不同廠家豬肺炎支原體滅活疫苗免疫效力對比實驗

王鵬江 曹劍 劉強德 王鋼 候鳳 李新萍 袁科 丁占強 武天增 連凡平 張志鵬 賀筍

摘要：本研究旨在評價不同廠家豬肺炎支原體滅活疫苗的免疫攻毒保護效果。選擇4周齡仔豬25頭，隨機分為5組，每組5頭豬，分別免疫四種豬肺炎支原體滅活疫苗（即疫苗A組、疫苗B組、疫苗C組、疫苗D組），E組為攻毒對照組，不做任何處理，在同等條件下隔離飼養。各疫苗按照對應的說明書進行免疫，免疫后第14、28天進行采血，檢測支原體抗體水平，一免后28 d時，所有免疫組連同攻毒對照組，各氣管注射豬肺炎支原體CJ株5 mL/頭（含0.01 g肺組織毒）。攻毒后飼養觀察28 d，對所有實驗組動物進行觀察臨床癥狀。A組實驗動物攻毒后未出現咳嗽、腹式呼吸等支原體臨床癥狀，B-D組實驗豬攻毒后偶爾出現輕微間隔性咳嗽，E組實驗動物攻毒后出現連續性咳嗽，個別豬出現腹式呼吸等臨床癥狀。攻毒后第28天進行病理剖檢。結果表明，攻毒對照組豬4/5頭出現典型豬肺炎支原體病變，在肺臟尖葉、心葉、膈葉前1/3部位以及中間葉，出現“肉樣”或“胰樣”實質樣病變，界限明顯。B～D組解剖后個別豬出現典型豬肺炎支原體病變，A組實驗動物解剖后個別豬肺臟出現零星病變，剩余實驗動物肺臟均未出現豬肺炎支原體病變。根據肺部病變較少率計算，A～D組病變率分別為71.4%、42.8%、60.7%、44.6%。實驗表明，4種豬肺炎支原體滅活疫苗均具有保護效果，但A組滅活疫苗與其他免疫組相比較，免疫效果明顯優于其他免疫組，在豬群免疫中能夠起到更好的免疫效果。

關鍵詞：豬肺炎支原體毒；滅活疫苗；免疫效力；對比

豬支原體肺炎（mycoplasmal pneumonia of swine，MPS）是由豬肺炎支原體（mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）引起的一種慢性、接觸性呼吸道傳染病，臨床上有獨特的咳嗽和氣喘癥狀，又稱豬氣喘病[1]，該病分布十分廣泛，世界各地均有發生，也被認為是危害各國養豬業的重要疫病之一[2]。該病發病率高，發病慢且長，以冬春寒冷季節多發。發病豬表現為流涕、咳嗽、氣喘[3]。死亡率雖不高但豬肺炎支原體也能夠導致由特定病毒性病原包括豬繁殖與呼吸綜合征和豬圓環2型病毒感染所引發的疾病[4]。本實驗將市售豬支原體疫苗進行實驗室效力對比，了解現有疫苗對豬肺炎支原體免疫效果提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 毒株與疫苗

檢驗用菌液：CJ株組織毒，含0.01 g肺組織。疫苗A，菌株為豬肺炎支原體（CJ株），由天康生物制藥有限公司制備、保存；疫苗B、C、D為市售豬肺炎支原體滅活疫苗。

1.2 實驗動物

3～4周齡健康仔豬25頭，豬肺炎支原體病原和抗體、豬繁殖與呼吸綜合征病毒病原和抗體均為陰性。

2 方法

2.1 實驗分組

試驗分為五組，每組5頭，A～D組為免疫組，另設一組為對照組，25頭3～4周齡實驗豬按隨機分組，并對其進行編號，分配在不同的房間進行隔離飼養，每個實驗組動物的編號應如實進行記錄。實驗分組信息見表1。

2.2 免疫前程序

將實驗動物在潔凈環境下隔離飼養3～5 d，觀察實驗豬是否健康以及有無豬支原體肺炎臨床癥狀，包括連續咳嗽和腹式呼吸。

2.3 疫苗免疫

免疫前疫苗回溫，分別對A組D組所有仔豬分別按右側耳后頸部肌肉途徑注射疫苗2mL/頭，E組為對照組，實驗豬注射生理鹽水。

2.4 攻毒程序

免疫后28 d，所有實驗組連同攻毒對照組，分別通過氣管注射豬肺炎支原體CJ株組織毒5 mL（含0.01 g肺組織毒）。

2.5 攻毒后程序

攻毒后28 d，將所有實驗動物處死并剖檢，患病豬應出現典型的豬支原體肺炎肺部病變，在肺臟尖葉、心葉、膈葉前1/3部位以及中間葉，出現“肉樣”或“胰樣”實質樣病變，界限明顯。

