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乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌群體感應及腐敗活性的抑制作用

2021-09-27 06:47劉佳宜李婷婷勵建榮申照華郭曉華
食品科學 2021年17期
關鍵詞:乙基麥芽單胞菌

劉佳宜,李婷婷*,勵建榮,*,謝 晶,林 洪,王 轟,申照華,郭曉華

(1.渤海大學食品科學與工程學院,生鮮農產品貯藏加工及安全控制技術國家地方聯合工程研究中心,遼寧 錦州 121013;2.大連民族大學生命科學學院,遼寧 大連 116600;3.上海海洋大學食品學院,上海 201306;4.中國海洋大學食品科學與工程學院,山東 青島 266100;5.蓬萊京魯漁業有限公司,山東 煙臺 265600;6.山東美佳集團有限公司,山東 日照 276800)

微生物是在加工、運輸和貯存過程中引起食物腐敗的重要因素,食品中的微生物利用食物營養物質促進自身的生長繁殖,從而導致食品的腐敗變質[1-2]。Gram等[3]將微生物的腐敗潛力定義為純培養條件下產生與特定產品腐敗相關代謝物的能力。許多細菌能夠在自身分泌的化學信號分子即自誘導分子的調控下,以細菌種群密度來調節表型特征,當自誘導分子水平隨著細菌密度逐漸增高至某一閾值后,會與一些轉錄調節子結合,從而誘導或抑制某些基因的表達,這種細菌行為被稱為群體感應(quorum sensing,QS)[4]。這些自誘導分子在革蘭氏陽性菌中被鑒定為寡肽,在革蘭氏陰性菌中被鑒定為?;呓z氨酸內酯(N-acyl-homoserine lactones,AHLs)[5]。研究表明,細菌的許多生理功能均由QS系統調節,如生物發光、毒力因子、能動性、生物被膜的形成等[6]。

我國作為水產品生產和銷售大國,水產品養殖產量占全世界的70%,其出口額已連續6 年位居世界第一[7]。水產品中含有大量的水分和豐富的優質蛋白,這使其較一般生鮮食品更易受到微生物侵染[8],因此QS系統在水產品腐敗變質過程中起著重要作用。氣單胞菌屬(Aeromonassp.)為革蘭氏陰性、兼性厭氧菌,以運動型桿菌為主。該屬迄今已確認30 個種,其中嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)、豚鼠氣單胞菌(Aeromonas caviae)、殺鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida)等與人類和動物感染及食品腐敗關系密切[9],相關研究較多。殺鮭氣單胞菌是多種養殖魚類的主要水產養殖病原菌,同時也是冰藏魚類中的腐敗菌,其腐敗活性受自身分泌AHLs介導的QS系統調控。因此,抑制QS系統成為水產品保鮮研究的新方向。

QS抑制劑是以QS系統為靶點競爭性抑制該系統,在不殺死或不干擾細菌正常生命活動的前提下有效調控菌群的結構和功能,抑制細菌生物被膜和毒力因子的產生以及其他致腐、致病基因的表達,具有更好的生態安全性和環境友好性[10]。與傳統抗菌劑相比,QS抑制劑不會殺死細菌或陰滯細菌的生長,被認為不會導致耐藥菌株的形成。據報道,肉桂醛揮發油成分及其類似物對多種細菌具有QS抑制作用,通過降低LuxR家族蛋白的DNA結合能力抑制受QS調控的毒力因子[11]。李晴等[12]報道花椒提取物對嗜水氣單胞菌生物被膜、胞外蛋白酶活性和泳動現象的抑制作用呈濃度依賴性,且能顯著抑制嗜水氣單胞菌AHLs的產生,推測花椒提取物可能通過降低AHLs水平抑制嗜水氣單胞菌QS系統調控基因的表達。但是天然QS抑制劑提取率差、操作過于復雜,并且提取所得單體物質在一定劑量下的安全性有待商榷,因此還沒有得到廣泛應用。

