雞柔嫩艾美耳球蟲對托曲珠利的耐藥性檢測

孟令海，關 琛，方素芳，王 鵬，呂 江，王 瓊，顧小龍，崔 平*

（1.河北北方學院動物科技學院，河北 張家口 075000；2.河北省張家口市畜牧技術推廣站，河北 張家口；3.河北省張家口市動物衛生監督所，河北 張家口；4.河北省張家口市動物疫病預防控制中心，河北 張家口）

雞柔嫩艾美耳球蟲病是一種寄生于雞盲腸中的寄生蟲病，一般以10～40日齡以內的雛雞最易感染，受害嚴重，死亡率達80%以上，病愈后的雛雞生長發育受阻，成年雞多為帶蟲者，會導致體增重和產蛋率下降，嚴重危害養雞業發展[1]。迄今為止，使用化學藥物防治寄生蟲病仍是養雞業中常采用的技術手段。托曲珠利（Toltrazuril，TOL）是一種具有廣譜、高效、低毒等特點的化學合成藥物，也是目前用藥劑量較低的一類抗球蟲藥[2]。但隨著抗球蟲藥物的長期使用，耐藥蟲株不斷出現，為雞球蟲病的預防與治療帶來諸多問題[3]?；诖?，本試驗通過檢測雞柔嫩艾美耳球蟲對不同劑量托曲株利的耐藥性，為托曲珠利的科學使用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 14日齡體重一致的308肉雞220只（復壯球蟲用10只，耐藥性試驗用210只），飼養條件為嚴格消毒過的環境，飼料為不添加抗球蟲藥的全價飼料。

1.1.2 試驗藥物 托曲珠利溶液（生產廠家：大連奧普動物藥業有限公司；批準文號：20200511）

1.1.3 試驗蟲株 從張家口地區不加任何抗球蟲藥的養雞場采集糞便，通過單卵囊分離球蟲，培養柔嫩艾美耳球蟲至孢子化，95%卵囊孢子化后收集卵囊，在4 ℃ 保存備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗分組 將210只雞隨機分成7個組，每組30只。分別為I組（飲水治療劑量為25 mg/L），II組（飲水治療劑量為50 mg/L），III組（飲水治療劑量為75 mg/L），IV組（飲水治療劑量為100 mg/L），V組（飲水治療劑量為125 mg/L），VI組（陽性組，感染不給藥），VII組（陰性組，不感染不給藥組）。

1.2.2 攻蟲與給藥 除VII組外，其他組在試驗開始第1天時分別經口感染孢子化柔嫩艾美耳球蟲卵囊5×103個/只，除VI組和VII組外，各試驗組均于病毒感染前1 d開始飲水給藥。感染后每天觀察雞的狀況、糞便變化和采食情況，于感染后第7～15天每天收集糞便稱重，觀察記錄糞便情況及其卵囊數。

1.2.3 耐藥性判定指標 選用抗球蟲指數（ACI）、病變記分減少率（RLS）、相對卵囊產量（ROP）和最適抗球蟲活性百分率（POAA）4項指標對耐藥性進行綜合判定[4]。（1）抗球蟲指數（Anti-coccidial index, ACI）：抗球蟲指數=（相對增重率+存活率）－（病變值+卵囊值），當ACI＜160，耐藥；當ACI≥160，敏感。①存活率：以VII組的存活率為100%，計算其他各組試驗雞存活率，存活率×100%，可得存活率得分。②相對增重率：以不感染不給藥組（即VII組）在試驗期間每組雞的平均增重為100%，計算其它各組每雞的平均增重百分率，即相對增重率。③病變值：感染后9 d剖殺試驗雞，采取盲腸組織觀察其病變情況并記分，盲腸病變記分的評定（詳見表1，組內平均病變記分×10為該組病變值）。此外，因球蟲感染死亡也記4分，并作全組平均后計算出病變值。④卵囊值：把剖檢后消化的盲腸勻漿內卵囊數與該組第5～8天糞便卵囊數相加。根據卵囊比數換算成卵囊值，詳見表2。其中，卵囊比數=試驗組卵囊數或不感染對照組卵囊數/感染對照組卵囊數乘以100%。每項指標用陰性（－）表示無耐藥性，用陽性（+）表示有耐藥性。判斷結果如下：完全耐藥（Complete resistant，CR）：4項指標全為陽性；重度耐藥（Serious resistant，SR）：4項指標中有3項指標為陽性；中度耐藥（Middle resistant，MR）：4項指標中有2項指標為陽性；輕度耐藥（Light resistant，LR）：4項指標中有1項指標為陽性；敏感（Sensitive，S）：4項指標均為陰性。

