飼料添加劑葉黃素的測定方法研究

■庫麗扎達·木拉提

（新疆獸藥飼料監察所，新疆烏魯木齊 830063）

飼料添加劑葉黃素為黃色至暗黃色的浸膏，常溫膏狀。葉黃素又名“植物黃體素”，分子式C40H56O2，分子量為568.85，經溶劑萃取等工藝制得的浸膏，主要成分為葉黃素及其同分異構玉米黃質，本產品主要成分葉黃素作為飼料添加劑和著色劑添加到肉雞、蛋雞、鴨、魚飼料中，可使動物皮膚脂肪變黃，蛋心變紅，使商品肉蛋品質提升，營養增加。本試驗利用紫外分光光度法測定飼料中的葉黃素的含量。

1 試驗方法

1.1 產品性狀

葉黃素為深棕色黏稠浸膏，常溫下流動易溶于正己烷，不溶于水。

1.2 試驗試劑和溶液

正己烷(分析純)、甲醇(分析純)、無水乙醇(分析純)、丙酮(分析純)、甲苯(分析純)、萃取劑 HEAT(正己烷+無水乙醇+丙酮+甲苯=10∶6∶7∶7)、40%氫氧化鉀-甲醇溶液(稱取分析純氫氧化鉀40 g于250 ml燒杯中，加15 ml純凈水迅速用玻璃棒攪拌溶解后，加入分析純甲醇50 ml，攪拌至澄清，移入100 ml容量瓶中，用分析純甲醇定容，搖勻靜置待用)、10%硫酸鈉水溶液(稱取無水硫酸鈉100 g于100 ml燒杯中，加純凈水溶解后移入100 ml容量瓶中，用純凈水定容至刻度)。

1.3 儀器設備

實驗室常用設備、超聲波清洗器、紫外分光光度計、石英比色皿（1 cm）。

1.4 鑒別試驗

取試驗溶液。用分光光度計測定。以1 cm石英比色皿在420～480 nm波長范圍內測定試樣溶液的吸收光譜，應在（445±1）nm、（473±1）nm的波長處有最大吸收峰。

1.5 葉黃素含量測定

1.5.1 葉黃素含量計算

葉黃素在波長(445±1)nm、(473±1)nm處有最大吸收峰，可根據該波長處測定吸收度，計算其含量。

1.5.2 試樣溶液的制備

稱取約0.5 g試樣（精確至0.000 1 g）加入50 ml容量瓶中，加入25 ml左右HEAT至超聲波清洗劑中超聲約2 min，至試樣完全溶解；加HEAT定容，搖勻，移取5 ml稀溶液于100 ml容量瓶中，加入25 ml HEAT，輕搖溶解。移取2 ml 40%氫氧化鉀-甲醇溶液至容量瓶中，加蓋輕搖約1 min（誤差5 s）?？諝饫淠芗由w后置（56±1）℃水浴上加熱皂化20 min（誤差10 s）；皂化完成后，立即將容量瓶取出于冷水中冷卻10 min，保證液溫降至室溫。向容量瓶中準確加入30 ml正己烷溶劑，輕搖1 min（誤差5 s），用10%硫酸鈉水溶液定容。用200次/min的強度猛烈振搖2 min（誤差10 s），之后將容量瓶置于避光處1 h；移取上層液2 ml至150 ml容量瓶中，正己烷溶劑定容。

1.5.3 試樣的測定

將試樣分析液（1.5.2）置于1㎝石英池中，用紫外分光光度計在波長(473±1)nm處測定吸收度A，以正己烷做空白對照。

1.5.4 計算和結果

X=2.118 64×A473×K/M。

式中：X——試樣中葉黃素（C40H56O2）含量的質量分數（g/kg）；

K——樣品上清液稀釋倍數；

M——樣品質量(g)；

A473——吸光度。

1.6 葉黃素含量測定準確度試驗

準確稱取5份試樣按1.5.2進行試樣溶液制備在473 nm測定吸光度將樣品吸光度按1.5.4進行計算，結果見表1。

1.7 葉黃素含量測定精密度試驗

取測定準確度試驗的溶液按上法連續進樣6次并將樣品吸光度按1.5.4進行計算，結果見表2。

表1 試樣的測定結果

表2 精密度試驗的測定結果

2 結論

用該方法測定飼料添加劑葉黃素含量，標示含量為150 g/kg，經測定5個樣品含量平均值為152.25 g/kg，RSD=1.4%,表明該樣品準確度好；同一樣品平行測定6次結果為152.98 g/kg，RSD=0.3%，表明該樣品精密度良好。飼料添加劑葉黃素經過準確度試驗、精密度試驗測定結果RSD均在規定的范圍內，且有較好的準確度與精密度。該方法合理、操作便捷，適合飼料添加劑葉黃素浸膏的檢測。