抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞在系統性紅斑狼瘡診斷中的臨床研究

董曉微，劉 璐，張 靜，柴 華，王 偉，樸文花

系統性紅斑狼瘡(SLE)屬于系統性自身免疫疾病，是由于產生大量自身抗體引起全身多系統、多器官受累，且反復性發作。若不及時治療將可能導致受累器官及系統出現不可逆損害，進而威脅患者的生命安全[1-2]。臨床治療原則為早期實施個體化治療，最大程度抑制疾病進展。而精確診斷技術對于早期治療有著重要臨床意義，隨著臨床對抗dsDNA抗體研究的逐漸深入，抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞的診斷價值逐漸得到臨床認可?？筪sDNA抗體是SLE標志性自身抗體及致病性抗體，但對于抗dsDNA抗體具體致病作用機制還有待進一步研究[3-4]。有研究顯示，SLE的發病機制與細胞間相互作用存在密切聯系，B淋巴細胞可以促使機體產生抗dsDNA抗體，繼而引發SLE?；诖?，本研究將對SLE應用抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞診斷效果進行分析，實驗報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選取我院風濕免疫科2019年6月-2020年6月收治的40例SLE患者作為A組，同期收治的40例非SLE類風濕性患者作為B組，同期40例健康體檢者作為C組。A組：性別(男/女)比為6/34，年齡21～64歲，平均(42.35±3.27)歲。B組：性別(男/女)比為7/33，年齡21～65歲，平均(42.47±3.13)歲。C組：性別(男/女)比為8/32，年齡20～64歲，平均(42.26±3.34)歲。3組SLE患者一般資料(性別、年齡)差異無統計學意義(P>0.05)。納入標準：①SLE患者滿足《2020中國系統性紅斑狼瘡診療指南》[5]中的診斷標準，患者出現面頰部皮疹、光過敏、口腔潰瘍等11項標準中的4項及以上標準；②SLE患者均為初治病例；③患者及體檢者均知情同意本研究。排除標準：①近期服用激素、免疫制劑等影響檢測結果藥物者；②既往出現心力衰竭、冠脈綜合征等急性心腦血管事件、嚴重感染、血液系統疾病者；③不同意定期隨訪患者。

1.2 方法:所有患者及體檢者均需要檢測抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞以及抗 dsDNA 抗體，選用試劑為GibcoRPMI 1640以及Cellix901細胞培養液(均來源上海英駿生物技術有限公司)，人外周血淋巴細胞分離液(來源于天津市灝洋生物制品科技有限公司)，抗dsDNA抗體IgG檢測試劑盒(歐蒙醫學實驗診斷股份公司)。具體操作如下：提取4 mL外周血淋巴細胞，采用ELISA檢測抗dsDNA抗體；經淋巴細胞分離單個核細胞，應用40 mL無血清培養液(Cellix901)平均混懸于細胞培養皿中，并置于37 ℃ 5% CO2孵育箱中培養72 h。提取足夠的淋巴細胞，并采用流式細胞分選法純化分離B細胞，確保B細胞濃度≥95%，再進行細胞培養，收集細胞，應用BD FACSAriaTMⅡ Cell Sorter流式細胞分析儀檢測抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞。

1.3 觀察指標：觀察對比3組抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞以及抗dsDNA 抗體陽性率以及不同診斷技術的診斷效能。診斷效能包括敏感性(真陽性/(真陽性+假陰性))、特異性(真陰性/(真陰性+假陽性))、準確性((真陽性+真陰性)/總人數)。

2 結果

2.1 3組應用不同診斷技術的陽性率對比：A組的抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞、抗dsDNA抗體陽性率明顯高于B組、C組，差異存在統計學意義(P<0.05)；而在SLE診斷中，抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞與抗dsDNA抗體陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 3組應用不同診斷技術的陽性率(%)

2.2 不同檢測技術的診斷效能對比:A組抗dsDNA抗體真陽性34例，假陽性1例，真陰性1例，假陰性4例?？筪sDNA抗體分泌型B淋巴細胞診斷SLE的特異性、準確性、敏感度均明顯優于抗dsDNA抗體，差異存在統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同檢測技術的診斷效能對比[n(%)]

3 討論

SLE的發病病因與遺傳、環境、細菌感染等因素均有著密切聯系。相關研究顯示，我國大陸地區患病率為(30～70)/10萬，隨著臨床診治技術及水平的不斷提高，SLE診治特征已經逐漸由急性、高致死性轉變為慢性可控，且生存率也出現逐年增長趨勢[6]。在精準醫學的背景下，有必要對診療方案不斷優化，嚴格控制SLE診療風險。相關研究顯示，抗dsDNA抗體可能是SLE的直接致病因素，而SLE的發病機制與細胞間相互作用存在密切聯系，抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞可以促進抗dsDNA抗體生成，因此可用于臨床SLE診斷[4]。

B細胞作用機制是通過細胞表面膜相關抗原受體進行特異性捕獲及提呈抗原，繼而誘導B細胞出現活化反應，產生大量自身抗體，結合自身抗原形成免疫復合物，經過Toll樣受體配體，保持B細胞高度活化狀態。同時B細胞可以產生多克隆抗體及細胞因子輔助T細胞活化，繼而參與SLE發病過程[7]。正是由于抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞與SLE發病機制存在密切聯系，且流式細胞技術可以有效提高檢測因子敏感性，因此該指標對于SLE有著較高的特異性及靈敏度，可以有效診斷及鑒別SLE患者[8]。由于該指標可以有效預測疾病的活動性，因此可作為評價病情活動的監測指標[9]。本研究結果顯示，抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞可以有效鑒別SLE，且抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞診斷SLE的特異性、準確性、敏感度均明顯優于抗dsDNA抗體，差異具有統計學意義(P<0.05)。其原因在于抗dsDNA抗體屬于SLE特異性抗體，而淋巴細胞減少是SLE最常見臨床表現之一，也是診斷該病癥是否出現血液系統損害的重要依據之一，抗dsDNA抗體及細胞高反應性均參與SLE的發病機制，因此采用抗dsDNA抗體分泌型B淋巴細胞檢測具有較高診斷準確性。