miR-122-5p與上皮性卵巢癌臨床病理特征關系及手術預后價值

劉 靜 趙宏霞 吳華梅 江 利 劉彥霞 韓 克

泰康仙林鼓樓醫院(南京,210046)

上皮性卵巢癌(EOC)惡性程度較高，對符合手術指征的患者及時手術切除是延長生存時間的最可靠方法[1-2]。但是接受手術治療患者，術后生存結局存在明顯差異，推測存在某些影響患者治療預后的關鍵因素。miR-122-5p已被發現在肝癌的發生發展過程中扮演重要角色[3]，且基礎研究[4]指出miR-122-5p可通過靶向ERCC1而抑制卵巢癌HO8910細胞的增殖、侵襲等惡性生物學行為，但關于miR-122-5p與EOC治療預后的影響研究目前開展極少。本文探討EOC組織中miR-122-5p的表達對患者病情及治療預后的影響，為EOC發病機制、術后死亡風險分層、治療方案制定等提供指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年8月-2017年8月在本院接受手術治療的EOC患者作為研究對象。納入標準：①術中病理診斷為EOC，符合國際婦產科聯合會(FIGO)、世界衛生組織制定的分類分級標準；②順利完成手術、無嚴重手術相關并發癥；③配合治療、病例資料完整；④本人簽署知情同意書。排除標準：①術前接受放化療、激素治療等；②術前存在嚴重血液系統疾病、自身免疫性疾病、其他原發惡性腫瘤性疾病等可能影響EOC患者治療結局的其他情況；③拒絕隨訪或者隨訪過程失聯病例。本研究經院倫理委員會審批。

1.2 miR-122-5p測定

術中取患者腫瘤組織、癌旁正常組織(距離腫瘤邊緣3cm的正常卵巢組織)標本，置液氮罐中凍存。取腫瘤組織、癌旁正常組織標本各100mg，液氮碾磨法碾磨成粉末后加入1ml Trizol裂解液，參照說明書步驟提取總RNA。使用逆轉錄試劑盒逆轉錄RNA獲得cDNA，內參為U6。在熒光定量PCR儀上進行實時熒光定量PCR，引物序列如下：U6上游引物5’-TGCGAACGATGCAAGCTGA-3’，下游引物5’-GCGAATGAGCGTGCGAAG-3’； miR-122-5p上游引物5’-CTAGAGCTAAGCGAGAG-3’，下游引物5’-TGCAAGCTGAGCGGTAAG。反應體系包括：引物及探針Mix 1μl、TaqMan 通用混合物溶液10μl、cDNA 1.33μl、無核酸酶的水7.67μl。反應條件：95℃預變性10min、95℃變性15s、60℃復性60s，上述過程共計45個循環。2﹣△△Ct法計算miR-122-5p相對表達量。

1.3 病例資料收集及隨訪

查閱所有入組患者的病例資料采集基本人口學及臨床病理特征信息，包括年齡、組織類型、分化程度、臨床分期、淋巴結轉移。術后24h開始隨訪，通過電話、門診復查等方式進行，隨訪截止日期為2020年8月1日或該時間點前患者死亡時間。記錄患者的總生存時間(術后24h至患者死亡時間)。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 一般臨床資料

共納入118例，年齡(56.7±12.8)歲(39～77歲)，術前體質指數(BMI)(23.7±1.9)kg/m2(21～26 kg/m2)。

2.2 miR-122-5p表達水平與生存結局及ROC曲線

患者腫瘤組織中miR-122-5p(0.31±0.08)低于癌旁正常組織(0.40±0.11)(P<0.05)。隨訪118例患者，隨訪期內死亡49例歸于死亡組，余69例歸于存活組。死亡組腫瘤組織中miR-122-5p(0.26±0.06)低于存活組(0.34±0.11)(P<0.05)，癌旁正常組織中miR-122-5p(0.41±0.08)與存活組(0.40±0.09)無差異(P>0.05)。ROC曲線顯示，腫瘤組織中miR-122-5p表達水平預測術后隨訪期死亡的最佳截斷值為0.30，AUC為0.808(95%CI 0.738～0.891)，敏感度68.1%、特異度75.5%。見圖1(封三)。