乙基麥芽酚是一種人工合成的廣譜高效增香劑,常用于肉制品、罐頭、糖果、餅干、面包、調味品等食品。乙基麥芽酚不但可以通過與肉中的氨基酸相互作用提高鮮味,而且可以與肌紅蛋白中的鐵離子發生絡合反應,保持肉色。一些研究還表明,乙基麥芽酚具有抑酸、抑苦、去腥、防腐等功效[13]。因此,本研究以乙基麥芽酚為QS抑制劑,探究乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌QS現象的抑制作用,以期拓寬乙基麥芽酚的應用范圍,使其成為以QS為靶點的新型水產品保鮮劑,同時為水產品保鮮提供新思路。

1 材料與方法

1.1 菌種、材料與試劑

QS生物報告菌株紫色桿菌(Chromobacterium violaceum026,CV026)為C.violaceumATCC 31532的mini-Tn5突變體。該菌株自身不產生AHLs信號分子,且對卡那霉素不敏感,當添加外源AHLs時,會產生紫色桿菌素,通過顏色變化可檢測短鏈AHLs信號分子(N-丁?;?L-高絲氨酸內酯(N-butyryl-L-homoserine lactone,C4-HSL)~C8-HSL)的存在。殺鮭氣單胞菌由腐敗大菱鲆中分離獲得。上述兩種菌株均由遼寧省食品安全重點實驗室提供,在28 ℃、160 r/min搖床培養。

乙基麥芽酚(純度99%) 上海阿拉丁生化科技股份有限公司;LB肉湯、LB營養瓊脂 青島高科園海博生物技術有限公司;卡那霉素、十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS) 國藥集團化學試劑有限公司;AHLs信號分子(C4-HSL、C6-HSL、C8-HSL、C10-HSL、C12-HSL、C14-HSL) 美國Sigma公司;結晶紫 天津致遠化學試劑有限公司;正丁醇、冰乙酸、濃硫酸、醋酸異戊酯、苯酚 天津風船化學試劑有限公司;脫脂奶粉 美國BD公司;瓊脂粉、蛋白胨、胰蛋白胨、D(+)-葡萄糖 北京奧博星生物技術有限責任公司;氯化鈉 天津市優譜化學試劑有限公司;鋅片上海邁砷化工有限公司。

1.2 儀器與設備

W-CJ-2FD超凈工作臺 蘇州安泰空氣技術有限公司;立式壓力蒸汽滅菌鍋 上海申安醫療器械廠;LRH系列生化培養箱 上海一恒科技有限公司;MS105UD電子分析天平 瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司;Czone系列抑菌圈測定及菌落計數儀 杭州迅數科技有限公司;iMark酶標儀 美國Bio-Rad公司;Biofuge Stratos冷凍高速離心機 美國Thermo Fisher公司;SS-4800場發射掃描電子顯微鏡 日本日立公司;7890N/5975氣相色譜-質譜(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)聯用儀 美國Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 最小抑菌濃度測定及QS抑制劑初步檢測

參考魏宇超等[14]的方法并稍加修改。利用牛津杯打孔法測定乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌的最小抑菌濃度。將菌株CV026和殺鮭氣單胞菌按體積比2∶100接種于LB肉湯中,28 ℃、160 r/min搖床培養,過夜活化至二代,到達對數生長期后與LB營養瓊脂混勻,用牛津杯打孔。利用體積分數50%甲醇溶液配制不同質量濃度(0~10 mg/mL)乙基麥芽酚溶液,并過0.22 μm濾膜除菌備用。待LB營養瓊脂凝固后,將不同質量濃度(0~10 mg/mL)乙基麥芽酚溶液加入孔中,并添加體積分數50%甲醇溶液作為陰性對照。將平板置于28 ℃生化培養箱中靜置培養1~2 d,觀察CV026和殺鮭氣單胞菌菌落生長情況確定乙基麥芽酚最小抑菌濃度。

將CV026按體積比2∶100接種于LB肉湯中,28 ℃、160 r/min搖床培養,過夜活化至二代,培養至對數生長期后將菌液以體積比1∶100混入200 mL含20 μg/mL卡那霉素的LB營養瓊脂中,并添加20 μg/mL C6-HSL混勻后倒板,待其凝固后牛津杯打孔。將100 μL亞抑菌濃度的乙基麥芽酚溶液加入孔中,以100 μL體積分數50%甲醇作為陰性對照。將平板置于28 ℃生化培養箱中靜置培養1~2 d,觀察乙基麥芽酚對紫色桿菌素生成的抑制情況。

