液基細胞學對宮頸癌篩查的有效性評價

鮑海燕　劉弘　王翠芳

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液基細胞學對宮頸癌篩查的有效性評價

鮑海燕劉弘王翠芳

【摘要】目的明確宮頸癌篩查過程中，使用Sure Path法的薄層液基細胞學涂片法的有效性。方法2010年1月至2014年1月接受宮頸癌篩查的3 201例，采用薄層液基細胞學(LBC)制片技術制作，結合Bethesda system 2001分級方式進行細胞診斷，將診斷為非典型鱗狀細胞的病例的剩余樣本，進行HPV檢測。結果總體檢出率LBC法較傳統方法顯著提高(χ2=59.80，P＜0.05)。另外只將ASC-US的64例篩查樣本于外院進行HPV代檢測，陽性為16例(25.00%)，陰性48例(75.00%)，有效地降低了患者進行HPV檢測復診的經濟負擔。結論液基細胞學檢查應用于宮頸癌的篩查不僅簡便經濟，而且行之有效。

【關鍵詞】液基細胞學;宮頸癌;篩查;非典型鱗狀細胞; HPV檢測

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤，發病原因目前尚不清楚，性生活紊亂的女性有較高的患病率［1］。對于宮頸癌的篩查，傳統方法為宮頸刮片檢查，而近年來則推廣使用薄層液基細胞學［2］(lquid-based cytology，LBC)檢測技術進行細胞學檢查，并且結合Bethesda system 2001分級方法進行宮頸癌的篩查。本研究是在LBC制片的基礎上，對提高LBC檢查的精確度及效率，合理降低Bethesda系統產生的不合標準的樣本數量，對非典型鱗狀細胞癌(atypical sguamous cells，ASC)對象的殘留樣本進行HPV檢測，這三種能減輕被檢者負擔的方法進行討論。

1　資料與方法

1.1一般資料2010年1月至2014年1月我院接受宮頸癌篩查的3 201例作為研究對象，年齡21～88歲，平均年齡(52±29)歲。

1.2LBC樣本的制作方法細胞采集使用專用的采樣刷，在宮頸部移行區的刷取脫落細胞，將刷尖端取下放入盛有液基細胞保存液的小瓶中，備檢。使用Becton，Dickinson and Company(BD公司Tokyo，Japan)的混合劑以及著色劑。使用Sure Path法樣本制作流程制作LBC樣本:收集樣本并編號，之后依次進行預處理(攪拌及注入分離劑: 15 min) ;靜置15 min;離心(200 r/min，2 min后800 r/min 10 min) ;移液;染色40 min;固定5 min。細胞診斷采用Bethesda system 2001(美國癌癥協會推薦)進行分級。

1.3HC2-HPV-DNA檢測［3］使用診斷為非典型鱗狀細胞的的剩余樣本，采用二代雜交捕獲法檢測高危人乳頭瘤病毒DNA(hybrid capture 2-human papillomavirus-DNA，HC2-HPV-DNA)。外院代檢測，結果回報。

1.4對照樣本收集將LBC法所得數據與2006年1月至2010年1月在我院進行篩查的11 691例數據進行比較。期間的采樣使用棉棒等工具，滑動玻璃直接壓片方法進行。

1.5統計學分析應用SPSS 16.0統計軟件，計量資料以±s表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1樣本制作LBC法一次可以同時檢測48份樣本，約需要90 min。兩位工作人員在半天時間就可以制成5～6套，即240～288份樣本。

2.2初篩結果初篩結果為NILM 3 072例(95.97%)、ASC-US 64例(2.00%)、LSIL 30例(0.94%)、ASC-H 8例(0.25%)、HSIL 23例(0.72%)、SCC 2例(0.06%)、AGC和Adeno共2例(0.06%)。見表1。

表1　初篩結果

2.3HPV檢測ASC-US的64例被檢者在外院進行HPV代檢測?；貓蠼Y果顯示陽性16例(25.00%)、陰性48例(75.00%)。

2.4復查的初次組織學檢查結果需要進一步進行精確的組織學檢查的81例(HPV檢測陽性與LSIL以上的樣本之和)當中，在我院進行的53例中，與初篩結果對比ASC-US 4例，LSIL 7例，ASC-H 6例、HSIL 7例、AGC 1例，共25例(47.2%)被確診為腫瘤性病變。而且ASC-US 5例、LSIL 11例、ASC-H 1例、SIL 8例、Adeno 1例，共26例(49.1%)被確診為低度至高度異型性病變。上皮內癌1例，浸潤癌1例，均為LBC確診的癌。見表2。

2.5與傳統方法比較

2.5.1不合標準的樣本統計:使用傳統方法篩查期間，11 691件樣本的3件(0.026%)為不合標準的樣本，LBC樣本3 201件中，細胞數目過少以及固定不良等情況均未出現，且未有細胞采集過程中的涂抹偏差，均是相同的均勻薄層樣本。見表3，圖1。

