不同浸泡時間對大柴胡湯煎煮有效成分溶出量和得膏率的考查

劉 瑩，鄒愛英

(1.天津中醫藥大學，天津 300193； 2.天津中醫藥大學第二附屬醫院，天津 300150)

不同浸泡時間對大柴胡湯煎煮有效成分溶出量和得膏率的考查

劉 瑩1，2，鄒愛英2*

(1.天津中醫藥大學，天津 300193； 2.天津中醫藥大學第二附屬醫院，天津 300150)

目的：通過研究浸泡與否及浸泡時間長短對大柴胡湯有效成分浸出率和得膏率的影響，為醫院代煎湯藥的浸泡操作標準化、規范化提供數據參考，以保證醫院湯劑的質量和臨床療效。方法：將大柴胡湯分為五組，分別是未浸泡、浸泡20 min、浸泡40 min、浸泡60 min和浸泡120 min，為保證試驗數據的準確性，每組再設計三組平行試驗。使用醫院煎藥室專用煎藥機提取藥液，通過得膏率和方劑中代表性成分芍藥苷含量兩項指標進行評價。結果：得出大柴胡湯不同的浸泡時間所得干膏重量和代表性成分芍藥苷的含量。結論：通過單因素方差分析方法，分析得膏率和代表性成分芍藥苷的含量數據，表明芍藥苷含量在浸泡20、40和60 min與不浸泡相比沒有顯著性差異，浸泡120 min與不浸泡相比有顯著性差異。得膏率在不同浸泡時間沒有顯著性差異。

浸泡時間，煎藥機，芍藥苷，有效成分，得膏率

多數中藥飲片為動植物干品，有一定的體積和厚度，煎煮前冷水浸泡可以使藥材的表面濕潤、變軟、植物細胞膨脹，使藥物有效成分部分溶出，因此中藥煎煮前的浸泡對中藥有效成分溶出有非常重要的意義[1-5]。大柴胡湯出自《金匱要略》，由柴胡、黃芩、芍藥、半夏、生姜、枳實、大棗和大黃組成。具有和解少陽、內瀉熱結等功效，用于治療急、慢性膽囊炎，臨床使用較多，因此，本文通過考查浸泡時間的長短對大柴胡湯方劑中有效成分芍藥苷含量與得膏率的影響，為浸泡操作的標準化、規范化提供完整的數據參考，以保證醫院中藥湯劑的質量和臨床療效。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(紫外可見光檢測器)(美國 Agilent)；微壓循環中藥煎藥機(北京東華原醫療設備有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(天津市華儀盛達實驗儀器有限公司)；電子天平FA2204B(上海佑科儀器儀表有限公司)；分析天平XA205DU(梅特勒-托利多國際股份有限公司)；電熱鼓風干燥箱(天津市華北實驗儀器有限公司)；循環水式真空泵SHB-ⅢAB(北京中興偉業儀器有限公司)；乙腈(天津市光復精細化工研究所)為色譜純；甲醇(天津市風船化學試劑科技有限公司)、磷酸(天津市光復精細化工研究所)均為分析純；純凈水(娃哈哈有限公司)；芍藥苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110736-201438)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸(15∶85)；流速：1.0 ml/min；柱溫：25 ℃；檢測波長：230 nm。理論塔板數以芍藥苷計不低于2 500。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品0.012 03 g于25 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到濃度為481.2 μg/ml的對照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 大柴胡湯處方：柴胡15 g，黃芩9 g，芍藥9 g，清半夏9 g，枳實9 g，大黃6 g，生姜15 g，大棗15 g。按14倍處方量精密稱取藥材共15付，取5付為一組，平行試驗三組，將每付藥材包裹于煎藥機專用布袋中，封口，裝入煎藥機中，加入3 500 ml蒸餾水，使藥材浸沒，分別浸泡0、20、40、60和120 min，采用加壓的方法進行煎煮，一煎25 min、二煎15 min，一煎加水量為3 500 ml、二煎加水量為2 500 ml，煎煮好藥液后擠壓，取出并稱量體積。精密量取10 ml的藥液，用甲醇定容至25 ml量瓶中，搖勻。以微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 稱取缺白芍的處方藥材，按“2.2.2”項下的方法制備陰性樣品溶液。分別精蜜吸取對照品、供試品和陰性樣品溶液注入液相色譜儀，按照“2.1”項下色譜條件分析，色譜圖見圖1。

