甲哌鎓原藥及其制劑的高效液相親水色譜分析

王東連，張 杰，嚴艷倫，姜治國

(云南云大科技農化有限公司，云南 昆明 650000)

甲哌鎓，ISO通用名稱：mepiquat chloride。其他中文名稱：助壯素、縮節胺、調節啶、甲哌啶、壯棉素、縮節靈?；瘜W名稱：N，N-二甲基哌啶鎓氯化物。分子式：C7H16NCl。相對分子質量：149.66 (按2007年相對原子質量計)。具有植物生長調節作用。22.5% 28-表蕓·甲哌鎓水劑是由甲哌鎓、28-表高蕓苔素內酯復配而成的棉花株鈴調控劑。藥效實驗結果表明，甲哌鎓和28-表高蕓苔素內酯復配后可顯著促進根系生長，健株穩長、塑造株型、改善葉片功能和群體結構，最終達到優化成鈴結構、增加鈴數和鈴重的功效，對棉花增產有顯著的增效作用。本品用于調控棉花株型、防止蕾鈴脫落、提高產量，對于解決棉花生產中徒長和蕾鈴脫落的問題有廣闊的應用前景。迄今為止，大多數文獻和相關標準所用的檢驗方法大致為離子對色譜柱與電導檢測器結合、離子對試劑與反相色譜柱和紫外檢測器結合、電位滴定與紙層析結合、液質聯用等?，F有檢測方法，大部分不能在色譜柱上很好的保留。電位滴定法又測定步驟多；花費時間長；靈敏度低，對制劑產品的準確性更差。經查閱甲哌鎓化學結構和相關性質后，決定采用近幾年快速發展的親水色譜技術與VWD或DAD檢測器結合的方式進行分離檢測。該色譜技術即使是強極性的化合物也能通過HILIC使用與反相HPLC相同的系統和溶劑實現分離，大大降低了極性分析的成本和工作量。

1 試驗部分

1.1 試劑和溶液 甲哌鎓標準品：質量分數99.2%；22.5% 28-表蕓·甲哌鎓水劑：是由甲哌鎓、28-表高蕓苔素內酯復配而成。乙腈：色譜純，飛世爾；乙酸銨：色譜純；試驗用水：去離子水。

1.2 儀器 高效液相色譜儀(帶DAD檢測器)：安捷倫1260 II；色譜柱：默克ZIC?-HILIC，2.1×100 mm，3.5 μm；電子分析天平：梅特勒AB204-E；超聲波清洗機：新芝SB25-12DTD。

1.3 高效液相色譜操作條件 流動相：80%的乙腈+20%的25 mmol/L乙酸銨水溶液；流速：0.2 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：210 nm；進樣體積：2 μL；保留時間：約為4.18 min左右。

1.4 測定步驟

1.4.1 標準溶液的配制 準確稱取甲哌鎓標準樣品0.10 g(精確到0.000 2 g)，用80%的乙腈+20%的25 mmol/L乙酸銨水溶液溶解，并定容至25 mL容量瓶中。搖勻，超聲波脫氣15 min，過0.22 μm的尼龍膜至1.5 mL進樣瓶中，備用。

1.4.2 原藥及制劑樣品溶液的配制

1.4.2.1 原藥測定溶液的配制 準確稱取甲哌鎓原藥0.10 g(精確到0.000 2 g)，用80%的乙腈+20%的25 mmol/L乙酸銨水溶液溶解，并稀釋至25 mL容量瓶中，搖勻，超聲波脫氣15 min，過0.22 μm的尼龍膜至1.5 mL進樣瓶中，備用。

1.4.2.2 水劑測定溶液的配制 用已測定甲哌鎓原藥按照工藝配方制成一個待測樣品，同時制備一個制劑空白。然后，準確稱取含0.10 g甲哌鎓的水劑樣品(精確至0.000 2 g)于25 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，超聲波脫氣，過濾備用。

1.4.3 測定 在上述色譜條件下，待儀器穩定后，先注入數針標樣溶液，計算各針峰面積，直至相鄰2針標樣溶液峰面積變化<1.5%后，按照標樣、試樣、試樣、標樣的順序進樣測定。

