氣相色譜法測定N,N-二異丙基乙胺中的有關物質

廉貞霞，李 霞,2，姜鷹雁，楊 帥，劉延新,2，楊海霞*

（1.山東省藥學科學院 山東省生物藥物重點實驗室，山東 濟南 250101；2.山東福瑞達醫藥集團有限公司 山東省黏膜與皮膚給藥技術重點實驗室，山東 濟南 250101）

N,N-二異丙基乙胺（N,N-diisopropylethylamine，DIPEA）是重要的醫藥、化工原料，可作為關鍵中間體使用，且在醫藥、電子和農藥等各領域有著廣泛應用[1]。其不僅可用于制造醫藥麻醉劑、農藥除草劑，還可用作胺、二氧化碳和鹵代烴縮合生成脲烷反應中的縮合劑及高壓條件下酯水解的催化劑[2]。DIPEA是一種優良的有機溶劑，歐盟將來可能對其作為基因毒性雜質進行控制。

二異丙胺作為DIPEA生產的主要原料[3]，也是主要工藝雜質。目前尚未檢索到DIPEA中有關物質測定方法的報道。本文根據二異丙胺及DIPEA易揮發的性質及DIPEA的其他文獻測定方法[4-6]，建立了氣相色譜測定DIPEA中有關物質的方法，二異丙胺作為已知雜質進行控制。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent 7890A型氣相色譜儀，包括G4513A型進樣器和FID檢測器（美國安捷倫科技有限公司）；XS-205DU型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 藥品與試劑

DIPEA（批號：20180320，20180502，20191008）；二異丙胺（北京壇墨質檢科技股份有限公司，批號：20171310）；乙腈（色譜純，天津賽孚瑞科技有限公司，批號：20170415002）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細管柱（30 m×0.53 mm，3.0 μm），載氣為氮氣，流速為2.2 ml/min，進樣口溫度為210 ℃，FID檢測器，檢測器溫度為250 ℃，程序升溫：起始溫度為50 ℃，維持5 min，再以每分鐘20 ℃的速率升溫至200 ℃，維持3 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 二異丙胺對照品溶液：精密稱取二異丙胺對照品約15 mg，置10 ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加乙腈稀釋并定容至刻度，搖勻，作為對照品貯備液，精密量取5 ml，置100 ml量瓶中，加乙腈稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取DIPEA約50 mg，精密稱定，置10 ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 空白對照溶液 以乙腈作為空白對照溶液。

2.3 測定法

精密量取供試品溶液及二異丙胺對照品溶液各1 μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，已知雜質二異丙胺按外標法計算，不得過0.15 %，其他單雜及總雜按面積歸一法計算，其他單雜不得過0.15 %，總雜不得過0.5 %。

2.4 專屬性試驗

分別精密量取對照品溶液、供試品溶液和空白對照溶液各1 μl，按2.1項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，見圖1。結果表明，空白對照溶液不干擾樣品中有關物質的測定；供試品溶液中已知雜質二異丙胺與各個峰之間及其他各雜質峰之間分離度均大于1.5，均已達到完全分離，表明所建立方法專屬性良好。

圖1 專屬性試驗GC圖譜

2.5 檢測限和定量限

取對照品溶液，用乙腈逐級稀釋，直接進樣，記錄色譜圖。以信噪比約為3時的溶液質量濃度為檢測限，結果得二異丙胺的檢測限為0.44 μg/ml，相當于供試品溶液濃度的0.0088 %；以信噪比約為10時的溶液質量濃度為定量限，結果得二異丙胺的定量限為0.74 μg/ml，相當于供試品溶液濃度的0.0148 %。

