探討熒光定量PCR 法與免疫膠體金法用于骨質疏松癥手術住院患者感染監控的診斷價值

吳敏芳，董明治，楊越，張艷，陳啟

曲靖市第一人民醫院檢驗中心，云南曲靖 655099

住院患者感染是醫療機構中一項嚴重的醫療安全問題，不僅給患者帶來痛苦，還增加了醫療成本和治療難度[1]。隨著抗生素耐藥性的增加和新興感染病原體的出現，感染控制變得更加復雜和緊迫。因此，建立有效的感染監控與預防體系對于保障患者安全和提高醫療質量至關重要。熒光定量聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction, PCR）法作為感染疾病診斷的關鍵手段之一，具有高度的敏感性和特異性，能夠快速準確地檢測病原體，指導臨床醫生及早制訂合理的治療方案[2]。在過去的幾十年中，隨著檢驗技術的不斷發展，熒光定量PCR 法檢驗已經成為感染控制和預防中不可或缺的工具[3]?；诖?，本研究選取2020 年3 月—2023年4 月曲靖市第一人民醫院收治的180 例骨質疏松癥進行手術治療疑似住院感染患者為研究對象，探討熒光定量PCR 法檢驗的臨床應用效果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院收治的180 例骨質疏松癥進行手術治療疑似住院感染患者作為研究對象，所有患者均先后接受熒光定量PCR 法與免疫膠體金法檢測。其中男98 例，女82 例；年齡21～71 歲，平均（42.83±5.79）歲。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：年齡≥18 歲；愿意參與本研究并簽署知情同意書；精神意識狀態正常；無血液系統疾??；無嚴重免疫系統疾病或免疫抑制癥狀。

排除標準：其他明確感染病因的患者，如外傷感染、手術感染等；在研究期間已接受抗生素治療的患者；患有嚴重肝腎功能損害或其他重要器官功能障礙的患者。

1.3 方法

熒光定量PCR 法檢測儀器為ABI 公司的7500型熒光定量PCR 儀，具體檢測步驟如下：收集樣本使用特定的核酸提取試劑盒從樣本中提取出核酸，將提取出的RNA 通過反轉錄酶的作用轉化為cDNA。根據目標基因序列，設計特異性引物，將引物、dNTPs、MgCl2、熒光染料、Taq 酶等按照一定比例加入到PCR 反應液中，將配置好的PCR 反應液加入到PCR 儀中，按照設定的程序進行擴增反應。根據Ct 值和標準曲線，判斷樣本中是否存在目標基因，并計算出其含量。免疫膠體金法具體檢測步驟如下：將一定濃度的氯金酸溶液與還原劑（如檸檬酸三鈉）混合，加熱攪拌，將待標記的抗原或抗體與膠體金溶液混合形成復合物。將標記好的復合物用洗滌液洗滌數次，去除未結合的膠體金顆粒和多余的抗原或抗體。將洗滌后的復合物與相應的抗體或抗原反應，形成抗原抗體復合物。用肉眼或光學顯微鏡觀察溶液的顏色變化，判斷待測樣本中是否存在目標抗原或抗體。細菌培養法檢測步驟如下：采集樣本進行稀釋、離心以及加入抑菌劑等處理，并接種到適宜的培養基上。將接種好的培養基放入培養箱中進行培養。觀察培養基上細菌的生長情況和形態特征，如菌落大小、形狀、顏色等，判斷目標細菌的種類。

1.4 觀察指標

①統計比較兩種檢驗方法的陽性檢出率。②比較兩種檢驗方法的診斷效能，包括準確度、靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值等項目。具體計算方法如下：準確度=（真陽性例數+真陰性例數）/總例數×100%；靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%；特異度=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%；陽性預測值=真陽性例數/（真陽性例數+假陽性例數）×100%；陰性預測值=真陰性例數/（真陰性例數+假陰性例數）×100%[4]。

1.5 統計方法

采用SPSS 20.0 統計學軟件分析數據，診斷效能診斷結果為計數資料，以例數（n）和率（%）表示，行χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種診斷方法檢驗結果比較

細菌培養法檢驗結果顯示陽性37 例，熒光定量PCR 法結果顯示陽性35 例，免疫膠體金法結果顯示陽性26 例。見表1。

2.2 兩種診斷方法的診斷效能比較

熒光定量PCR 法的檢驗準確度、靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值均明顯高于免疫膠體金法檢驗，差異有統計學意義（P均＜0.05）。見表2。

表2 兩種診斷方法的診斷效能比較（%）

3 討論

住院患者感染是醫療機構面臨的嚴重挑戰之一。隨著醫療技術的進步和患者病情的復雜化，住院患者感染的發生率逐漸上升，給患者的康復和治療帶來了重大障礙[5]。感染不僅導致骨質疏松癥進行手術治療患者身體狀況的進一步惡化，還會延長患者住院時間和增加醫療費用?？股氐膹V泛使用導致細菌產生耐藥性，使得原本可治愈的感染病變為難治性疾病，嚴重影響患者的治療效果和生存率[6]。面對這一嚴峻的形勢，建立科學的感染監控與預防體系顯得尤為重要。

熒光定量PCR 法檢驗可以快速確定感染的病原體、判定其對抗生素的敏感性，從而進行個體化治療[7-8]。本研究結果顯示，細菌培養法檢驗結果顯示陽性37 例，熒光定量PCR 法結果顯示陽性35 例，免疫膠體金法結果顯示陽性26 例，這說明熒光定量PCR 法檢驗可提高病原菌檢出率。曲奎堯等[9]研究結果顯示，免疫膠體金法的MP檢測陽性率為46.3%，明顯低于熒光定量PCR法檢驗的陽性率（73.9%）（P＜0.05）。熒光定量PCR法的檢驗準確度、靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值均明顯高于免疫膠體金法檢驗（P均＜0.05），提示熒光定量PCR 法檢驗具有良好的檢驗效能，在感染監控中對于早期發現感染、及時采取干預措施具有重要意義。劉小琳等[10]研究結果顯示，熒光定量PCR 法診斷CT 感染的靈敏度、陰性預測值、準確度、Kappa值分別為96.47%、60.00%、96.11%、0.700，均顯著高于免疫膠體金法的85.56%、27.27%、88.89%、0.323（P均＜0.05），與本研究結果具有較高一致性。熒光定量PCR 法提高病原菌檢出率及檢驗效能的原因主要有以下幾點：①熒光定量PCR 法可以檢測到非常低濃度的病原體，因此，可以更早地發現感染，及時進行干預和治療[11-12]；②熒光定量PCR 法的特異度也比免疫膠體金法更高。熒光定量PCR 法可以特異性地擴增目標病原體的核酸序列，減少非特異性擴增和交叉反應的可能性[13]；③熒光定量PCR 法可以進行定量檢測，通過測定熒光信號的強度和變化，可以計算出起始模板的數量，從而了解感染的嚴重程度和治療效果[14-15]。

綜上所述，熒光定量PCR 法檢驗在骨質疏松癥進行手術治療住院患者感染監控中具有顯著的臨床效果。通過快速準確地檢測病原體和合理選擇抗生素，有助于降低傳播風險。