1.3.2 乙基麥芽酚處理后CV026生長情況分析及紫色桿菌素產量的測定

參照Zhang Ying等[15]的方法并略加修改。取過夜活化2 次、培養至對數生長期的CV026,以體積比1∶100接種于10 mL含20 μg/mL C6-HSL的LB肉湯中,添加乙基麥芽酚使其終質量濃度分別為0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL。并以添加100 μL體積分數50%甲醇溶液為陰性對照,置于28 ℃、160 r/min搖床培養48 h。利用酶標儀在595 nm波長處測定菌液密度,確定乙基麥芽酚對CV026生長的影響。向1.5 mL離心管中依次添加300 μL上述培養后的菌液,加入150 μL 10 g/100 mL SDS溶液振蕩裂解10 s,再加入600 μL正丁醇振蕩5 s提取紫色桿菌素。最后于10 000 r/min離心5 min,依次吸取離心后上清液于96 孔板中,利用酶標儀在595 nm波長處測定上清液OD值,每處理組取3 個平行。

1.3.3 乙基麥芽酚處理后殺鮭氣單胞菌信號分子產生量的測定

AHLs粗提液制備:將殺鮭氣單胞菌過夜活化至對數生長期,以體積比為1∶100接種于LB肉湯中,添加終質量濃度0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL乙基麥芽酚溶液,并以體積分數50%甲醇溶液作為陰性對照,28 ℃、160 r/min搖床培養24 h。培養后的菌液10 000 r/min離心10 min,留上清液。加入等體積含體積分數0.1%冰乙酸的乙酸乙酯溶液提取,取乙酸乙酯層加入一定量的無水硫酸鈉,于35 ℃、真空度0.1 MPa旋轉蒸發去除乙酸乙酯,取適量甲醇溶解殘留物,-20 ℃保存待用。

GC-MS測定:以甲醇為溶劑配制6 種AHLs的混合標準溶液,測定參數參考梅永超等[16]的方法,根據信號分子保留時間定性,以峰面積大小表示信號分子產生量。

1.3.4 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌生物被膜的影響分析

1.3.4.1 乙基麥芽酚處理后殺鮭氣單胞菌生物被膜形成率的測定

參考Bouyahya[17]和Lee[18]等的方法并稍加修改。將過夜活化至對數生長期的殺鮭氣單胞菌以體積比為1∶100接種于LB肉湯,加入乙基麥芽酚溶液,使其終質量濃度為0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL,分別以100 μL體積分數50%甲醇溶液和終質量濃度20 μg/mL C12-HSL信號分子為陰性和陽性對照。利用酶標儀在595 nm波長處測定菌液密度,確定乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌生長的影響。

取1 mL上述培養液分裝于1.5 mL無菌離心管中,28 ℃生化培養箱中靜置培養48 h。取菌液于595 nm波長處測定OD值后,棄去菌液,用無菌水清洗3 次,無菌風干燥30 min,使生物被膜固定在離心管內壁后,取1 mL 0.2 g/100 mL結晶紫染色15 min。棄去染色液,無菌水清洗3~5 次至干凈透明,再用體積分數33%冰乙酸溶解固定的染色液,最后用酶標儀測定595 nm波長處冰乙酸溶解后染色液的OD值,每處理組取3 個平行。生物被膜的相對形成率按下式計算。

1.3.4.2 乙基麥芽酚處理后殺鮭氣單胞菌生物被膜形態的觀察

參考Chang Aiping等[19]的方法并稍加修改。將經拋光機除去表面氧化層的鋅片剪成10 mm×10 mm,先后置于無水乙醇和去離子水中超聲30 min,烘干后滅菌備用。將10 mL含終質量濃度分別為0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL乙基麥芽酚的LB肉湯加入無菌培養皿中,并將經2 次過夜活化至對數生長期的殺鮭氣單胞菌以體積比為1∶100接種其中,混勻后放入滅菌鋅片,28 ℃生化培養箱靜置培養72 h。分別以100 μL體積分數50%甲醇溶液和終質量濃度20 μg/mL的C12-HSL信號分子為陰性和陽性對照。

