高效液相色譜法同時測定人參養榮丸中芍藥苷、阿魏酸和橙皮苷含量

李鑫，張秀麗

（遼寧省朝陽市藥品檢驗檢測所，遼寧朝陽122000）

高效液相色譜法同時測定人參養榮丸中芍藥苷、阿魏酸和橙皮苷含量

李鑫，張秀麗

（遼寧省朝陽市藥品檢驗檢測所，遼寧朝陽122000）

目的建立同時測定人參養榮丸中芍藥苷、阿魏酸、橙皮苷的高效液相色譜法。方法色譜柱為固定相Agilent C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 m），流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（等度洗脫），流速1.0 mL/min，柱溫30℃，芍藥苷、阿魏酸和橙皮苷檢測波長為230 nm。結果進樣量芍藥苷在0.108～2.160 g（r=0.999 6）范圍內、阿魏酸在0.014～0.280 g（r=0.999 9）范圍內、橙皮苷在0.349～6.980 g（r=0.999 9）范圍內與峰面積呈良好線性關系，加樣回收率分別為98.86%，97.35%和98.72%，RSD分別為0.62%，1.16%和1.02%（n=6）。結論該法簡便穩定，準確度可靠，可用于人參養榮丸的質量控制。

高效液相色譜法；人參養榮丸；芍藥苷；阿魏酸；橙皮苷

人參養榮丸是由人參、土白術、茯苓、炙甘草、當歸、熟地黃、白芍（麩炒）、炙黃芪、陳皮、制遠志、肉桂、五味子（酒蒸）等12味中藥經粉碎成細粉加煉蜜制得的小蜜丸或大蜜丸，具有溫補氣血的功效，主要用于氣血兩虧、形瘦神疲、食少便溏、病后虛弱等癥。目前市場所售人參養榮丸成方制劑品種規格多樣，但相關質量控制研究文獻較少，其中多數只采用了某單味飲片的成分定量測定作為質控指標，質控指標稍顯單一，且2015年版《中國藥典（一部）》人參養榮丸項下僅進行了橙皮苷測定，專屬性差，難以全面評估其質量優劣。本研究中旨在建立能同時測定人參養榮丸中多種成分的高效液相色譜法［1-6］，現報道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

LC-2010A HT型高效液相色譜儀（日本島津公司，包括紫外檢測器、自動進樣器、二元泵、島津LCSolution色譜工作站）；CPA225D型分析天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；BSA224S-CW型分析天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；9860A型超聲波清洗機（天津市科貝爾光電技術有限公司）。

1.2試藥

人參養榮丸（石家莊萬和制藥有限公司，批號為20140301，20140501，20140601）；芍藥苷對照品（批號為110736-201438），阿魏酸對照品（批號為110773-201313），橙皮苷對照品（批號為110721-201014）均購于中國食品藥品檢定研究院；乙腈（色譜純，西格瑪奧德里奇上海貿易有限公司）；甲醇（色譜純，西格瑪奧德里奇上海貿易有限公司）；磷酸（分析純，批號20110505，天津永大化學試劑有限公司）；水為重蒸餾水。

2　方法與結果

2.1色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Agilent C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B，14∶86）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進樣量：15 μL；檢測波長：230 nm。在此條件下，色譜圖見圖1。

2.2溶液制備

對照品溶液：取芍藥苷、阿魏酸、橙皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質量濃度分別為0.108，0.014，0.349 g/L的混合溶液，即得。

供試品溶液：取樣品適量，剪碎，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）1 h，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

陰性對照品溶液：按2015年版《中國藥典（一部）》中人參養榮丸的制法制備缺少白芍、當歸、陳皮的大蜜丸，依法制備陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備溶液，即得。

2.3方法學考察

線性關系考察：分別精密吸取對照品溶液1，2，5，10，15，20 μL進樣測定，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標、對照品進樣量（X）為橫坐標繪制標準曲線，建立回歸方程。結果見表1。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液15 μL，重復進樣6次，測定峰面積。結果芍藥苷、阿魏酸、橙皮苷色譜峰峰面積的RSD分別為0.1%，0.1%，0.1%（n=6），表明儀器精密度良好。