2.3 miR-122-5p表達水平與預后生存

根據ROC曲線最佳截斷值將所有入組的EOC患者分為高表達組(miR-122-5p>0.30)64例、低表達組(miR-122-5p≤0.30)54例。高表達組術后生存結局優于低表達組(P<0.05)。見圖2(封三)。

2.4 miR-122-5p表達水平與臨床病理特征

高表達組、低表達組患者的年齡、組織類型、分化程度分布無差異(P>0.05)，FIGO分期、淋巴結轉移分布有差異(P<0.05)。見表1。

表1 不同miR-122-5p表達水平患者臨床病理特征比較[例(%)]

2.5 影響EOC患者術后生存多因素Cox回歸分析

以EOC患者術后生存結局作為因變量(0=生存，1=死亡)，單因素分析中有差異的指標納入多因素Cox回歸分析。發現，miR-122-5p≤0.30、FIGO分期Ⅲ期、合并淋巴結轉移是EOC患者術后死亡的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 影響EOC患者術后生存的多因素分析

3 討論

miR-122-5p是一種重要的microRNA類型，其表達改變可影響下游靶基因及相關信號通路的功能變化，進而引發一系列疾病的發生發展。已有研究指出miR-122-5p與消化系統疾病的發生相關，如Matsuzaki[5]研究指出miR-122-5p可能通過影響氧化應激參與肝損傷發生；PEI[6]發現miR-122-5p在胃癌組織中表達下調并發揮腫瘤抑制作用。卵巢癌的發生發展也涉及較多microRNA，機體miR-122-5p水平是否對卵巢癌病情及預后產生直接影響目前尚無明確結論。本文中發現EOC患者腫瘤組織中存在miR-122-5p異常低表達，這與苗培田[4]結論吻合；術后死亡組患者腫瘤組織中miR-122-5p表達水平較低，推測miR-122-5p異?？赡苡绊懥薊OC患者的術后生存結局。

本文中經ROC曲線，miR-122-5p預測EOC患者術后生存結局的最佳截斷值，并以此對EOC患者分組發現，高表達組術后生存結局優于低表達組。提示miR-122-5p低表達可能對EOC患者術后生存情況產生一定負面影響，但miR-122-5p低表達產生影響的具體機制不明，還有待后續深入研究。

本研究進一步探討EOC患者臨床病理特征與腫瘤組織中miR-122-5p表達關系發現，FIGO分期、淋巴結轉移等與miR-122-5p表達相關，主要表現為miR-122-5p低表達者FIGO分期較高、伴淋巴結轉移等概率更高。提示miR-122-5p表達減少甚至缺失可能導致EOC患者臨床病理特征不理想、病情較為嚴重，術后復發及死亡風險增高。分析EOC患者隨訪期死亡的影響因素發現，miR-122-5p≤0.30、FIGO分期Ⅲ期、深肌層浸潤、合并淋巴結轉移等均是EOC患者術后死亡的獨立危險因素。miR-122-5p異常低表達可能由于解除了對癌細胞惡性行為的抑制作用，導致術后殘留微小腫瘤灶迅速增殖并導致局部復發及遠處轉移[7-9]。腫瘤分期較高、浸潤較深、淋巴結轉移已在諸多國內外研究[10-12]中被明確是惡性腫瘤復發轉移及預后不良的危險因素，本文結果與其吻合。

綜上所述，在可接受手術治療的EOC患者中，miR-122-5p低表達是患者病情嚴重、術后生存結局不佳的重要影響因素。該分析可能為臨床工作在EOC治療方案的選擇等臨床實踐方面提供一定幫助。