培養72 h后取出鋅片,無菌水沖洗3~5 次,放入4 ℃預冷的2.5%戊二醛溶液中浸泡4 h,取出鋅片后用不同體積分數的乙醇溶液梯度洗脫,無水乙醇脫水2 次后,經乙酸異戊酯置換2 次,無菌風干燥。噴金處理后掃描電子顯微鏡觀察。

1.3.5 乙基麥芽酚處理后殺鮭氣單胞菌胞外蛋白酶活力的測定

將過夜活化至對數生長期的殺鮭氣單胞菌以體積比1∶100接種于含終質量濃度分別為0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL乙基麥芽酚的肉湯中,分別以100 μL體積分數50%甲醇溶液和100 μL終質量濃度20 μg/mL的C12-HSL信號分子為陰性和陽性對照,28 ℃、160 r/min振蕩培養12 h以產生胞外蛋白酶。培養結束后用無菌濾器過濾菌液,取濾液待用。根據Abinaya等[20]的方法配制牛奶瓊脂固體培養基,待其凝固后用預先滅菌的牛津杯打孔,取200 μL上述濾液于孔中,平板置于28 ℃生化培養箱靜置培養24 h,每處理組制作3 個平行,觀察并測量透明圈直徑。

殺鮭氣單胞菌是一種運動細菌,能在軟表面、微硬表面和成群半固體表面泳動[21]。參考文獻[22]的方法配制群集、泳動培養基。群集培養基配方:1 g/100 mL蛋白胨、0.5 g/100 mL氯化鈉、0.5 g/100 mLD(+)-葡萄糖、0.5 g/100 mL瓊脂粉。泳動培養基配方:1 g/100 mL胰蛋白胨、0.5 g/100 mL氯化鈉、0.3 g/100 mL瓊脂粉。將5 μL過夜活化至二代、培養至對數生長期的殺鮭氣單胞菌分別加入含終質量濃度0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL乙基麥芽酚的群集、泳動培養基中,在超凈工作臺內用無菌風吹干后放入28 ℃生化培養箱培養48 h,每處理組取3 個平行,測量其運動遷移直徑。分別以100 μL體積分數50%甲醇溶液和終質量濃度20 μg/mL的C12-HSL信號分子為陰性和陽性對照。

1.4 數據處理與分析

使用Excel軟件進行數據分析;運用Origin 9.0軟件作圖。

2 結果與分析

2.1 乙基麥芽酚最小抑菌濃度的確定及QS抑制劑初步檢測結果

通過觀察不同質量濃度(0~10 mg/mL)乙基麥芽酚對菌株CV026和殺鮭氣單胞菌生長情況發現,乙基麥芽酚對CV026的最小抑菌濃度為0.1 mg/mL。由圖1A可看出,經0.1 mg/mL乙基麥芽酚處理后的孔周圍出現不透明、渾濁的白色抑制圈,表明在不抑制CV026正常生長的前提下,乙基麥芽酚能夠抑制CV026紫色桿菌素的產生。這說明乙基麥芽酚能通過干擾QS報告菌株CV026的QS系統,進而影響紫色桿菌素的產生。同時,如圖1B所示,質量分數為0.1 mg/mL的乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌的生長同樣無抑制作用。因此,選取0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL作為乙基麥芽酚對CV026和殺鮭氣單胞菌的亞抑菌質量濃度進行后續實驗。

圖1 乙基麥芽酚對CV026產紫色桿菌素(A)和殺鮭氣單胞菌生長(B)的抑制活性Fig.1 Inhibitory effect of ethyl maltol against violacein production in strain CV026 (A) and growth of Aeromonas salmonicida (B)

2.2 乙基麥芽酚對CV026生長及紫色桿菌素產生量的影響

由圖2可知,在亞抑菌質量濃度下,隨著乙基麥芽酚質量濃度增加,CV026的紫色桿菌素產生量逐漸下降,并且對CV026菌液OD595nm幾乎無影響。與陰性對照相比,乙基麥芽酚質量濃度為0.08 mg/mL時,CV026紫色桿菌素產生量下降約71.55%,且下降幅度呈現劑量依賴性。結果表明,亞抑菌濃度下乙基麥芽酚不會干擾CV026的正常生長,其降低CV026產生紫色桿菌素的能力是通過干擾CV026的QS系統實現的。

