胃癌組織中Krüppel 樣因子4、過氧化物還原酶1 的表達及與臨床特征的關系△

毛奇琦，黃家鑫，許旭東，潘獨伊，王昕海，孫旭#

復旦大學附屬華山醫院（寶山院區）1消化科&內鏡中心，2普外科，上海2019070

胃癌是嚴重威脅人類健康的消化系統惡性腫瘤，其發病率在中國惡性腫瘤中居首位，根據相關調查報告顯示，每年中國新發胃癌患者已超過40萬例，且逐漸呈年輕化趨勢[1]。由于胃癌本身具有隱匿性，加上醫療條件不充分，多數患者確診時已到中晚期，成為進展期胃癌，腫瘤已發生局部轉移，失去手術治療的機會[2]。中國是胃癌高發國家，對于晚期胃癌患者，及時給予化療，其生存期也難以超過12 個月[3]。因此研究胃癌的發病機制，尋找早期診斷的分子標志物是目前臨床研究的重點內容。Krüppel樣因子4（Krüppel-like factor 4，KLF4）在人體多種組織中存在，在不同組織中有不同的靶基因相互作用，參與細胞的增殖和凋亡[4]。過氧化物還原酶1（peroxiredoxin 1，PRDX1）在對抗活性氧簇、抗氧化過程中發揮關鍵作用，參與多種疾病的發生發展[5]。目前為止，關于KLF4、PRDX1 與胃癌之間的關系尚未明確。本研究旨在探討胃癌組織中KLF4、PRDX1 的表達及與臨床特征的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018 年10 月至2020 年10 月復旦大學附屬華山醫院（寶山院區）收治的胃癌患者的病歷資料。納入標準：①符合《胃癌規范化診療指南（試行）》[6]中的相關診斷標準；②未接受放化療及其他針對性腫瘤治療；③符合外科手術治療適應證；④心肝腎及血常規正常；⑤臨床資料齊全。排除標準：①心、腦、肝、腎等嚴重器官功能衰竭；②未成功隨訪；③具有酒精及藥物濫用史；④存在活動性細菌或真菌感染；⑤有高血壓，且服用降壓藥物無法控制；⑥合并第二原發腫瘤。根據納入、排除標準，共納入70 例胃癌患者，其中男性40 例，女性30例；年齡25～75 歲，平均（48.22±5.12）歲；體重指數16～26 kg/m2，平均（22.35±2.25）kg/m2；腫瘤直徑2～8 cm，平均（4.01±1.43）cm；臨床分期：Ⅰ期28 例，Ⅱ期20 例，Ⅲ期15 例，Ⅳ期7 例；分化程度：高中分化30 例，低分化40 例；浸潤程度：T1～235 例，T3～435例；有淋巴結轉移50 例，無淋巴結轉移20 例；有血管神經侵犯30 例，無血管神經侵犯40 例；有遠處轉移10 例，無遠處轉移60 例。取70 例胃癌患者的胃癌組織及癌旁組織。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 資料收集

收集70 例胃癌患者的性別、年齡、臨床分期、分化程度、隨訪復發情況等臨床資料?；颊叱鲈汉?，每3 個月采用門診復查、電話訪問等多種方式進行隨訪，隨訪時間1 年，隨訪日期截至2021 年10月，隨訪率為100%。

1.3 KLF4 和PRDX1 檢測方法

采用免疫組化法檢測KLF4 和PRDX1 蛋白表達情況，標本均在4%多聚甲醛中過夜，自來水清洗，梯度乙醇濃度從低向高逐級脫水，脫水后胃癌組織用氯仿透明，每次1 h，透明后在石蠟中浸透，行石蠟包埋，切片裱于載玻片上，晾干。常規脫蠟，梯度乙醇復水，3%H2O2避光孵育20 min，蒸餾水沖洗；切片放入抗原修復盒內，高溫修復10 min，冷卻至室溫取出切片，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗3 次；滴加PBS 稀釋的一抗，37 ℃孵育箱內復溫40 min，PBS 沖洗3 次；滴加生物素化二抗工作液，PBS 沖洗3 次；二氨基聯苯胺顯色，1 ml 蒸餾水中加入顯色劑，避光保存，自來水沖洗；蘇木素復染，脫水，封片。細胞質或細胞核出現棕黃色顆粒為陽性細胞。染色強度：棕褐色為3 分，棕黃色為2 分，淡黃色為1 分，無陽性染色為0 分；陽性細胞所占比例：＞75%為3 分，25%～75%為2 分，＜25%為1 分，無陽性細胞為0分。染色強度和陽性細胞所占比例評分之和＞2分為陽性，≤2 分為陰性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件分析數據，計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，計量資料以均數±標準差（±s）表示，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌組織和癌旁組織中KLF4、PRDX1 表達情況的比較

胃癌組織中KLF4 陽性表達率明顯低于癌旁組織，PRDX1 陽性表達率明顯高于癌旁組織，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 胃癌組織和癌旁組織中KLF4、PRDX1 表達情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征胃癌患者的胃癌組織中KLF4、PRDX1 表達情況的比較