2.6 線性關系試驗

精密稱取二異丙胺對照品14.70 mg，置10 ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加乙腈稀釋并定容至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液0.1，0.4，0.5，0.6，1.0 ml，分別置于10 ml量瓶中，用乙腈稀釋并定容至刻度，搖勻，即得系列濃度對照品溶液。取定量限溶液及系列濃度對照品溶液，依次按濃度從低到高進樣，以峰面積A為縱坐標，以濃度c（μg/ml）為橫坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程為A=1.4716c-0.1560，r=0.9998。結果表明在0.74～14.70 μg/ml范圍內，二異丙胺峰面積與濃度均呈良好的線性關系。

2.7 精密度試驗

精密量取2.2.1項下對照品溶液1 μl，注入氣相色譜儀進行分析，連續進樣6針，記錄色譜圖。計算得二異丙胺峰面積的RSD為1.56 %（n=6），表明方法精密度良好。

2.8 回收率試驗

取已測定二異丙胺含量的DIPEA約50 mg，精密稱定，分別置9個10 ml量瓶中，分別精密量取2.2.1項下的對照品貯備液0.2，0.25，0.3 ml各3份，分別加入上述9個量瓶中，作為80 %，100 %，120 %濃度水平的溶液，每個濃度平行3份，按2.1項下色譜條件測定，扣除樣品中已知二異丙胺的含量，以測得量與加入量計算回收率，結果見表1。二異丙胺的平均回收率為95.81 %，RSD為2.96 %。表明方法準確度良好。

表1 回收率試驗結果

2.9 重復性試驗及中間精密度

按2.2項下方法配制對照品溶液和供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定二異丙胺、其他單雜及總雜含量，平行測定6份。二異丙胺含量的RSD為2.86 %，其他單雜含量的RSD為2.67 %，總雜含量的RSD為1.84 %（n=6），表明方法重復性良好。

另取樣品，于不同日期換不同的分析員，在不同的氣相色譜儀上，按重復性試驗項下方法，用同一批樣品同法試驗，并對試驗結果和重復性試驗結果，共12個數據進行分析。二異丙胺含量的RSD為3.26 %，其他單雜含量的RSD為2.51 %，總雜含量的RSD為2.74 %（n=12）。表明方法中間精密度良好。

2.10 耐用性試驗

取對照品溶液、供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，改變柱溫度、檢測器和進樣口溫度、載氣流量，對二異丙胺，最大單雜及總雜質的檢測結果均無明顯影響，表明方法耐用性良好。

2.11 樣品測定

取3批DIPEA各約50 mg，精密稱定，按2.2項下方法制備對照品溶液、供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定。已知雜質二異丙胺按外標法計算，其他單雜及總雜按面積歸一法計算，結果見表2。結果表明，3批樣品中有關物質測定結果均符合限度要求。

表2 樣品測定結果（n=3）

3 討論

3.1 溶劑的選擇

DIPEA易溶于醇、醚等有機溶劑，甲醇作為空白溶劑時對測定有干擾。更換乙腈作為溶劑，不干擾測定，故選用乙腈作為DIPEA有關物質檢查的溶劑。

3.2 方法選擇

取2.2項下對照品溶液、供試品溶液、0.5 %對照溶液（精密量取供試品溶液0.5 ml，置100 ml量瓶中，加乙腈稀釋并定容至刻度，搖勻），按2.1項下色譜條件進樣測定，分別采用面積歸一法，自身對照法及外標法計算二異丙胺含量，其他單雜及總雜結果見表3。

表3 不同方法樣品測定結果

由表3可見，3個方法的結果相近，最終確定已知雜質二異丙胺含量按外標法計算，其他單雜及總雜含量按面積歸一法計算。

3.3 限度討論

根據各批樣品檢驗結果，DIPEA中二異丙胺限度同最大單雜限度均定為0.15 %，總雜質限度定為0.5 %。

3.4 小結

方法學驗證和樣品測定結果表明，建立的色譜方法分離度好、靈敏度高、操作簡便、準確度好，可用于測定DIPEA中有關物質的含量，能更好地控制DIPEA的產品質量。