QuEChERS 聯合UPLC-MS/MS 和GC-MS/MS測定枸杞子中33 種禁用農藥殘留

羅麗娟，周勁松，2，馬恩耀，2，孫心恒，梁朝鵬，謝珊珊

（1.廣東漢潮中藥科技有限公司/廣東省傳統中藥創新中心，廣州 510000；2.廣州采芝林藥業有限公司，廣州 510360）

枸杞子為茄科植物寧夏枸杞（Lycium barbarumL.）的干燥成熟果實。夏、秋二季果實呈紅色時采收，熱風烘干，或晾至皮皺后，曬干，除去果梗。枸杞子具有滋補肝腎、益精明目的作用，用于虛勞精虧、腰膝酸痛、眩暈耳鳴、陽萎遺精、內熱消渴、血虛萎黃、目昏不明［1-3］。枸杞是中國傳統的名貴中藥材和農業經濟作物，原產地為寧夏，2002 年被列入國家衛生部藥食兩用物品名單。枸杞具有良好的保健功效，每年的消費群體和消費量較大［4］。枸杞的果期較長，規?；N植使得病蟲害的發生較為頻繁和嚴重，為了提高產量，農藥的使用不可避免。本研究以枸杞子為對象展開試驗，前處理方法為QuECh-ERS 法［5-10］，檢測方法選用GC-MS/MS 與UPLC-MS/MS，對枸杞子中33 種禁用農藥殘留進行檢測。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

氣相色譜-三重四級桿質譜聯用儀（8890-7000D，美國Agilent 公司），超高效液相色譜-三重四級桿質譜聯用儀（1290-6470，美國Agilent 公司），搖擺式高速粉碎機（DFY-400C，溫嶺市林大機械有限公司），電子天平（AP225WD，日本島津公司），全自動氮吹儀（Auto EVA 60，廣州市錦泉儀器科技有限公司），多管渦旋混合儀（EOAA-HM-01，廣州利輝生物科技有限公司），DB-17MS 氣相色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm，美國Agilent公司）。

1.2 試劑

55 種禁用農藥混合對照溶液（CDAA-M-490407-TY-1.2 mL，上海安譜實驗科技股份有限公司），磷酸三苯酯標準溶液（CDAA-S-412134-JD-1 mL，上海安譜實驗科技股份有限公司），提取鹽（Q221214，納譜分析技術有限公司），凈化管（Q221230，納譜分析技術有限公司），乙腈（2022081023，CNW），甲酸（GR，廣州化學試劑廠），甲酸銨（GR，天津市科密歐化學試劑有限公司），純化水。

1.3 樣品

20 批枸杞子樣品產地見表1。

表1 枸杞子樣品相關信息

1.4 方法

1.4.1 樣品快速處理方法（QuEChERS） 精密稱取樣品粉末（過三號篩）3 g 于50 mL 離心管中，加入1%（體積分數，下同）冰乙酸溶液15 mL，渦旋2 min直至均勻，浸泡30 min，再準確加入15 mL 乙腈，以2 500 次/min 速率振蕩5 min，在冰浴中冷卻10 min，加入一包QuEChERS 凈化鹽包并立即搖勻，以2 500次/min 速率振蕩5 min，以4 500 r/min 速率離心5 min，緩慢倒取上清液15 mL 于QuEChERS 凈化鹽管中，搖勻，以2 500 次/min 速率振蕩5 min，以4 500 r/min 速率離心5 min，精密吸取上清液5 mL，于38 ℃氮吹濃縮至基本干燥的狀態，用乙腈溶液稀釋至1 mL，加入0.3 mL 內標溶液，混合搖勻，通過0.22 μm 濾膜，取濾液進行測定。

1.4.2 溶液的配制

1）混合對照品儲備溶液的制備。精密量取0.25 mL 55 種禁用農藥混合對照溶液（20～200 mg/L，介質為丙酮），置10 mL 容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。

2）混合對照品工作溶液的制備。精密量取混合對照品儲備溶液2 mL，置10 mL 容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。

3）內標溶液的制備。精密量取磷酸三苯酯標準溶液適量，加乙腈制成濃度為0.1 mg/L 的溶液。

4）空白基質溶液的制備。取空白樣品枸杞子藥材，同“1.4.1”的制備方法制成空白基質溶液。

5）基質混合對照溶液的制備。分別精密量取空白基質溶液1.0 mL（6 份），置氮吹儀上，40 ℃水浴濃縮至約0.6 mL，分別加入混合對照品工作溶液10、20、50、100、150、200 μL，加乙腈稀釋至1 mL，渦旋混勻，即得。

