孕晚期婦女B族鏈球菌PCR檢測結果分析及其對妊娠結局的影響

孫春濤，盛優靜

B族鏈球菌(GBS)又稱為無乳鏈球菌，為兼性厭氧革蘭氏陽性球菌，主要寄居于人類陰道和直腸中[1-2]。20世紀60年代發現B族鏈球菌能使新生兒出現嚴重感染[3]，進而引起腦膜炎、敗血癥、肺炎等死亡率極高的疾病[4]。B族鏈球菌屬于孕婦圍產期危害性非常高的致病菌，也是孕產婦生殖道感染的致病菌[5]，一旦形成，會出現產褥感染、早產、泌尿道感染等。此外還和孕婦胎膜早破、新生兒肺炎、胎兒生長受限等有關[6-7]，近年來受到了廣泛的關注[8]。本文探討孕晚期婦女B族鏈球菌PCR檢測結果，為孕晚期婦女B族鏈球菌的感染情況提供了數據支持；并降低圍生期孕婦感染和減少新生兒發病風險，提高母嬰預后質量，采取積極有效的防治措施提供了依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2016年6月-2019年3月于寧夏回族自治區婦幼保健院就診的446例產檢和分娩孕晚期婦女作為研究對象，年齡在19～37歲，平均為(27.22±1.35)歲，分娩經驗：40例(8.97%)經產婦、406例(91.03%)初產婦。所有孕婦近期均未使用抗生素和性交。

1.2 方法

1.2.1 標本采集：兩根無菌棉拭子置于孕產婦陰道下1/3的位置，旋轉一圈，將分泌物取出；兩根無菌棉拭子插入孕產婦肛門，在括約肌上采集直腸分泌物，將采集的標本進行細菌培養和PCR檢測。

1.2.2 細菌培養：采集所有研究對象的生殖道標本行B族鏈球菌培養 ,使用安圖公司 B族鏈球菌顯色培養基進行篩查 ,對顯色為紫色的菌落進行分離培養，然后將培養基置于5%的CO2培養箱中培養18～24 h,培養溫度控制在35 ℃ ,完成上述培養操作后,對菌落 (圓形、表面光滑、有乳光、灰白色)用3%過氧化氫進行觸酶試驗,對觸酶試驗呈陽性者不作任何干預 ,對陰性者行CAMP試驗，CAMP 試驗陽性則判為B族鏈球菌篩查陽性。

1.2.3 實時熒光定量PCR檢測：將采集到的樣本置于PCR專用采集管內，24 h內實施檢測操作。檢測前將樣本置于渦旋振蕩器混勻，吸取樣本1 000 μL加入離心管內14 000 r離心5 min，棄去上清液，在沉淀中加入1 mL滅菌清洗液，震蕩重懸，再次離心5 min處理，棄去上清液，加入三羥甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸50 μL，高速漩渦震蕩，時間為5 min，在95 ℃環境下，加熱2 min，冰浴5 min，離心1 min，取5 μL上清液加入PCR反應管中進行擴增[4]。

1.3 觀察指標：觀察446例產檢和分娩孕晚期婦女B族鏈球菌-DNA檢測結果和細菌培養基本情況，觀察菌落顏色、形態，觀察觸酶試驗、CAMP實驗結果。

1.4 統計學方法：采用SPSS 19.0統計軟件，采用χ2檢驗分析B族鏈球菌-DNA檢查為陰性、陽性與細菌培養結果之間的差異，以及對妊娠結局的影響，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 446例產檢和分娩孕晚期婦女B族鏈球菌-DNA檢查和細菌培養情況：446例產檢和分娩孕晚期婦女經過B族鏈球菌細菌培養后，陽性標本為17例(3.81%)，陰性標本為429例(96.19%)，經B族鏈球菌-DNA檢查，陽性標本為39例，其中2例為假陽性，陰性標本為407例,以PCR法聯合細菌培養法為金標準，細菌培養法檢測靈敏度45.95%，特異性100%；PCR法檢測靈敏度100%，特異性為99.51%。

2.2 兩種方法檢測結果：兩種方法檢測陽性率比較差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 446例孕晚期婦女B族鏈球菌-DNA檢查和細菌培養情況[n(%)]

2.3 分娩晚期婦女B族鏈球菌-DNA檢查結果與妊娠結局的關系：B族鏈球菌檢查結果對妊娠結局產生影響(P<0.05)，B族鏈球菌陽性的妊娠期婦女更容易發生早產、宮內感染及產后出血，見表2。

表2 B族鏈球菌-DNA檢測對妊娠結局影響情況[n(%)]

3 討論

隨著醫療水平的不斷提升，針對B族鏈球菌的檢測越來越受到重視，本研究選用的檢測方法為細菌培養和PCR。比較這兩種檢測方法發現，B族鏈球菌-DNA陽性檢出率明顯高于細菌培養陽性檢出率，與黃永建[9]等的研究結果一致。在實施細菌培養檢測時會出現漏檢，在接種培養皿時受到環境、保存條件等影響，部分B族鏈球菌會出現死亡，從而影響檢出率；而實施熒光PCR檢測時，對于死亡的B族鏈球菌也能檢測到，因此，針對孕晚期婦女B族鏈球菌檢測時，PCR檢測方案的應用價值極高，值得優先選用[10]。在本研究中，B族鏈球菌陽性孕產婦發生宮內感染、早產及產后出血的發生率明顯高于陰性孕產婦。同時，GBS對胎膜及絨毛具有較強的穿透力，造成胎膜早破及胎盤絨毛感染，從而造成胎兒宮內感染及新生兒早發性疾病。陽性孕婦宮內感染率的顯著增加使早產和產后出血的發生率也明顯高于陰性孕婦。近年來，國內也逐漸注重GBS的篩查及治療，對于GBS感染陽性患者，國內目前主要通過使用抗生素來進行治療，預防新生兒感染的發生。但是，在臨床中仍有一部分患者未定期產檢及篩查GBS，這主要是由于國內圍產保健相關知識未得到普遍宣教及落實。因此積極開展孕晚期GBS篩查，對GBS定植者采取積極、規范的抗生素治療方案可減少GBS定植導致的不良妊娠結局，減少新生兒GBS的感染率。B族鏈球菌PCR檢測擁有較高特異性、敏感度，因此PCR檢測可應用于檢測妊娠晚期孕婦B族鏈球菌的感染。