基于p16/ki67細胞學雙染檢測宮頸癌前病變的研究

潘壯國,韓淑霞

宮頸癌是常見的惡性腫瘤,雖然病因已被明確,但可以預防、治療甚至消除。近些年來宮頸病變的發病率逐年上升, 全球每年新發病例約50萬例,死亡病例約20萬例,對女性生命健康安全造成了嚴重的威脅[1]。目前針對于宮頸癌前期病變的篩查主要依靠宮頸液基細胞學(TCT)和人乳頭瘤狀病毒(HPV)的檢測。然而,TCT的檢查受限于醫師技術水平的高低和其本身靈敏度,故存在一定的局限性。此外,HPV檢測無法從根本上區分HPV是否為一過性感染或持續性感染。因此,目前的研究重點是尋找更準確的客觀指標,以便早期篩查宮頸病變患者。本次研究以56例患者為對象,進行了p16/ki67雙染檢測,旨在探討該檢測在宮頸病變篩查中的臨床價值,為篩查宮頸癌提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2023年3月至2023年8月就診于寧夏醫科大學總醫院宮頸病變門診的患者56例為研究對象,所有患者均行細胞學檢查、HPV檢測以及陰道鏡活檢,并將確診為宮頸病變和宮頸炎性疾病患者的脫落細胞分別進行p16/ki67細胞學雙染檢測。

1.1.1 納入標準 ①宮頸癌篩查結果異常的患者;②宮頸活檢確定為宮頸病變的患者;③可以配合研究的宮頸病變患者。

1.1.2 排除標準 ①取材前使用藥物保守治療患者;②存在宮頸病史及做過宮頸手術患者;③妊娠期患者;④存在免疫系統疾病、應用免疫性藥物治療患者;⑤存在精神疾患且不能配合的患者。

1.2 方法 所有患者均接受TCT檢查、HPV檢測、病理組織學檢查以及p16/ki67細胞學雙染檢測。

1.2.1 病理組織學檢查 所有患者均進行陰道鏡下活檢,由我院婦科宮頸病變門診醫師取材后交由病理科醫師將其制成石蠟切片并進行HE染色。

1.2.2 細胞學檢查 患者取膀胱截石位,由我院婦科門診醫師采取宮頸上皮脫落細胞,并將其固定于95%乙醇后進行巴氏染色,利用TBS診斷系統進行診斷,分別由2名經驗豐富的宮頸病變中心細胞學診斷室的醫師閱片。

1.2.3 p16/ki67雙染檢測 由專業技術人員對患者宮頸脫落細胞進行制片,試劑盒選用亞能生物p16/ki67細胞學雙染試劑盒,嚴格按照說明書進行手動免疫細胞化學染色。由病理科2名經驗豐富的副主任醫師及以上職稱醫師進行閱片。在同一細胞內同時出現細胞質染棕色和/或細胞核呈現紅色/玫紅色,為判定陽性標準;在同一細胞內未同時出現細胞質染棕色和/或細胞核染紅色,為判定陰性標準。

1.3 觀察指標及評價方法 以宮頸活檢病理結果作為診斷標準,分析p16/ki67免疫細胞雙染檢測在細胞學為NILM、ASC-US、LSIL以上病變分級患者中的陽性檢測率,比較細胞學檢查、HPV檢測、p16/ki67雙染檢測宮頸病變的價值,并以病理組織學為診斷的金標準,分析p16/ki67雙染檢測在宮頸癌前病變中的診斷價值,其中包括靈敏性、特異性、陽性預測值、陰性預測值以及一致性分析。

1.4 統計學方法 采用SPSS 27.0統計軟件,計數資料用百分比表示,細胞學檢查、HPV檢測以及雙染檢測的比較采用χ2檢驗。p16/ki67雙染檢測診斷宮頸癌前期病變與宮頸病理組織學結果的一致性使用Kappa檢驗,以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 宮頸癌篩查結果 56例研究對象中細胞學檢查為NILM患者15例,ASC-US患者18例,LSIL以上病變患者23例,p16/ki67雙染陽性共36例,在NILM、ASC-US、LSIL以上病變的分級患者中p16/ki67雙染陽性的比例分別是15.38%、66.67%、92%,隨著TCT分級增加,p16/ki67 染色的陽性率增加,差異有統計學意義(χ2=34.74,P<0.05),見表1。

2.2 p16/ki67雙染診斷宮頸病變的結果及價值 不同宮頸組織學診斷結果中慢性宮頸炎、CINⅠ、 CINⅡ、CINⅢ的患者中p16/ki67雙染陽性率分別為6.66%、75%、78.57%、100%,總體差異有統計學意義(χ2=59.26,P<0.05) 。p16/ki67免疫細胞化學染色陽性率與宮頸癌前期病變的嚴重程度呈現正相關。Kappa 檢測結果表明,p16/ki67細胞學雙染檢測與宮頸病理組織學檢測具有高度一致性(P<0.05),見表2與表3。

