胃靈顆粒中芍藥苷、甘草苷和甘草酸的含量測定

鞏長芹，李志嬌，趙建英

（臨沂市檢驗檢測中心，山東 臨沂 276001）

胃靈顆粒收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第六冊，由炙甘草、炒白芍、海螵蛸、炒白術、延胡索和黨參組成，具有健胃和中，制酸，止痛之功效；用于胃炎，胃及十二指腸潰瘍等癥[1-2]，為2020年山東省風險監測抽檢品種。本品種全國生產企業共有43家，批準文號有43個。因原標準中僅有性狀和檢查兩項，無含量測定項，本文在參考相關文獻[3-16]的基礎上，結合條件摸索，建立了芍藥苷、甘草苷和甘草酸的含量測定方法，以對其進行質量控制，為建立質量標準、全面控制胃靈顆粒的質量提供科學依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260 液相色譜儀（美國安捷倫）、XS205電子分析天平（梅特勒托利多）、超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

芍藥苷對照品（110736-201943，供含量測定用，含量以95.1 %計）、甘草苷對照品（111610-201908，供含量測定用，含量以95.0 %計）、甘草酸銨對照品（110731-202021，供含量測定用，含量以96.2 %計）均來源于中國食品藥品檢定研究院；色譜純甲醇和乙腈（默克公司），水為超純水，其余試劑均為分析純。30批次樣品來自省風險監測抽檢樣品，涉及全國8家生產企業（a～h）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.05 %磷酸溶液（B），梯度洗脫（0～10 min，A 20 %；10～20 min，A 20 %→50 %；20～25 min，A 50 %→65 %；25～42 min，A 65 %；42～47 min，A 20 %）；柱溫：30 ℃；流速：1.0 ml/ min；檢測波長：230 nm（0～6.5 min；芍藥苷）、280 nm（6.5～19.0 min；甘草苷）、250 nm（19.0～47.0 min；甘草酸），進樣量10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取芍藥苷對照品、甘草苷對照品、甘草酸銨對照品適量，精密稱定，分別置入50 ml量瓶，加70 %乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 ml含芍藥苷0.3205 mg、含甘草苷0.4267 mg、含甘草酸0.4089 mg的溶液，各作為對照儲備液。分別精密吸取芍藥苷對照儲備液、甘草苷對照儲備液、甘草酸對照儲備液2.5，2.0，5.0 ml，置入同一25 ml量瓶，加70 %乙醇定容至刻度，搖勻，作為對照品溶液I。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10袋，研細，取約0.5 g，精密稱定，置入50 ml量瓶，加入70 %乙醇適量，超聲處理30 min，放冷，用70 %乙醇定容至刻度，搖勻濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性溶液的制備 按胃靈顆粒處方和制法分別制備缺炒白芍和炙甘草的陰性樣品，按照供試品溶液制備的方法制備成陰性溶液。

2.3 系統適用性和專屬性考察

精密吸取2.2項制備溶液各10 μl，按2.1項色譜條件進樣分析，結果3種有效成分分離度良好，均大于1.5；理論塔板數以芍藥苷、甘草苷和甘草酸峰計算均不低于4000。專屬性考察見圖1。

圖1 專屬性考察HPLC圖

2.4 線性關系考察

分別精密吸取對照品溶液I 0.1，0.25，0.5，1.0，2.5，4.0 ml置入5 ml量瓶，加70 %乙醇至刻度，搖勻，按2.1項色譜條件進樣分析，以對照品進樣量（X/μg）為橫坐標，以相應的色譜峰峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，計算線性方程及相關系數。結果表明，線性范圍內3種有效成分的進樣量與各自的峰面積呈良好的線性關系。結果見表1。

表1 線性方程及其范圍

2.5 精密度考察

精密吸取對照品溶液I 2.0 ml置入10 ml量瓶，加70 %乙醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液II，按2.1項色譜條件，連續進樣6次，記錄色譜峰面積。結果，芍藥苷、甘草苷、甘草酸峰面積RSD分別為1.39 %，1.04 %，1.36 %，表明儀器精密度良好，適用于本試驗。