表2 卵囊值計算方法

（2）病變計分減少率（Reduction of lesion scores,RLS）。病變計分減少率（RLS）=感染不給藥組平均病變計分－感染用藥組平均病變計分/感染不用藥組平均病變計分×100%。當RLS＜50%，耐藥；當RLS≥50%，不耐藥。（3）相對卵囊產量（Relative oocysts production,ROP）。相對卵囊產量（ROP）=感染用藥組平均卵囊百萬數/感染不用藥組平均卵囊百萬數×100%。當ROP＜15%，不耐藥；當ROP≥15%，耐藥。（4）最適抗球蟲活性百分率[5]（Percent of optimum anti-coccidial activity, POAA）。最適抗球蟲活性百分率（POAA）=感染用藥組GSR－感染不用藥組GSR/不感染不給藥組GSR－感染不給藥組GSR×100%。當POAA≤50%，耐藥；當POAA＞50%，不耐藥。增重與存活率（Growth and survival ratio，GSR）=籠末重/籠初重。綜上所述，本試驗選用ACI、RLS、ROP和POAA四項指標進行綜合判定，每項指標用陰性（－）表示無耐藥性，用陽性（+）表示有耐藥性。判斷結果如下：完全耐藥（Complete resistant, CR）：4項指標全為陽性；重度耐藥（serious resistant，SR）：4項指標中有3項指標為陽性；中度耐藥（Middle resistant，MR）：4項指標中有2項指標為陽性；輕度耐藥（Light resistant, LR）：4項指標中有1項指標為陽性；敏感（Sensitive, S）：4項指標均為陰性。

2 結果

2.1 臨床癥狀和病理變化

I～VI組在開始攻蟲過程中，均出現食欲不振、精神萎靡、羽毛逆立等癥狀。I～V組在使用托曲珠利后開始逐漸恢復食欲與精神，試驗雞均存活，I組和II組的體重增長緩慢，從III組開始，體重持續增長，總體上所有劑量的托曲珠利對試驗雞的生長性能無顯著影響。剖殺時，對比7個試驗組，I～V組，盲腸的狀況良好，VI組（陽性組）的盲腸病變較嚴重，VII組（陰性組）的盲腸無病變。

2.2 耐藥性檢測結果

通過測定四項指標表明，所有試驗組POAA值均≥50%，結果為陰性，敏感；所有試驗組RLS值≥50%，結果是陰性，敏感；所有試驗組ROP＜50%，結果是陰性，敏感；ACI值測定中，I組和II組的值均＜160，呈陽性，有耐藥性，而III組、IV組和V組值均＞160，呈陰性，無耐藥性，詳見表3。

表3 耐藥性檢測結果

結果表明，I組和II組僅ACI指標呈陽性，結果為I組和II組為輕度耐藥，III組、IV組和V組的四項指標呈陰性，結果為敏感，見表4。

表4 綜合耐藥性判定

3 討論

本試驗耐藥檢測結果表明，25 mg/L作為正常劑量的托曲株利與二倍劑量的托曲株利均出現輕度耐藥性，使用托曲株利原始濃度抗雞球蟲的敏感性在逐步減弱。蔣祿峰[6]等對河北省部分地區柔嫩艾美耳球蟲野外分離株進行耐藥性檢測，試驗結果表明，石家莊、滄州、保定、唐山四個地區的分離株對妥曲珠利分別為重度耐藥、中度耐藥、重度耐藥和完全耐藥，這可能與當地的用藥史和用藥方法有很大關系。耿天天[7]等開展河南省和湖北省部分地區雞球蟲分離株對地克珠利耐藥性調查研究表明，河南省和湖北省雞球蟲對地克珠利均存在耐藥現象。地克珠利與妥曲珠利均屬三嗪類抗球蟲藥，曾因高效低毒被廣泛應用，然而長期用藥已使雞球蟲產生了抗藥性，本次采集的張家口地區分離株對正常劑量的托曲珠利與二倍劑量的地克珠利具有抗藥性，建議在雞球蟲防治過程中可配合其他抗球蟲藥進行輪換用藥和穿梭用藥。

本研究雖然能夠為張家口地區的球蟲病防治提供一些理論依據和實際指導，但是要徹底解決球蟲對當地養雞業的阻礙，還需從多方面努力。據盧緒峰[8]報道，在潮濕高溫的夏秋季，溫濕度過高，雞球蟲病的發病率呈直線上升趨勢，其死亡率呈指數增長；預防雞球蟲病重要的環節是要保持圈舍內的環境良好和干凈衛生，應該避免小日齡雞和成年雞生活在一起，以避免成年帶蟲雞感染小日齡雞。養雞場在做好日常管理的同時，有條件的雞場盡量進行球蟲耐藥性測定，然后根據測定結果制定出適合本雞場的預防和治療用藥方案[9-10]，將球蟲耐藥性降至更低，減少經濟損失，提高雞場的經濟效益，為養雞業的健康持續發展打下堅實基礎。

4 結論

本次試驗研究表明，張家口地區雞柔嫩艾美耳球蟲對托曲株利的耐藥濃度為50 mg/L，75 mg/L及以上劑量仍能有效防治雞球蟲感染。