丙酮酸脫氫酶E1α亞單位、轉錄激活反應RNA 結合蛋白1 在表皮生長因子受體突變晚期非小細胞肺癌中的表達及對患者預后的影響

呂晶晶，鄒明雷，付培彪

河南理工大學第一附屬醫院/焦作市第二人民醫院腫瘤內科，河南 焦作4540000

肺癌是中國乃至全球惡性腫瘤死亡的主要原因，其中最常見的組織學類型為非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）[1-2]。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）突變能夠經由多種通路增強腫瘤細胞的侵襲、轉移并抑制其凋亡，在NSCLC 患者中，EGFR突變患者達到了50%[3-4]。早期肺癌多無典型臨床癥狀，多數患者就診時腫瘤已發展至晚期，手術完整切除的難度較大，化療療效欠佳且不良反應明顯，靶向治療逐漸成為臨床治療的首選，其中以吉非替尼為代表的酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitor，TKI）對EGFR突變的NSCLC 療效確切，且不良反應相對較小[5-6]。盡管隨著醫學技術的迅速發展，NSCLC 的診斷及治療技術日益升高，但晚期NSCLC 患者的預后仍不理想，因此，研究參與肺癌細胞增殖、浸潤的主要基因及蛋白，探索其與患者預后的關系有重要的臨床價值。丙酮酸脫氫酶E1α 亞 單 位（pyruvate dehydrogenase complex E1α subunit，PDHA1）可促使有氧糖酵解轉變為氧化磷酸化，抑制腫瘤的發生發展[7]。轉錄激活反應RNA結合蛋白1（transcriptional activation RNA binding protein 1，TARBP1）可結合部分RNA干擾因子，調節磷酸化及抑癌基因的表達[8]。近年來，有研究報道PDHA1、TARBP1 與腫瘤發生發展密切相關，但與EGFR突變NSCLC患者預后關系的研究卻較少[9-10]。本研究探討PDHA1、TARBP1 在EGFR突變NSCLC中的表達及對患者預后的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016 年5 月至2018 年5 月在焦作市第二人民醫院接受靶向治療的EGFR突變晚期NSCLC患者。納入標準：①符合《NCCN 非小細胞肺癌臨床實踐指南》[11]中關于肺癌的診斷標準，經纖維支氣管鏡獲取腫瘤組織，經病理學檢查確診為NSCLC；②TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期；③基因檢測證實存在EGFR突變，接受靶向藥物治療；④入院前未接受過手術、放化療等任何抗腫瘤治療；⑤病歷資料完整。排除標準：①既往存在其他部位腫瘤；②合并嚴重感染、血液系統疾病及自身免疫性疾??；③合并嚴重的肝腎功能障礙、心血管系統等嚴重疾??；④未規律復診或隨訪失訪。根據納入和排除標準，本研究共納入95 例EGFR突變晚期NSCLC 患者，其中男52 例，女43 例；年齡51～76歲，平均（63.43±9.18）歲；病理類型：腺癌61 例，鱗狀細胞癌34 例；TMN 分期：Ⅲ期41 例，Ⅳ期54 例；淋巴結轉移76 例，無淋巴結轉移19 例；基因檢測EGFR突變位點：E19del突變51例，L858R突變44例。

1.2 治療方法

所有患者均給予靶向藥物治療，吉非替尼250 mg口服，每天1 次，患者出現耐藥表現時，再次行基因檢測更換靶向藥物繼續治療；若患者出現腦轉移，予以輔助放療。

1.3 免疫組化法檢測PDHA1、TARBP1 蛋白表達情況

所有患者均經纖維支氣管鏡取腫瘤組織，石蠟包埋，切片后脫蠟、水化，滴入檸檬酸緩沖液，微波加熱，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）洗滌，置于3%過氧化氫溶液中10 min 以阻斷非特異性染色，PBS 再次洗滌，山羊血清封閉。分別滴加PDHA1、TARBP1 一抗，室溫孵育1 h，滴加二抗，室溫孵育30 min。二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復染，脫水、透明后封片觀察。將相同濃度且與相應抗體同源的非特異性球蛋白作為陰性對照，將已知的陽性表達的切片作為陽性對照。