表2　復查的初次組織學檢查結果

表3　不合標準樣本出現的數量及概率　件

圖1　不同方法制作的樣本玻片1為棉棒涂片樣本，玻片2為異物覆蓋，玻片3為LBC樣本

2.5.2需要復查的比例:傳統方法的樣本之中，需要進一步鏡檢的比例為0.09%，而LBC法則達到了2.53%。

2.5.3異型性及癌的檢出率:傳統方法105例中有83例(79.0%)，LBC法的81例中有73例(90.1%)是通過復查確診的。而從總體檢出率來看，傳統方法為0.71%(83/11 691)，LBC法為2.28% (73/3 201)，差異有統計學意義(χ2=59.80，P＜0.05)。

3　討論

目前，LBC法包括Sure Path法、Thin Prep法、TACAS法、Liqu Prep法等［4］，Sure Path法、Liqu Prep法、TACAS法等的原理是使細胞重疊少，所以叫做“薄層”。這三種方法的樣本制作原理不同，但做出的樣本是都是均一的薄層，鏡檢時精確度也會提高。而針對LBC法的劣勢:制作樣本耗時較長，本文也進行了討論，本研究發現，300個樣本在半天時間做出也是能夠實現的，即效率較高，所以作為篩查方法推廣不存在困難。有研究證明，液基細胞學法在提高效率的同時不影響其結果質量［5］，本研究結果也支持了這一點。

Bethesda system 2001［6］是以提高細胞診斷質量為目的，調整結果報告的不恰當之處。不合標準的樣本有以下幾種: (1)上皮細胞數量少的樣本(傳統為81 000以下，LBC為51 000以下) ; (2)炎性細胞和血液覆蓋的樣本以及細胞干燥難以觀察的樣本。如果不合標準的樣本即需要重新檢查的比例過高，患者的負擔費用也就相應增加，所以降低不合標準的樣本比例是十分必要的。

在此方面LBC法要優于傳統方法。在門診對于宮頸癌的篩查過程中，由于檢驗者操作的規范性不足、患者不配合以及采樣工具的不標準等原因，在采樣涂片過程中存在很大的偏差。但是LBC法則可以很大程度避免這些情況，本研究圖片直觀反映了兩種方法所獲得的樣本的區別，明顯可以看出LBC法的為均勻圓整的組織，而傳統方法則不均勻且有異物覆蓋。很多文獻已經證明，LBC法比傳統方法的不合標準樣本的出現率明顯低［7，8］。本研究所得的不合標準樣本率僅為0，比傳統法的0.026%低，綜合這兩方面因素可見LBC法有足夠的優勢納入篩查手段中。

有研究對CIN的靈敏度及特異度對傳統方法及LBC法進行比較的9篇論文進行了Meta分析［9］，結果顯示傳統方法和LBC法是相同的。但是最近的報告顯示LBC法與傳統方法相比，LBC法雖然重復性差，但是精度很高［10］。本研究結果為需要復查的比例是LBC法高于傳統方法，且異型性及癌的檢出率較高，即其靈敏度及特異度均較高。

目前臨床多同時進行HPV檢測及液基細胞學檢測［11］，或在高危HPV檢測的基礎上進行細胞學檢查，也有研究認為不進行細胞學檢查只單純進行高危HPV檢測［12］被檢者的生理及經濟上的負擔都很大。而將確診為ASC的樣本進行HPV測試，不但增加了靈敏度［13］，使其結果介于初篩和鏡檢之間;而且很大部分可以不必進行HPV檢測，節約了資源，作為醫院的篩查方式是十分恰當的。不僅如此，ASC-US的檢出率在5%以下，大范圍篩查過程中，篩查出人數并不少，其進行HPV檢測相應的消耗也頗大。但是LBC則是使用HPV檢測殘留的樣本即可進行，各種負擔都極大減少。本研究中HPV檢測結果陽性僅為25%，即需要復診的病例極大降低，減輕了患者的負擔。另外，確診ASC的情況下，比起HPV檢測，更推薦按病理分類進行檢查。因此，符合ASC情況的被檢者并不是進行精確檢查的適應證，只是單純HPV檢測為目的的過度醫療而已。

引入Bethesda system 2001以來，應降低不合標準的樣本比例以及針對ASC-US的HPV檢測等等要求的需要，LBC法普及是必然的。本研究結果表明，與液基細胞學聯合高危HPV檢測相比，在液基細胞學基礎上進行高危HPV檢測具有明顯的優勢，不但降低了被檢者生理及經濟上的負擔，也提高了檢測的靈敏度及特異性，為臨床對宮頸癌的篩查提供了嶄新的思路和方法，具有十分重要的臨床意義。

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·論著·

(收稿日期:2015－11－14)

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2016.05.027

【中圖分類號】R 711.74

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002－7386(2016) 05－0721－03

作者單位: 116011遼寧省大連市第二人民醫院婦科