圖1　高效液相色譜圖

表1　各對照品回歸方程、相關系數及線性范圍

重復性試驗：取同一樣品，按2.2項下供試品溶液制備方法平行制備6份溶液，精密吸取15 μL進樣2次，測定峰面積。結果芍藥苷、阿魏酸、橙皮苷色譜峰峰面積的RSD分別為1.5%，1.3%，1.6%（n=6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，24 h時精密吸取15 μL樣進，測定峰面積。芍藥苷，阿魏酸，橙皮苷色譜峰峰面積的RSD分別為0.2%，0.4%，0.2%（n=7），表明供試品溶液室溫放24 h內穩定。

加樣回收試驗：取已知含量的人參養榮丸樣品1 g，精密稱定，共6份。每份樣品分別精密加入質量濃度為0.306 g/L的芍藥苷對照品溶液2 mL，0.085 g/L的阿魏酸對照品溶液1 mL，0.963 g/L的橙皮苷對照品溶液2 mL，按2.2項下方法制備供試品溶液，精密吸取15 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，計算回收率。結果見表2。

2.4樣品含量測定

取3個批號的樣品，按2.2項下供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件測定本品中芍藥苷、阿魏酸和橙皮苷的含量。結果見表3。

3　討論

3.1檢測波長選擇

色譜條件篩選時曾用雙波長測定芍藥苷、橙皮苷、阿魏酸，以230 nm和321 nm作為檢測波長，發現阿魏酸在230 nm波長處與321 nm波長處峰面積相差不大，分離效果良好，能達到HPLC法含量測定要求，而芍藥苷與橙皮苷在230 nm波長處有最大吸收［7］，故確定230 nm為檢測波長。

3.2流動相選擇

相關文獻［8-11］多采用梯度洗脫方式，本試驗中以乙腈-0.1%磷酸（20∶80）、乙腈-0.1%磷酸（14∶86）和乙腈-0.1%磷酸（10∶90）為流動相等度洗脫，結果表明所檢測的色譜峰分離度好，基線穩定，出峰時間較合理，可為部分不具備四元梯度泵檢測設備的企業提供便利，故確定流動相為乙腈-0.1%磷酸（14∶86）。

3.3提取方法及溶劑選擇

考察了浸漬法、回流法和超聲提取法，結果浸漬法效率低，回流法和超聲法提取效率相差不大，但超聲提取法操作簡便，故選擇超聲提取方法?？疾炝?0%甲醇、甲醇和乙醇作為提取溶劑，結果甲醇提取效果好，雜質較少；考察了超聲提取30，45，60，90 min，發現超聲處理60 min與90 min所測得的峰面積值相差不大，故確定以甲醇為溶劑，超聲處理60 min［12-16］。

表2　加樣回收試驗結果（n=6）

表3　樣品含量測定結果（±s，mg/g，n=3）

表3　樣品含量測定結果（±s，mg/g，n=3）

批號2 0 1 4 0 3 0 1 2 0 1 4 0 5 0 1 2 0 1 4 0 6 0 1芍藥苷1 . 2 2 5 0 ± 0 . 0 0 6 1 . 2 0 9 4 ± 0 . 0 0 4 1 . 1 8 0 9 ± 0 . 0 0 7阿魏酸0 . 1 7 0 2 ± 0 . 0 0 2 0 . 1 7 8 4 ± 0 . 0 0 1 0 . 1 6 9 5 ± 0 . 0 0 1橙皮苷3 . 8 4 9 6 ± 0 . 0 1 2 3 . 7 2 7 1 ± 0 . 0 0 8 3 . 6 6 1 0 ± 0 . 0 1 0

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：105，133，466.

［2］李捷瑋，金柔男，李翔，等.多種中成藥中芍藥苷的含量測定［J］.藥物分析雜志，2009，29（9）：1 440-1 443.