由2 名病理科主任醫師進行結果判定。PDHA1 主要定位于細胞質，細胞質出現黃色顆粒判定為陽性細胞，依據染色強度和陽性細胞所占比例進行評分：無著色計0 分，淡黃色染色計1 分，中等黃色染色計2 分，棕黃色染色計3 分；無陽性細胞計0 分，陽性細胞所占比例≤10%計1 分，陽性細胞所占比例為11%～50%計2 分，陽性細胞所占比例為51%～80%計3 分，陽性細胞所占比例＞80%計4 分；將染色強度評分和陽性細胞所占比例評分相乘，0～4 分判定為PDHA1 表達陰性，5～12 分為PDHA1 表達陽性。TARBP1 主要定位于細胞質，細胞質呈棕黃色判定為陽性，否則判定為陰性。

1.4 隨訪

患者出院后進行為期3 年的隨訪，2 年內每3個月到院復查1 次，2 年后每6 個月到院復查1 次，以患者死亡或隨訪結束為隨訪終點，記錄患者的總生存率。復查內容包括患者主訴、體征、血清腫瘤標志物檢測、胸腹部CT 檢查、頭部CT 或MRI 檢查，必要時行全身骨顯像檢查等。

1.5 統計學方法

采用SPSS 17.0 軟件對所有數據進行統計處理，計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank 檢驗；NSCLC 患者預后的影響因素采用Cox 風險比例回歸模型分析；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PDHA1、TARBP1 表達情況的比較

95例NSCLC患者腫瘤組織中，PDHA1陽性表達率為45.26%（43/95），PDHA1 陰性表達率為54.74%（52/95）；TARBP1 陽性表達率為74.74%（71/95），TARBP1 陰性表達率為25.26%（24/95）。

2.2 不同臨床特征NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 表達情況的比較

不同性別、年齡、TMN 分期、病理類型、EGFR突變位點NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 蛋白的陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。分化程度為中低分化、淋巴結轉移NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1 陽性表達率分別低于高分化和無淋巴結轉移患者，差異均有統計學意義（χ2=6.805、7.743，P＜0.05）；分化程度為中低分化、淋巴結轉移NSCLC 患者腫瘤組織中TARBP1 陽性表達率分別高于高分化和無淋巴結轉移患者，差異均有統計學意義（χ2=4.915、23.429，P＜0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 表達情況的比較（n=95）

2.3 不同PDHA1、TARBP1 表達情況NSCLC 患者預后情況的比較

至隨訪結束，95 例NSCLC 患者病死67 例，生存28 例。PDHA1 陽性表達患者總生存率為44.2%，明顯高于PDHA1 陰性表達患者的17.3%，差異有統計學意義（χ2=7.875，P=0.005）。TARBP1陽性表達患者的總生存率為18.3%，明顯低于TARBP1 陰性表達患者的62.5%，差異有統計學意義（χ2=13.744，P=0.000）。（圖1、圖2）

圖1 PDHA1陽性表達（n=43）和PDHA1陰性表達（n=52）NSCLC患者的總生存曲線

圖2 TARBP1陽性表達（n=71）和TARBP1陰性表達（n=24）NSCLC患者的總生存曲線

2.4 NSCLC 患者預后影響因素的單因素和多因素分析

單因素分析結果顯示，年齡、TNM 分期均可能與NSCLC 患者的預后無關（P＞0.05），分化程度、淋巴結轉移情況、吉非替尼耐藥情況、PDHA1 表達情況、TARBP1 表達情況均可能與患者的預后有關（P＜0.05）。多因素Cox 回歸分析結果顯示，分化程度為中低分化、有淋巴結轉移、PDHA1 表達陰性、TARBP1 表達陽性均是NSCLC 患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。（表2）