圖2 乙基麥芽酚對CV026菌株菌液OD595 nm和紫色桿菌素產生量的影響Fig.2 Effect of ethyl maltol on bacterial density and violacein production of strain CV026

2.3 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌信號分子產生量的影響

圖4 GC-MS測定殺鮭氣單胞菌信號分子AHLs類型Fig.4 GC-MS profile of AHLs from Aeromonas salmonicida

由圖3、4可知,6 種AHLs信號分子混合標準品分離效果良好、峰形尖銳;殺鮭氣單胞菌所分泌信號分子的保留時間為11.334 min,由此確定其為C12-HSL。由圖5可知,隨著乙基麥芽酚質量濃度的增加,C12-HSL峰面積逐漸減小,且呈現濃度依賴性。結果表明,乙基麥芽酚可以抑制殺鮭氣單胞菌的長鏈AHLs產生量,結合2.2節中乙基麥芽酚對CV026紫色桿菌素產生量的抑制作用,推測乙基麥芽酚既可以干擾CV026由外源短鏈AHLs所介導的QS系統,又對殺鮭氣單胞菌所分泌的長鏈AHLs信號分子具有抑制效果。

圖3 AHLs混合標準品的GC-MS圖Fig.3 GC-MS profile of mixed AHLs standard

圖5 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌AHLs產生量的影響Fig.5 Effect of ethyl maltol on the production of AHLs from Aeromonas salmonicida

2.4 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌生物被膜的影響

2.4.1 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌生物被膜形成量的影響生物被膜是細菌的一種自我保護性生長方式,是細菌為適應自然環境,通過分泌胞外聚合物(extracellular polymeric substances,EPS)使細菌包裹在其中,進而不斷繁殖形成的大量細菌聚集膜。細菌生物被膜的形成一般分為3 個階段:首先,細菌通過鞭毛或菌毛等初始吸附于物體表面[23];然后,當細菌附著在生物或非生物表面并穩定后,細菌開始分泌EPS,這是一個不可逆的過程,EPS連續復制直到生物被膜完全成熟,完全成熟的生物被膜呈三維塔狀結構,內部由小通道組成,可輸送養分、水和廢物[24];最后,生物被膜內的細菌繁殖產生不同的糖化酶,并上調鞭毛形成相關蛋白的表達,幫助細菌釋放[25]。肖夢圓等[26]報道了QS抑制劑能夠抑制銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌信號分子合成,從而干擾細菌生物被膜的形成。

由圖6可知,亞抑菌質量濃度的乙基麥芽酚在不影響殺鮭氣單胞菌生長的前提下,能有效抑制其生物被膜的形成,且呈濃度依賴性。相比于陰性對照,0.08 mg/mL乙基麥芽酚處理的殺鮭氣單胞菌生物被膜相對形成率僅為28.8%,抑制率達71.2%,添加信號分子C12-HSL的陽性對照生物被膜相對形成率達到128.67%。由此可以看出,乙基麥芽酚可以通過干擾殺鮭氣單胞菌的QS系統調控生物被膜的形成。

圖6 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌生物被膜形成的影響Fig.6 Effect of ethyl maltol on biofilm formation of Aeromonas salmonicida

2.4.2 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌生物被膜形態的影響

利用掃描電子顯微鏡觀察不同亞抑菌質量濃度乙基麥芽酚處理殺鮭氣單胞菌形成的生物被膜形態。由圖7可知,陰性對照組的生物被膜覆蓋整張鋅片,且結構均勻致密,出現一定的堆疊現象;而陽性對照組中生物被膜形態不僅結構致密粗糙,而且堆疊狀態加深、厚度增加,結構更為復雜;添加乙基麥芽酚的殺鮭氣單胞菌形成的生物被膜逐漸稀松,表面粗糙度隨質量濃度的增大而降低,并且出現不同程度的破裂。乙基麥芽酚質量濃度為0.08 mg/mL時,殺鮭氣單胞菌生物被膜覆蓋率大大降低,且結構簡單疏松。這與上述酶標法測定生物被膜相對形成率結果一致,印證了乙基麥芽酚可降低殺鮭氣單胞菌生物被膜的形成能力。