表1 不同宮頸細胞學檢測結果的患者p16/ki67雙染檢測陽性率的比較[n(%)]

表2 p16/ki67雙染診斷宮頸病變的結果(n)

表3 不同病理組織學診斷結果的患者p16/ki67雙染檢測陽性率的比較[n(%)]

2.3 p16 /ki67、TCT、HPV初篩方案診斷宮頸病變的價值比較 p16 /ki67細胞學雙染檢測宮頸病變的靈敏性、特異性、陽性預測值和陰性預測值分別是85.36%、 93.3%、97.22%、70%,相比HPV檢測與細胞學檢查大大提高了檢測的特異性,且擁有更高的陽性預測值,見表4。

表4 p16/ki67雙染、TCT、HPV診斷宮頸病變價值的比較

3 討論

p16蛋白和ki67增殖抗原是與宮頸癌具有密切聯系的2種生物蛋白標記物。p16蛋白能夠抑制細胞周期的進展,可以抑制CDK4/6介導的Rb基因蛋白產物的磷酸化,遏制細胞從G1期進入S期,從而使其高效地遏制了細胞的快速增殖[2-3]。ki67抗原是一種與細胞增殖關系密切的的核抗原,它與細胞增殖的表達呈現正相關。有研究表明,若在宮頸癌前期病變或者宮頸惡性腫瘤患者中,p16和ki67均呈現一個高表達水平,那么就可以認二者是宮頸癌前病變的高危因素[4-5]。

2012年,美國陰道鏡檢查和宮頸病理學會(ASCCP)制定的指南中指出,可以使用2種分子生物標記物p16蛋白和ki67抗原來輔助診斷宮頸鱗狀上皮內細胞病變[6-8]。其中p16基因的主要功能是通過抑制細胞周期依賴性蛋白激酶(CDK)的生物活性,從而達到抑制細胞增殖的作用。當HPV病毒持續感染發生時,會導致p16蛋白的表達位點上移,因此通過反饋機制,p16蛋白在宮頸病變患者中的表達呈現高水平[9-11]。ki67是一種細胞增殖抗原,能夠反應細胞增殖的程度。因此,在宮頸癌前期病變的篩查中能夠通過p16/ki67免疫細胞化學染色的檢測來完成,此方法具備較高的診斷準確性,可靠性可得到肯定。目前p16/ki67雙染主要用于分流ASC-US患者,有研究表明,p16/ki67雙染在檢測ASC-US患者的過程中能夠有效的進行分流,并在一定程度上減少了陰道鏡檢查的轉診率,從而防止高級別病變的發生[12-13]。同時應用p16/ki67細胞學雙染在檢測HSIL時,能夠在很大程度上提高檢測的準確性和篩查的重復性?？偠灾?在宮頸癌前期病變篩查中的p16/ki67細胞學雙染檢測擁有無創、高重復性、高特異性、高靈敏性等優點,能夠在很大程度上提高子宮頸高級別上皮內病變的陽性檢測率,并且具有非常高的臨床實用價值,應該大力推廣。

本次研究在細胞學中發現了36例p16/ki67雙染陽性的病例,其中NILM、ASC-US、LSIL以上病變分級患者的雙染陽性比例分別為15.38%、66.67%、92%。同時,通過比較不同宮頸組織學診斷結果,發現慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ的患者中p16/ki67雙染陽性率分別為6.66%、75%、78.57%、100%。本研究發現,在不同細胞學及組織學分級結果的患者中,p16/ki67細胞學雙染的患者陽性率差異具有統計學意義。病變越嚴重,p16/ki67陽性患者的比例越高。這表明HPV持續感染導致的宮頸上皮細胞快速增殖發展與p16/ki67陽性的患者比例有關[14-16]。此次研究的重點在于對宮頸病變患者的p16/ki67雙染檢測、不同細胞學檢查、HPV檢測以及病理組織學結果的比較,并評估p16/ki67雙染在細胞學、HPV和組織學結果中診斷宮頸病變的價值。本研究發現,在細胞學為LSIL以上病變患者中的陽性表達率更高,且p16/ki67雙染結果與病理組織學結果呈高度一致性,并且隨著宮頸病變級別的升高而趨于升高。因此,在處理p16/ki67雙染陽性的患者時,醫生們應該高度重視,并且需要采用多學科的方法進行診斷排查,在隨訪過程中要保持密切關注,并及時預測和發現HSIL等病變,以便進行早期診斷和治療。

綜上所述,p16/ki67雙染陽性率與宮頸病變的嚴重程度有密切關系,隨著宮頸病變級別的升高而升高,且在宮頸鱗狀上皮內病變的篩查中表現出較高的敏感性和特異性,在宮頸癌篩查中起著至關重要的作用和臨床意義。