1.4.4 計算 將測得的2兩針試樣溶液以及試樣前后2針溶液中甲哌鎓的峰面積，分別進行平均。甲哌鎓的質量分數X1(%)按公式(1)進行計算：

(1)

式中：

m1——標準品甲哌鎓的質量，g；

m2——試樣的質量，g；

P1——標準品甲哌鎓的質量分數，%。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的選擇 甲哌鎓屬于強極性化合物，在液相分離中使用反相柱或者陽離子柱，保留時間較短且易受到溶劑峰的干擾，很難達到分析定量的目的。其吸收最佳波長195 nm[1]，但195～220 nm處吸收較強。用安捷倫親水色譜柱發現波長增大靈敏度降低，柱壓變化較大，柱子耐用性明顯下降。且未得到高靈敏度，檢測波長選擇較低。后經過調研，發現默克ZIC?-HILIC柱帶有PEEK內襯[2]，能很好的降低極性化合物在柱子上的殘留。經過多次試驗，甲哌鎓在默克ZIC?-HILIC柱上不僅靈敏度高，而且在210 nm波長處也有很好的響應及線性，同時也能排除低波長的溶劑效應。所以將波長選擇為210 nm。親水色譜柱[2]，即使是強極性的化合物也能通過HILIC使用與反相HPLC相同的系統和溶劑實現分離，大大降低了極性分析的成本和工作量，且提高了分離度。此液相條件下分離，目標物不受雜質峰干擾。首先，用乙腈-水95+5→60+40做梯度看甲哌鎓在柱子上的保留情況。結果顯示保留較好。再次，用乙腈-水90+10和80+20兩個等度對目標物進行洗脫看保留時間。結果表明，當80+20等度洗脫時能節約時間且與干擾峰很好地分離。第三，由于峰的對稱性較差，所以選擇加入緩沖鹽來改善峰型。首選甲酸銨與乙酸銨。本實驗直接采用乙酸銨，在25 mmol/L濃度時能很好的得到保留和分離(圖1)。

圖1 甲哌鎓紫外光譜圖

2.2 分析方法線性相關性試驗 標準溶液分別進樣1～5 μL。在上述色譜條件下進行測定，以進樣量為縱坐標y，以峰面積為橫坐標x，繪制標準曲線，得到線性方程為y=0.002x-0.144 6，相關系數r=0.998 9[3]。甲哌鎓的線性相關性實驗結果(表1)，線性關系(圖2)。

表1 線性相關實驗結果

圖2 甲哌鎓線性關系圖

2.3 分析方法的精密度試驗 在相同的色譜條件下，從同一產品中準確稱取5個試樣，在上述色譜條件下進行分析并求平均值、標準偏差和變異系數，結果表明：甲哌鎓的標準偏差為：0.209 6，變異系數為：0.89%(表2)。

表2 分析方法的精密度試驗結果

2.4 分析方法的準確度試驗 試驗采用產品空白制劑中添加已知質量分數的試樣5份，按照1.4進行分析，結果表明：甲哌鎓的平均回收率為：99.8%(表3)。

表3 分析方法的準確度試驗結果

2.5 非分析物干擾的判定 在評價準確度時，需要包含非分析物質干擾試驗，因為助劑中的任何干擾物質都會導致分析方法出現偏差，分析時同時測定不帶助劑的原藥和空白樣品，證明其無干擾，并提交色譜圖。通過不加助劑的原藥色譜圖和空白樣品色譜圖判定，非分析物對有效成分不構成干擾，相關非分析物質干擾典型圖譜(圖3～7)。

圖3 溶劑空白

圖4 制劑空白

圖5 標樣圖譜

圖6 甲哌鎓水劑圖譜

圖7 甲哌鎓原藥圖譜

3 結論

綜上所述，用本分析方法對甲哌鎓原藥及22.5% 28-表蕓·甲哌鎓水劑進行測定分析，方法準確度高，精密度高，分析方法簡便、快速，適用于甲哌鎓原藥及22.5% 28-表蕓·甲哌鎓水劑產品的質量控制分析。