表2 NSCLC 患者預后影響因素的單因素和多因素分析

3 討論

隨著環境惡化及人們生活習慣的改變，肺癌的發病率日益增長[12-13]。多數患者就診時肺癌已進展至晚期，NSCLC 是其中最常見的類型，且多數患者合并EGFR突變[14]。臨床主要采用TKI 治療EGFR突變的晚期NSCLC 患者，其療效顯著，且不良反應相對較輕[15]。盡管如此，多數晚期NSCLC患者的預后仍不盡如人意。惡性腫瘤的發生發展與細胞增殖、浸潤相關的主要基因及蛋白的表達密切相關，由此可見，研究與EGFR突變晚期NSCLC 相關的生物學指標對評估患者的預后有重要價值。寧瑞玲等[16]研究顯示，血清糖類抗原125、癌胚抗原水平可為接受靶向治療的EGFR突變晚期NSCLC 患者的預后提供可靠參考依據。

本研究結果顯示，95 例NSCLC 患者腫瘤組織中，PDHA1 陽性表達率為45.26%，陰性表達率為54.74%；TARBP1 陽性表達率為74.74%，陰性表達率為25.26%。表明EGFR突變的NSCLC 患者以PDHA1 陰性表達和TARBP1 陽性表達為主。同時，本研究結果顯示，性別、年齡、病理類型、TNM分期、EGFR突變位點均可能與NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 的表達無關，而分化程度為中低分化、有淋巴結轉移的NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1 陽性表達率較低、TARBP1 陽性表達率較高。提示腫瘤組織中PDHA1 陰性表達、TARBP1 陽性表達患者的惡性程度更高，且此類患者的預后較差。本研究選取患者均為晚期，數據具有一定偏倚，PDHA1、TARBP1 表達與可反映腫瘤惡性程度的另一指標TNM分期未見明顯相關性。

本研究結果顯示，PDHA1 陽性表達患者總生存率為44.2%，明顯高于PDHA1 陰性表達患者的17.3%；TARBP1 陽性表達患者的總生存率為18.3% ，明顯低于TARBP1 陰性表達患者的62.5%。表明PDHA1 陰性表達、TARBP1 陽性表達患者的預后較差。機體正常細胞獲取能量的途徑是線粒體氧化磷酸化及糖酵解，而腫瘤細胞的明顯特征之一就是以有氧糖酵解為主，PDHA1可促使有氧糖酵解轉變為氧化磷酸化，對腫瘤新生血管生成有一定的抑制作用，當PDHA1 表達及活性下調時，腫瘤細胞將快速分裂，更具有侵襲性[17]。此外，有學者發現，PDHA1基因可能參與了腫瘤細胞線粒體呼吸鏈e 相關反應，進而誘發細胞死亡[18]。TARBP1 可通過JNK/促分裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）通路調控其相關蛋白磷酸化，同時可結合干擾素誘導的雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）活化蛋白激酶來調節其激活基因與腫瘤抑制基因的表達[19]。近年來，有研究在人類惡性腫瘤中檢測出了TARBP1突變[20]。同時，本研究結果顯示，分化程度為中低分化、有淋巴結轉移、PDHA1 表達陰性、TARBP1 表達陽性均是NSCLC 患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。表明腫瘤分化程度、淋巴結轉移情況、PDHA1 表達和TARBP1 表達均與患者的預后密切相關，腫瘤分化程度低、有淋巴結轉移、PDHA1 表達陰性、TARBP1 表達陽性患者的生存時間可能相對較短。

綜上所述，接受靶向治療的EGFR突變晚期NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1 陰性表達率較低、TARBP1 陽性表達率較高，且PDHA1 陰性表達、TARBP1 陽性表達患者的預后較差，分化程度為中低分化、有淋巴結轉移、PDHA1 表達陰性、TARBP1表達陽性均是NSCLC 患者預后的獨立危險因素。