ICP產婦外周血及胎盤組織miR-155、IGFBP-3表達與妊娠結局的關系

孫荻娜

妊娠期肝內膽汁淤積癥(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是一種在婦女妊娠中、晚期特有并發癥,屬于肝臟疾病范疇[1],可以表現出不同程度皮膚瘙癢、黃疸等癥狀[2]。ICP發病率約為0.1%～15.6%,血清總膽汁酸是診斷的敏感指標,多數ICP預后良好,對于孕婦自身健康來說威脅性不大,相關癥狀在妊娠期結束后便會消失,但膽汁酸升高引發的代謝毒性會增加早產、胎死宮內、剖宮產、羊水糞染等圍生兒不良結局的發生率,嚴重影響孕婦及胎兒健康[3-4]。miR-155是一種長度僅有19～25個核苷酸非編碼RNA,其表達水平在子宮內膜癌和多囊卵巢綜合征患者中會明顯上升,造成婦女不孕,是不良妊娠結局的危險因素[5]。胰島素樣生長因子結合蛋白-3(Insulin-like growth factor binding protein-3,IGFBP-3)是ICP的敏感指標,肝臟是IGFBP-3 主要合成與分泌場所,其水平在ICP產婦中波動較大[6]?；诖吮狙芯吭贗CP產婦miR-155、IGFBP-3表達水平上探討其與妊娠結局的關系,旨在為今后臨床有效預防不良妊娠結局提供一定參考依據。

對象與方法

1. 研究對象:回顧性選取2019年1月—2021年9月在本院收治的50例ICP產婦納入ICP組,另隨機選擇同期本院進行產前檢查的50例健康產婦作為對照組。納入標準:(1)納入ICP組產婦均符合第九版《婦產科學》中ICP相關診斷標準[7]:血清總膽汁酸≥40 μmol/L,瘙癢嚴重伴或不伴黃疸、皮膚抓痕;(2)單胎妊娠;(3)ICP產婦病情可控;(4)自然受孕。排除標準:(1)肝、腎、心、腦等部位存在嚴重病變;(2)合并惡性腫瘤;(3)精神及語言存在障礙,無法正常溝通;(4)研究對象在妊娠前自身存在嚴重免疫性疾病或急慢性病。

2.研究方法:

(1)根據研究目的和研究內容,收集兩組臨床資料,包括年齡、體質指數(Body Mass Index,BMI)、受孕次數、平均孕周及妊娠結局等信息。統計兩組妊娠結局情況,包含早產(自發性和醫源性),胎兒窘迫、羊水污染、低出生體重、新生兒窒息。

(2)采用實時熒光定量 PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技術對兩組研究對象外周血及胎盤組織miR-155、IGFBP-3基因表達水平進行檢測。所有研究對象均于入院后分娩前清晨進行空腹靜脈采集外周血樣3 mL,高速離心后,保留血清,放于-20 ℃冰箱中保存用于后續檢測。孕婦分娩完成后,使用生理鹽水對胎盤進行沖洗,在母體面中央連接臍帶處剪取胎盤組織,剪取過程需避開羊膜層、出血點及鈣化區,每塊組織體積約為1 cm3。將組織塊放入-80 ℃冰箱進行凍存。通過RNA提取試劑盒(TSP413,北京擎科生物科技有限公司)提取總RNA,隨后通過逆轉錄試劑盒(TSK311S,北京擎科生物科技有限公司)將RNA逆轉錄成cDNA,然后通過q-PCR試劑盒(10200ES60,翌圣生物科技上海有限公司)以cDNA為模板對目的基因進行實時熒光定量檢測,q-PCR擴增條件:95 ℃預變性5 min,95 ℃變性10 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,共35個循環。采用2-ΔΔCt法計算基因相對表達量,各目的基因引物序列見表1。以上所有操作均按照試劑盒說明書嚴格進行。