［3］李麗嬌，張元桐，陳曉霞.HPLC法測定人參養榮丸中桂皮醛含量［J］.遼寧中醫藥大學學報，2009，11（6）：230-231.

［4］麥艷珍，程怡，張素方，等.HPLC法測定人參養榮丸中人參皂苷Rb1的含量［J］.長春中醫藥大學學報，2012，28（1）：156-157.

［5］李中娥，王春穎.HPLC同時測定婦康片中芍藥苷和阿魏酸的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（10）：143-146.

［6］呂海濤，王艷麗，王英芹.當歸提取液中阿魏酸穩定性研究［J］.中成藥，2008，30（10）：1 555-1 557.

［7］張琳琳，祁峰，卞海林.HPLC法測定通氣合劑中芍藥苷和橙皮苷的含量［J］.現代中西醫結合雜志，2012，21（36）：4 092-4 093.

［8］陳四平，王英峰.高效液相色譜法測定健行顆粒中芍藥苷的含量［J］.中成藥，2008，30（7）：33-35.

［9］季寧平，徐曉秋，傅超美，等.HPLC法同時測定艾附暖宮丸中芍藥苷、阿魏酸和川續斷皂苷Ⅵ［J］.中成藥，2015，37（3）：534-537.

［10］馬向東.HPLC法測定八珍益母丸中芍藥苷和阿魏酸的含量［J］.中國藥物評價，2014，31（4）：193-195.

［11］倪文澎，錢平，周琴妹，等.RP-HPLC法同時測定養生丸重中芍藥苷和阿魏酸的含量［J］.中國藥師，2010，13（8）：1 114-1 116.

［12］林雋丹.HPLC法測定芩連片中芍藥苷的含量［J］.海峽藥學，2007，19（10）：45-46.

［13］馬冰，王晶，劉春明，等.不同提取方法對赤芍中芍藥苷含量影響的高效液相色譜法對比研究［J］.時珍國醫國藥，2013，13（8）：1 820-1 822.

［14］梁惠珍，李霞，門九章，等.高效液相色譜法測定雄芍顆粒中芍藥苷的含量［J］.山西中醫，2014，30（9）：48-49.

［15］孟令丹，陳曉輝，姚燕，等.RP-HPLC法同時測定四物合劑中中芍藥苷和阿魏酸的含量［J］.藥物分析雜志，2006，26（10）：1 398-1 400.

［16］王健，范文成，葉曉紅，等.HPLC測定婦康片中阿魏酸的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2008，14（8）：15-16.

Simultaneous Content Determination of Paeoniflorin，Ferulic Acid and Hesperidin in Renshen YangRong Pills by HPLC

Li Xin，Zhang Xiuli
（Chaoyang Drug Inspection and Testing Institute，Chaoyang，Liaoning，China122000）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the simultaneous content determination of paeoniflorin，ferulic acid and hesperidin in Reshen YangRong Pills.MethodsThe chromatographic separation of methanolic extract of ReShen YangRong Pills was performed on Global-C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm）in a gradient elution using a mixture of acetonitrile and 0.1%phosphoric as mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min and the column temperature was maintained at 30℃.The detection wavelength of paeoniflorin，ferulic acid and hesperidin was set up at 230 nm.ResultsThe linear range was 0.108-2.160 μg（r=0.999 6）for paeoniflorin，0.014-0.280 μg（r=0.999 9）for ferulic acid and 0.349-6.980 μg（r=0.999 9）for hesperidin.The average recoveries were 98.86%for paeoniflorin withRSD=0.62%（n=6），97.35%for ferulic acid withRSD=1.16%（n=6），and 98.72%for hesperidin with 1.02%（n=6），respectively.ConclusionThe method is simple and convenient，reliable and accurate，it can be utilized as a quality control method for ReShen YangRong Pills.

HPLC；Renshen YangRong Pills；paeoniflorin；ferulic acid；hesperidin

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）17-0068-03

李鑫（1985-），男，碩士研究生，主管中藥師，研究方向為中藥鑒定及檢驗，（電子信箱）lixin850801@126.com。

（2016-02-10；

2016-05-14）