尿源性膿毒癥發病機制提供了理論依據。