表1 目的基因上下游引物序列

(3)采用全自動化生化分析儀測定兩組研究對象外周血清中總膽汁酸(total bile acid,TBA)、總膽紅素(total bilirubin,TBIL)、直接膽紅素(direct bilirubin,DBIL)、谷丙轉氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)水平進行檢測。

(4)根據分娩結局,將研究對象分為不良妊娠結局組和良好妊娠結局組,比較兩組血清miR-155、IGFBP-3表達水平比較。不良妊娠結局包括早產(自發性和醫源性),胎兒窘迫、羊水污染、低出生體重、新生兒窒息。

結果

1. 兩組產婦臨床資料比較:兩組年齡、BMI、平均孕周、受孕次數和分娩次數等一般資料比較無統計學差異(P>0.05),結果具有可比性。見表2。

表2 比較兩組臨床資料

2. 兩組miR-155、IGFBP-3基因表達水平情況:ICP組外周血清及胎盤組中miR-155基因表達水平明顯高于對照組,而IGFBP-3基因表達水平均低于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組miR-155、IGFBP-3表達水平比較

3. 兩組外周血清中TBA、DBIL及TBIL水平比較:ICP組外周血清中TBA、TBIL、DBIL及ALT水平均明顯高于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 兩組肝功能相關指標表達水平比較

4. 兩組不良妊娠結局發生情況:ICP組早產、羊水污染、低出生體重發生率均明顯高于對照組(P<0.05)。見表5。

表5 兩組妊娠結局對比 [例(%)]

5.ICP組血清 miR-155、IGFBP-3表達水平與肝功能指標相關性分析:血清TBA、TBIL、DBIL及ALT水平均與miR-155表達水平呈正相關,與IGFBP-3表達水平呈現負相關(P<0.05)。見表6。

表6 ICP組血清 miR-155、IGFBP-3水平與肝功能指標相關性

6.不良妊娠結局組和良好妊娠結局組血清miR-155、IGFBP-3表達水平比較:50例產婦有16例出現不良妊娠結局。不良妊娠結局組血清miR-155高于良好妊娠組,IGFBP-3低于良好妊娠組(P<0.05)。見表7。

表7 比較不良妊娠結局組和良好妊娠結局組血清miR-155、IGFBP-3表達水平

7. 血清miR-155、IGFBP-3表達水平對不良妊娠結局預測價值:血清miR-155、IGFBP-3 mRNA預測不良妊娠結局的AUC分別為0.736、0.796(P<0.05)。見圖1、表8。

圖1 miR-155、IGFBP-3 mRNA預測不良妊娠結局ROC曲線

表8 miR-155、IGFBP-3 mRNA預測不良妊娠結局的ROC特征

討論

在臨床婦產科中,ICP是一種常見病癥,膽汁酸水平上升是ICP產婦主要病理現象,主要發生在孕婦妊娠期中、晚期且發病率較高[8]。ICP癥狀如果不能得到及時緩解,會導致孕婦出現新生兒窒息、低出生體重、胎兒窘迫等不良妊娠結局,對圍生兒生命健康造成巨大危害。因此,如何快速找到ICP產婦不良妊娠結局的誘因,并對產婦進行疾病預防和治療是臨床醫生所面臨的巨大挑戰。

研究發現在多種疾病發生、發展中miRNA都參與其中,其水平會隨著患者疾病進展發生改變[9-10]。本研究中,ICP產婦的miR-155水平明顯上升,而IGFBP-3表達水平明顯降低,提示miR-155和IGFBP-3可能參與了ICP發生過程。miR-155與很多婦科疾病都存在密切聯系,miR-155高表達可以促進宮頸癌和乳腺癌疾病惡化及淋巴結轉移,可以引發婦女流產,同時還可以通過調控血管生長因子產生參與妊娠并發癥發生過程[11-12]。 IGFBP-3 是 IGF家族中成員之一,是妊娠晚期孕婦中豐富度最高一種結合蛋白,其水平會隨著孕期延長而增加[13]。Liao[14]等人認為妊娠晚期子癇前期產婦血清中IGFBP-3水平會明顯上調,對于妊娠合并子癇前期具有一定診斷價值。殷欣欣[15]等人也通過研究證實胎盤組織中 IGFBP-3表達水平降低會造成胎兒生長受限,引發不良妊娠結局。研究表明在肝細胞癌中,miR-155可以抑制IGFBP-3表達來促進疾病發生、進展[16]?；诖?推測在ICP產婦中也存在相似調控方式。