2.6 穩定性考察

取同一份樣品（企業a，批號：200307），按2.2.2項方法制備后，分別于配制后0，2，4，8，12，18，24 h，按2.1項條件進樣測定，記錄3種成分的峰面積。結果，芍藥苷、甘草苷、甘草酸峰面積RSD分別為0.86 %，1.55 %，1.28 %，表明供試品溶液在制備后24 h內穩定，能滿足測定需要。

2.7 重復性考察

精密稱取同一批號的樣品（企業a，批號：200307）6份，各0.5 g，按2.2.2項方法制備后，按2.1項條件進樣測定，計算芍藥苷、甘草苷和甘草酸的含量。結果，芍藥苷、甘草苷、甘草酸平均含量分別為31.1，7.6，28.6 mg/袋，RSD分別為1.11 %，1.06 %，1.59 %，表明方法重復性良好，能滿足測定需要。

2.8 加樣回收率考察

取已知含量的樣品（芍藥苷31.1 mg/袋、甘草苷7.6 mg/袋、甘草酸28.6 mg/袋，企業a，批號：200307）約0.25 g，精密稱取，置50 ml量瓶中，稱取6份，分別精密加入芍藥苷、甘草苷、甘草酸對照品儲備液5，1，4 ml，按2.2.2項方法制備加樣回收率樣品溶液，進樣測定，分別計算芍藥苷、甘草苷和甘草酸的加樣回收率及其RSD值，結果見表2。結果表明，芍藥苷、甘草苷和甘草酸的加樣回收率良好，本方法適合本品測定。

表2 加樣回收率試驗結果表（n=6）

2.9 樣品含量測定

取本次抽檢的30批次樣品，按2.2.2項方法制備后，按2.1項條件進樣測定，計算樣品中芍藥苷、甘草苷和甘草酸的含量，結果見表3和圖2。

表3 各生產企業樣品測定結果統計表

圖2 樣品含量測定結果圖

由結果可見，生產企業b生產的胃靈顆粒中3種有效成分的平均含量較高，且均一性較好，表明該企業的原料質量較好，生產工藝比較穩定；生產企業a的樣品個別成分平均含量較高，但含量結果的離散性較大，表明該企業的生產原料或生產工藝穩定性較差；生產企業c、d、e、f的樣本量較少，致數據量較少，趨勢并不明顯；生產企業f僅抽到1批樣品，但是在30批次樣品中其3種成分的含量均最低。

3 討論

3.1 提取方法的選擇

本文參考相關文獻[3-7]，考察甲醇、50 %甲醇、70 %甲醇、乙醇、50 %乙醇、70 %乙醇作為提取溶劑發現，取樣0.5 g，用70 %乙醇50 ml可較完全提取3種有效成分；考察提取方法選擇超聲、熱回流及不同的提取時間發現，超聲30 min能較完全提取有效成分。綜上，最終確定樣品稱取0.5 g，加70 %乙醇50 ml，超聲處理30 min，作為本試驗的提取方法。

3.2 色譜條件的選擇

在參考相關文獻[3-7]的基礎上，通過摸索條件，考察選擇乙腈-水、乙腈-0.1 %磷酸溶液、乙腈-0.4 %磷酸溶液、乙腈-0.05 %磷酸溶液及不同比例發現，乙腈-0.05 %磷酸溶液梯度洗脫可將3種成分較好分離；在試驗中，用DAD在190～400 nm進行波長掃描，發現芍藥苷、甘草苷、甘草酸分別于230，280，250 nm處有較大吸收，可作為檢測波長。綜上，色譜條件最終確定流動相為乙腈-0.05 %磷酸溶液，梯度洗脫，流速為1 ml/min，柱溫為30 ℃，檢測波長為230 nm（芍藥苷）、280 nm（甘草苷）、250 nm（甘草酸）。

3.3 建議

由本文結果可見，目前本省內生產環節和市場流通領域的胃靈顆?？傮w質量較好，但是存在不同生產企業之間質量差異較大和同一生產企業不同批次間質量離散性較大等問題。針對所發現的問題提出以下建議：一是加強生產環節的監督控制，嚴格把控原藥材質量，生產企業要進一步優化生產工藝，對產品進行更深入研究；二是鑒于法定質量標準過于簡單，建議對本制劑進行質量標準提高，完善其檢驗項目，以加強該制劑整體質量的監督控制，從而確保藥品安全有效。