活動引導式教學模式改變了傳統的“灌輸式”教學模式,這種教學模式能夠很好地啟發學生思維,突顯以學生為中心的教學理念,對現階段我國全方位進行的教學改革具有重要意義。在倡導素質教育、創新性人才培養大形勢下,應該給以足夠的重視,并加以推廣。

圖7 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌生物被膜形態的影響Fig.7 Effect of ethyl maltol on biofilm morphology of Aeromonas salmonicida

2.5 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌胞外蛋白酶活性的影響

水產品富含蛋白質、脂質、游離氨基酸等,這些成分為微生物生長繁殖提供了豐富的物質基礎,使得含有豐富蛋白酶的腐敗微生物在其中大量繁殖,導致水產品喪失原有的風味和品質,最終腐敗變質[27]。由表1可知,亞抑菌質量濃度下隨著乙基麥芽酚質量濃度的增大,胞外蛋白酶分解蛋白質產生的水解圈直徑逐漸減小,0.08 mg/mL時抑制率達69.1%。同時,當添加外源信號分子C12-HSL時,胞外蛋白酶水解圈直徑與陰性對照組相比明顯增大。由此可以看出,殺鮭氣單胞菌胞外蛋白酶活性是由AHLs所介導的QS系統調控,并且乙基麥芽酚通過干擾殺鮭氣單胞菌的QS系統抑制其胞外蛋白酶活性。

表1 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌胞外蛋白酶活性的影響Table 1 Effect of ethyl maltol on extracellular protease activity of Aeromonas salmonicida

2.6 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌群集和泳動的影響

細菌的主要運動方式有群集、泳動、滑行和蹭行,且主要通過鞭毛和菌毛實現。其中,群集是由鞭毛和菌毛在半固體環境中介導的一種運動方式,而泳動是由鞭毛單獨介導的一種單細胞運動方式[28]。丁莉莎等[29]報道了運動缺陷型細菌形成生物被膜的能力會下降,即細菌的運動性與生物被膜的形成能力呈正相關,并且其運動性也是由QS系統起主要調控作用。

圖9 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌泳動的影響Fig.9 Effect of ethyl maltol on swimming motility of Aeromonas salmonicida

由圖8、9可知,隨乙基麥芽酚質量濃度的增加,殺鮭氣單胞菌群集和泳動遷移直徑與陰性對照相比均呈逐漸減小的趨勢。當乙基麥芽酚質量濃度為0.08 mg/mL時,殺鮭氣單胞菌的群集及泳動的遷移直徑均僅約10 mm,分別較陰性對照組減少80.4%和82.1%。說明在此質量濃度下殺鮭氣單胞菌的運動能力極微弱。當添加C12-HSL信號分子時,殺鮭氣單胞菌的遷移直徑明顯增大。這與2.4節中乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌生物被膜的抑制作用結果一致。

圖8 乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌群集的影響Fig.8 Effect of ethyl maltol on swarming motility of Aeromonas salmonicida

3 結 論

本實驗通過測定乙基麥芽酚對QS報告菌CV026的紫色桿菌素產生情況的影響,并探究乙基麥芽酚對魚類腐敗菌殺鮭氣單胞菌QS及其腐敗活性的抑制效果。GC-MS結果表明,乙基麥芽酚可以抑制殺鮭氣單胞菌分泌QS信號分子C12-HSL,結合乙基麥芽酚對CV026紫色桿菌素的抑制作用,進一步確定了乙基麥芽酚對細菌QS系統具有抑制作用。同時乙基麥芽酚對殺鮭氣單胞菌分泌C12-HSL所調控的腐敗表型,如生物被膜形成、胞外蛋白酶活性以及細菌運動性同樣存在抑制作用。0.08 mg/mL乙基麥芽酚處理殺鮭氣單胞菌的生物被膜相對形成率僅為陰性對照組的28.8%。掃描電子顯微鏡觀察結果表明,乙基麥芽酚能夠有效破壞殺鮭氣單胞菌生物被膜結構。由此證明,乙基麥芽酚具有良好的QS抑制性,有望成為一種以QS為靶點的安全高效的新型水產品保鮮劑。但是其作用機理還不明確,可以通過分子對接、轉錄組學等手段進一步驗證其抑制機理。

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