3 結果

3.1 抗體檢測

實驗動物免疫當天、免疫后第14和28天對所有實驗動物進行血液采集，分離血清，檢測豬肺炎支原體血液抗體水平如圖1所示。各組實驗動物免疫前豬肺炎支原體血清中抗體S/P值均在0.03～0.09，檢測結果均為陰性，免疫后第14、28天豬肺炎支原體抗體水平除了E組攻毒對照組之外其余實驗組抗體水平均在持續上升，A組抗體水平在整個免疫組中處于最高，B～D組血清中抗體S/P值均在1.1～1.4之間，E組實驗動物血清中抗體水平S/P值均≤0.4。

3.2 臨床癥狀

實驗動物攻毒后進行觀察臨床癥狀，A組實驗動物攻毒未出現豬肺炎支原體臨床癥狀，B組實驗豬攻毒后第12天時3/5頭出現間隔性咳嗽，C組實驗豬攻毒后第14天2/5頭出現輕微咳嗽，D組實驗豬攻毒后第12天時2/5頭出現間隔性咳嗽，E組實驗豬攻毒后第10天時4/5頭實驗豬出現連續性咳嗽，病情嚴重實驗動物出現腹式呼吸臨床癥狀。

3.3 病理變化

攻毒后28 d對所有實驗動物進行剖檢，剖檢后A組實驗豬剖檢后個別出現零星病變，剩余實驗豬未出現豬肺炎支原體病變。B、C、D組部分實驗組出現典型豬肺炎支原體病變，在肺臟尖葉、心葉、膈葉前1/3部位以及中間葉，出現“肉樣”或“胰樣”實質樣病變，界限明顯。攻毒對照組剖檢后4/5頭出現典型豬肺炎支原體病變，在肺臟尖葉、心葉、膈葉前1/3部位以及中間葉，出現“肉樣”或“胰樣”實質樣病變，界限明顯[5]。

3.4 肺部評分統計

剖檢后對所有肺部病變進行評分，評分方法根據28分評分進行評判。如圖2所示，A組剖檢后肺部評分平均分為3.2，B～D組肺部評分均在4～6分之間，E組攻毒對照組剖檢后實驗動物肺部出現典型支原體病變，肺部評分平均分為11.2，四組免疫組與攻毒對照組相比，分值明顯較低。

3.5 肺部病變較少率統計

通過肺部病變減少率計算[6]，免疫組與攻毒對照組相比，如圖3所示，4個免疫組肺部病變減少率分別為：A組71.4%、B組42.8%、C組為60.7%、D組為44.6%，從肺部病變減少率可以看出4個免疫組A組與C組具有明顯免疫原性。但A組與C組相比，A組肺部病變較少率明顯高于C組。

4 討論

豬肺炎支原體對各種豬均易感，在新引進豬群多呈急性暴發，其發病率達到30%～50%，感染率達到80%以上[7]。本病發病率高，流行快，除死亡率快還導致病豬長時間帶菌，大量消耗機體組織，嚴重影響豬的生產性能和商品性能，大大增加養殖成本。而且，支原體可以通過空氣傳播，很難隔離阻斷傳播途徑，極易引起全群發病，是公認的最難凈化的豬病，給養豬業帶來巨大的損失。本病在我國流行十分廣泛，呈上升趨勢，已成為危害養豬業最嚴重的疾病之一，給我國養豬業造成嚴重的經濟損失。

本實驗主要通過市售豬肺炎支原體疫苗，進行實驗室實驗，評價市售疫苗免疫效果，實驗結果表明疫苗A、C均具有良好免疫效果，肺部病變減少率均能達到60%以上，但疫苗A組免疫效果明顯高于疫苗C組。疫苗作為疾病一項主要防控舉措，合理選擇使用疫苗才能有效防控疾病發生，通過本次實驗，為養殖業選擇該疫苗奠定了基礎，提高動物健康，減少疾病發生。

參考文獻：

[1] 付啟歡，丁紅雷，吳建云.豬支原體肺炎疫苗研究進展[J].中國獸醫學報，2016，36（7）：1251-1255.

[2] 沈青春，寧宜寶，覃青松.豬肺炎支原體的研究進展[J].中國獸藥雜志，2003（6）：26-30.

[3] 李秋菊，王丹輝，沈青春，等.豬肺炎支原體滅活疫苗的實驗室效力研究[J].當代畜禽養殖業，2021（4）：12-16.

[4] JEFFREY J ZIMMERMAN.豬病學[M].10版.趙德明.中國農業大學出版社，2014.

[5] 倪黎綱，王宵燕，吳信生，等.肺炎支原體感染豬模型的建立及相關指標分析[J].西北農業學報，2019，28（7）：1045-1051.

[6] 朱巧艷，張國良，翟路峰，等.豬圓環病毒2型、豬肺炎支原體二聯滅活疫苗與豬瘟活疫苗混合免疫效果評價[J].中國預防獸醫學報，2020，42（9）：938-943.

[7] 王留.豬支原體肺炎活疫苗與滅活苗比較分析[J].獸醫導刊，2015（9）：43-44.