肥大細胞甲苯胺藍飽和碳酸鋰染色法

王玉文，宋宗義，趙云龍，劉建民

肥大細胞呈圓形或卵圓形，細胞核較小，位于細胞中央，胞質充滿大小一致的異染性顆粒。其廣泛分布于皮膚及內臟黏膜下的微血管周圍，可分泌多種細胞因子，參與機體創傷修復、Ⅰ型超敏反應等生物學行為[1-2]。肥大細胞染色劑種類較多，其中甲苯胺藍最為常用，肥大細胞的細胞核可以被甲苯胺藍染成藍色，細胞質內異染性顆粒被染成紫紅色。在肥大細胞染色實驗時，發現在配置好的甲苯胺藍水溶液中加入過飽和的碳酸鋰，極大提高了甲苯胺藍的染色能力，縮短了染色時間。本科室選用兩種甲苯胺藍染色液進行對比，并對染色結果進行分析，收到良好效果，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料選取我院病理科存檔的喉、肺組織活檢標本各10例，標本均經10%中性福爾馬林固定，脫水后包埋成組織蠟塊，每個蠟塊3 μm厚連續切片。

1.2 方法

1.2.1甲苯胺藍硫酸混合染色法 A液(0.5%甲苯胺藍染色液)：稱取0.5 g甲苯胺藍溶解于100 mL純水中。B液(3%硫酸水溶液)：取適量濃硫酸按比例稀釋成3%的水溶液。染色時取0.5 mL A液和20 μL B液混合成工作液(pH 1.90)，石蠟切片脫蠟復水，用工作液染色30 min，水洗晾干或冷風吹干，中性樹膠封固[3]。

1.2.2甲苯胺藍硼酸鹽染色法 試劑購自Phygene公司，甲苯胺藍染色液中含有1%硼酸鈉(pH 3.10)。石蠟切片脫蠟復水后染色10 min，染色較深時可用醋酸分化液分化，水洗晾干或冷風吹干，中性樹膠封固。

1.2.3甲苯胺藍飽和碳酸鋰染色法 A液(0.5%甲苯胺藍染色液)：稱取0.5 g甲苯胺藍溶解于100 mL純水中。B液(醋酸分化液)：取0.5 mL冰醋酸加入99.5 mL純水中。染色時取20 mL A液加入過量的碳酸鋰使染色液達到飽和狀態，此為工作液。石蠟切片脫蠟復水后用工作液染色1～5 min后水洗，B液分化20～30 s，水洗晾干或冷風吹干，中性樹膠封固。

甲苯胺藍飽和碳酸鋰染色液pH 10.13，為了探討碳酸鋰在染色液中的作用，用氫氧化鈉將A液pH調至10.13，配制為甲苯胺藍堿性染色液，染色方法同上。

2 結果

本組對喉、肺組織活檢標本各10例進行3種方法染色，結果顯示：(1)甲苯胺藍硫酸混合染色法中組織著色最淺，肥大細胞異染性顆粒被染成紫藍色，與其它組織對比不夠清晰。(2)甲苯胺藍硼酸鹽染色法將異染性顆粒染成紫紅色。(3)甲苯胺藍飽和碳酸鋰染色法將異染性顆粒染成清晰的紫紅色，與細胞核對比十分明顯，最易觀察。本組結果提示甲苯胺藍飽和碳酸鋰法染色效果最佳(表1、2，圖1、2)。

3 討論

甲苯胺藍屬于醌亞胺堿性染料，含有2個發色團：胺基、醌型苯環。此外，甲苯胺藍還含有兩個助色團，其促使染料電離成鹽類，幫助染料與被染物質結合，使組織上色[4]。肥大細胞胞質中含有嗜堿性顆粒，顆粒內含有肝素、組胺和5-羥色胺，屬于硫酸酯，具有異染性，可被甲苯胺藍染成紫紅色。

蘇木精與甲苯胺藍同為堿性核染料，在配制蘇木精染色液時，乙酸的加入量對蘇木精染色性有較大影響。乙酸加入量過多、pH較低時，染色液選擇性增強，但是染色能力減弱。反之，乙酸加入量不足、pH較高時，染色液選擇性減弱，染色能力增強，細胞核、質均上色，需要進行分化。

甲苯胺藍染色液也有類似的現象，甲苯胺藍硫酸混合染色法染色液pH約為1.90時，甲苯胺藍染色能力較弱，染色時間需要30 min；但是甲苯胺藍選擇能力較強，細胞質幾乎不著色，細胞核被染成藍色，肥大細胞異染性顆粒被染成紫藍色，染色結果與丁桂齡等[5]報道一致。甲苯胺藍硼酸鹽染色法染色液pH約為3.10時，甲苯胺藍染色能力有所增強，染色時間縮短；但是選擇能力有所降低，細胞質也會著色，細胞質著色較深時可以用醋酸分化。

甲苯胺藍飽和碳酸鋰染色法染色液pH最高(約為10.13)，此時甲苯胺藍染色能力最強，但是選擇能力較弱。切片染色1 min組織即可上色，但細胞質著色較重，需用醋酸分化。醋酸分化后，細胞質藍色大部分被脫去，細胞核呈藍色，肥大細胞內異染性顆粒呈紫紅色，對比非常明顯，利于觀察鑒別。

表1 喉組織的3種不同甲苯胺藍染色比較

表2 肺組織的3種不同甲苯胺藍染色比較

①A①B①C②A②B②C

許多研究認為，酸性染液可增強肥大細胞胞質顆粒的異染性，染液配制時應選用酸性試劑[1,3]。酸性條件雖然可以增加染色液的選擇性，但是pH過低會削弱染色液的染色能力，染色時間大大延長，切片對比效果不明顯。

甲苯胺藍飽和碳酸鋰染色法為堿性染色液，與前兩種酸性染色液有較大不同，卻得到了較好的染色結果。通過氫氧化鈉將甲苯胺藍水溶液的pH值調高到甲苯胺藍飽和碳酸鋰染色液相同的pH值，獲得同樣的染色效果，證明碳酸鋰只是為甲苯胺藍提供堿性的溶液條件，其并未參與染色反應。甲苯胺藍在堿性條件下染色能力為何會大幅增強，作者推測：甲苯胺藍分子含有2個助色團，堿性條件促進了助色團的電離，充分電離的助色團增強了甲苯胺藍與組織的親和力，使組織快速著色。

甲苯胺藍硫酸混合染色法和甲苯胺藍硼酸鹽染色法是酸性染色液，這兩種染色液更加注重染色液的選染性。甲苯胺藍飽和碳酸鋰染色法是堿性染色液，該染色液的染色能力更加突出，染色時間短，符合手術冷凍切片的染色要求，并且配制方法簡單，值得推廣應用。