1.4.3 分析條件

1）高效液相色譜-串聯質譜法。色譜條件：色譜柱Phenomenex Kinetex C18（100 mm×2.1 mm，2.6 μm）；0.1%甲酸水溶液（含5 mmol/L 甲酸銨）為流動相A，0.1%甲酸水溶液（含5 mmol/L 甲酸銨）-乙腈溶液（體積比為5∶95）為流動相B；梯度洗脫，0～1 min 70%A；1～12 min 70%A→0%A；12～14 min，0%A；流速0.3 mL/min；柱溫40 ℃。

質譜條件：離子源為電噴霧（ESI）；正離子掃描；動態多反應監測；離子源溫度250 ℃；干燥氣溫度350 ℃；霧化器壓力310 kPa；毛細管電壓4 000 V。

2）氣相色譜-串聯質譜法。色譜條件：色譜柱Agilent DB-17ms（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；載氣為高純氦氣；升溫程序為初始溫度60 ℃，保持1 min，以30 ℃/min 升至120 ℃，再以10 ℃/min 的速率升溫至160 ℃，再以2 ℃/min 的速率升溫至230 ℃，最后以15 ℃/min 的速率升溫至300 ℃，保持6 min；進樣口模式為恒壓模式。

質譜條件：離子源為電子轟擊源（EI）；監測模式為多反應監測；進樣口溫度250 ℃；質譜傳輸接口溫度250 ℃。

2 結果與分析

2.1 方法學驗證

2.1.1 線性和范圍 選取空白基質枸杞子樣品，按基質混合對照溶液制備得到含有6 個濃度點的基質曲線，分別在超高效液相色譜-串聯質譜和氣相色譜-串聯質譜上進行跑樣分析，觀察其線性回歸方程和線性相關系數，結果見表2、表3。由表2、表3可以看出，各化合物在設計的范圍內線性關系良好。

表2 超高效液相色譜-串聯質譜法的回歸方程、相關系數、范圍、檢測限和定量限

表3 氣相色譜-串聯質譜法的回歸方程、相關系數、范圍、檢測限和定量限

2.1.2 定量限和檢測限 以信噪比為3（S/N=3）確定方法的檢測限（LOD），以信噪比為10（S/N=10）確定方法的定量限（LOQ），結果見表2、表3。從表2 和表3 可以看出，UPLC-MS/MS 方法的LOD在0.000 1～0.001 2 mg/kg，LOQ在0.000 1～0.004 0 mg/kg；GCMS/MS 方法的LOD在0.000 1～0.001 3 mg/kg，LOQ在0.000 1～0.004 3 mg/kg，定量限均小于《中華人民共和國藥典》標準中的定量限。

2.1.3 準確度和重復性 選取空白基質枸杞子樣品，在樣品制備過程中同時進行低、中、高3 個不同濃度的樣品加標，每個濃度的樣品加標各做3 個平行，計算這3 組樣品的加標回收率，分析其相對標準偏差RSD。結果表明，GC-MS/MS 各農藥化合物加標回收率為65.0%～102.1%，標準偏差RSD為0.2%～11.4%。其中，滴滴涕、硫丹、殺螨醇具有較好的回收率。UPLC-MS/MS 各農藥化合物加標回收率為65.8%～112.7%，標準偏差RSD為0.1%～9.3%。其中，克百威、涕滅威、蠅毒磷具有較好的回收率，表明該方法回收率良好，準確度高。

2.2 樣品測定

本研究選取了20 批次的枸杞子樣品，按上述QuEChERS 進行前處理，用UPLC-MS/MS 和GC-MS/MS 進行農藥殘留檢測，33 種禁用農藥中克百威有檢出，其余32 種禁用農藥均未檢出?！吨腥A人民共和國藥典》2020 年版規定33 種禁用農藥中克百威與3-羥基克百威之和以克百威表示，結果大于0.05 mg/kg的為不合格產品。由表4 可以看出，20 批次的枸杞子樣品中有14 批次的樣品檢出農藥殘留，其中8 批次為農藥殘留不合格樣品，占比40%，其中克百威最大含量為0.350 mg/kg。

表4 20 批枸杞子中檢出的農藥殘留量

3 討論

2020 版《中華人民共和國藥典》對藥材和飲片中的33 種禁用農藥殘留進行了規定，本試驗亦借此契機建立對應的檢測方法，靈敏度與準確度均符合農藥殘留分析要求。在隨機檢測中，發現部分批次枸杞子有不合格或陽性檢出的情況，表明枸杞子在種植過程中存在著農藥超標使用的問題以及環境污染嚴重等現象。應當建立一種靈敏度高、穩定性好、檢測限低的方法，對枸杞子中的禁用農藥殘留含量進行監測，為中藥材的質量控制提供支持。