TBA、TBIL、DBIL及ALT均屬于肝功能指標,其表達水平在一定程度上可以反映出ICP發病風險以及不良妊娠結局。本研究結果發現ICP組產婦TBA、TBIL、DBIL及ALT水平均明顯高于對照組。對兩者不良妊娠結局進行統計對比,發現ICP組早產、羊水污染、低出生體重發生率均明顯高于對照組,以上研究結果與金嬪嬪[17]、謝之芳[18]等人研究結果相似。分析其原因可能是因為ICP 孕婦建議終止妊娠時間為34～39周,較正常孕婦早,因此早產發生率較對照組高。孕婦在妊娠中、晚期其機體大量分泌雌激素,使得膽酸代謝出現障礙,進而導致肝臟功能受到損傷,無法暢通將膽鹽排泄出去,最終使膽汁大量淤積在肝中,而后膽酸會通過胎盤向胎兒區域進行擴散,使得膽汁酸鹽在胎盤沉積,使絨毛間隙變窄影響胎兒氧供,導致胎兒生長受限,低出生體重發生率顯著增加。此外,膽汁酸還可以促進胎兒腸蠕動,引起胎糞排泄,使羊水污染率增加,誘發 ICP 孕婦提前分娩[19]。為了進一步探究miR-155、IGFBP-3表達水平與不良妊娠結局關系,本研究分別對ICP組血清miR-155 mRNA、IGFBP-3 mRNA與TBA、DBIL、TBIL、ALT水平進行相關性分析,發現上述肝功能指標與miR-155 mRNA呈正向關,與IGFBP-3 mRNA水平呈負相關,且miR-155 mRNA和IGFBP-3 mRNA對不良妊娠結局具有一定預測價值。IGFBP-3為妊娠晚期胰島素樣生長因子1(insulin-like growth factor 1,IGP-1)的主要結合蛋白,IGFBP-3水平降低可引起IGF-1結合率降低,降低IGF-1生物利用度,增加胎兒并發癥,而IGFBP-3水平降低還可促進膽汁酸分泌增加,增加圍生兒不良結局發生率。究其原因可能是,miR-155水平上調后抑制了IGFBP-3 表達,當IGFBP-3 表達水平受到抑制后導致胰島素樣生長因子-2活性降低,阻礙了膽汁排泄,導致膽汁在肝臟中積累進一步加重,進而造成不良妊娠結局發生?；诒狙芯客茰ymiR-155可能通過下調IGFBP-3表達,促進膽汁酸分泌參與ICP的發生發展,其具體作用機制還需進一步研究。相比于傳統血清總膽汁酸預測ICP預后,本文通過miR-155和IGFBP-3不僅可有效預測ICP預后,但能避免血清總膽汁酸升高增加產婦不良結局。

綜上所述,ICP產婦血清及胎盤中miR-155 和IGFBP-3 表達水平具有較好一致性,且與妊娠結局存在一定相關性,其可能通過調節肝功能指標變化進而影響ICP預后不良結果。但由于本文納入臨床樣本量較小,需擴大樣本量進一步研究分析。在臨床中可以考慮對ICP產婦血清中miR-21、IGFBP-3 水平的檢測來預測不良妊娠結局發生風險,為治療方案的合理制定及實施提供思路,以此降低ICP產婦不良妊娠結局發生。