不同性別、年齡、腫瘤直徑、血管神經侵犯情況胃癌患者的胃癌組織中KLF4 陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；不同臨床分期、浸潤程度、分化程度、淋巴結轉移情況及遠處轉移情況胃癌患者的胃癌組織中KLF4 陽性表達率比較，差異均有統計學意義（χ2=5.657、5.833、4.088、37.333、6.572，P＜0.05）。不同性別、年齡、血管神經侵犯情況胃癌患者的胃癌組織中PRDX1陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；不同腫瘤直徑、臨床分期、浸潤程度、分化程度、淋巴結轉移情況及遠處轉移情況胃癌患者的胃癌組織中PRDX1 陽性表達率比較，差異均有統計學意義（χ2=6.437、6.638、6.437、4.057、21.282、8.867，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征胃癌患者的胃癌組織中KLF4、PRDX1的表達情況

3 討論

據相關數據統計，胃癌的發病率居各種惡性腫瘤首位，呈明顯的地區分布差異，中國、日本為胃癌的高發國家[7]。由于早期診斷的普及、手術及化療的進步，胃癌的治療已有較大發展。除了對胃癌的早期診斷、病因預防及手術治療外，還需全面了解胃癌的生物學行為[8]。既往有研究顯示，胃癌的侵襲性與多種分子有關，包括致癌基因激活、多種生長因子受體異常、遺傳不穩定性等，其會使腫瘤細胞獲得存活和增殖的優勢[9]。但目前關于腫瘤抑制基因的改變在疾病發生發展過程中的機制尚無明確定論。

KLF4 主要在消化道黏膜和上皮細胞中表達，其參與細胞的增殖、分化等生命過程的調控，與腫瘤的發生和發展密切相關[10]。KLF4 在早期腸腺瘤、結腸腺癌、前列腺癌、食管癌中表達降低，而在口腔鱗狀細胞癌、原發性乳腺導管癌中表達升高。盡管不同腫瘤中KLF4 的表達水平不同，但均表明其在腫瘤的發生發展過程中有重要作用[11]。胃癌具有轉移迅速的特點，這與胃癌細胞的上皮-間充質轉化有關，在上皮-間充質轉化過程中，胃癌細胞在多種基因作用下具有較強的遷移和侵襲能力，出現腫瘤轉移[12]。PRDX1 在細胞氧化還原過程中有重要調節作用，其對氧化應激非常敏感。有研究顯示，PRDX1 在結直腸癌、卵巢癌、乳腺癌等腫瘤中的表達升高，其通過調節多種信號通路參與腫瘤的增殖和侵襲[13-14]。本研究結果顯示，胃癌組織中KLF4陽性表達率明顯低于癌旁組織，PRDX1陽性表達率明顯高于癌旁組織；不同臨床分期、浸潤程度、分化程度、淋巴結轉移情況及遠處轉移情況胃癌患者的胃癌組織中KLF4 陽性表達率比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；不同腫瘤直徑、臨床分期、浸潤程度、分化程度、淋巴結轉移情況及遠處轉移情況胃癌患者的胃癌組織中PRDX1陽性表達率比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。表明胃癌組織中KLF4表達明顯降低，PRDX1 表達明顯升高，其促進了胃癌的發生和發展，可作為判斷早期胃癌預后的指標。KLF4主要表達于皮膚及胃腸道分化的上皮細胞中，進一步研究發現，在結腸癌細胞中能夠觀察到KLF4某些位點的缺失，轉錄水平的甲基化修飾，其與腫瘤細胞的侵襲有關，提示了KLF4 的潛在抑癌作用[15-16]。KLF4 在胃癌組織和癌旁組織中的表達差異證實其在維持胃腸道黏膜穩態中的重要作用。正常生理代謝和病理因素均會誘導活性氧產生，導致蛋白質氧化劑脂質過氧化，進而導致腫瘤的發生發展，其中PRDX1 具有抗氧化和清除自由基等多種生物學功能[17]。目前的研究發現，PRDX1 既可阻斷正常細胞的惡性轉化，又可抑制腫瘤細胞內活性氧誘導的凋亡，具有雙重作用[18-19]。腫瘤的轉移是一個復雜的過程，轉移灶是否能形成受到機體免疫情況、局部微循環等多個方面的影響，需要對參與研究的患者進行長期隨訪，明確其與腫瘤轉移和復發的關系，尋找更科學有效的治療方案，在微轉移時給予針對性治療，扼殺早期的腫瘤細胞，爭取良好的預后[20]。本研究存在以下不足之處：未進行大樣本研究；本研究所選擇樣本均來自同一醫院的單一科室，未進行多中心點的實驗研究；本研究所納入的研究時間間隔較短，未進行多時間段的實驗研究，故需要后續學者進行多中心、大樣本及較長時間跨度或者多時間段的進一步深入研究。

綜上所述，胃癌組織中KLF4 表達明顯降低，PRDX1 表達明顯升高，其促進了胃癌的發生和發展，可作為判斷早期胃癌預后的指標。