2.3 標準曲線的制備 精密吸取1、2、3、4和5 ml的對照品貯備液至5 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度線，配制成濃度為96.24、192.48、288.72、384.96和481.2 μg/ml的標準溶液。按照“2.1”項下色譜條件進樣測定。以峰面積為縱坐標，以濃度(μg/ml)為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為Y=13.153X-173.77(r=0.999)。結果芍藥苷在96.24～481.2 μg/ml濃度范圍內呈良好的線性關系。

1.芍藥苷

2.4 精密度試驗 取對照品溶液，按照“2.1”項下的色譜條件重復連續進樣6次，記錄HPLC色譜圖，測定峰面積。結果RSD為0.26%，表明儀器的精密度良好。

2.5 穩定性試驗 取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8和12 h按照“2.1”項下色譜條件依次進樣，測定峰面積。結果RSD為0.42%，表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.6 重復性試驗 按“2.2.2”項下供試品溶液的制備方法平行做6份樣品，按“2.1”項下色譜條件依次進樣，測定峰面積。結果RSD為1.58%，表明本方法重復性良好。

2.7 回收率試驗 精密量取供試品溶液10 ml,9份，分別精密加入高、中、低3個水平的芍藥苷對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件依次進樣，測定峰面積，計算回收率。結果平均回收率為99.59%，RSD為1.95%。見表 1。

2.8 樣品測定 取大柴胡湯浸泡0、20、40、60和120 min五種供試品溶液，三組平行溶液，依照“2.1”項下色譜條件依次進樣測定，取平均值，結果見表2，通過單因素方差分析發現浸泡20、40和60 min與不浸泡相比沒有顯著性差異，浸泡120 min與不浸泡相比有顯著性差異(P<0.05)。

表1 芍藥苷加樣回收率試驗結果(n=9)

2.9 得膏率的測定 精密量取50 ml的藥液上清液，置已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，于烘箱中105 ℃干燥3 h，置于干燥器中冷卻0.5 h，迅速稱量，即可得干浸膏重量，計算得膏率，取平均值，結果見表3，通過單因素方差分析發現浸泡20、40、60和120 min與不浸泡相比沒有顯著性差異。

表2 不同浸泡時間大柴胡湯中芍藥苷含量±s)

注：與不浸泡相比*P<0.05

表3 不同浸泡時間大柴胡湯得膏率±s)

3 討論

目前隨著自動煎藥機的廣泛使用，煎煮環節基本實現自動化、標準化，而浸泡是醫院和藥店煎煮中藥出現問題集中的環節，操作隨意性強，煎煮前藥物不浸泡或浸泡時間不足導致藥材煎不透、浸泡時間過長引起藥物有效成分酶解或藥品霉敗的問題應引起大家的注意。

本次試驗采用煎藥機加壓提取藥液，優勢很多，可以更好地模擬醫院或藥店給病人代煎中藥的過程，在煎煮時間、煎煮次數、加水量等一致的情況下，對比不同浸泡時間下方劑代表性成分含量及出膏率，能更直觀地觀察到其浸泡時間對煎藥質量的影響。對于芍藥苷含量和得膏率的影響因素有以下幾點：①加水量較多，溶出達到了一種飽和的狀態，從而導致不同浸泡時間得膏率沒有顯著差異。②在加熱過程中，由于室內溫度變化，加熱到沸點的時間也會有不同變化，記錄數據發現有2～5 min的差異，在達到沸點后，溫度有時可以直接升到120 ℃，在壓強增加的情況下溫度升高，可能對芍藥苷的含量和得膏率有一定影響。③高壓環境能在一定程度上促進藥材成分的浸出率。藥材浸泡的原理是水分子從藥材的表面向內部滲透，產生一定的滲透壓，由于藥材的固體結構，內外壓強差基本保持恒定。當外界壓力增加時，造成更懸殊的壓強差，為了保持穩定的壓差，就要加速水分子向藥材內部的滲透作用，進而加速了藥材內部有效成分的溶出。每組平行試驗在煎煮過程中壓強并不完全一致，通常在15到20個大氣壓之間，這其中的差異也是影響結果的原因之一。

1 歐陽榮,彭懿,劉紹貴,等.四種中藥的直火單煎與機煎單煎液的質量對比檢測[J].中國藥業,2001,10(3):48-49

2 蒲維婭,萬偉中.不同煎煮工藝對復方白芍湯質量的影響[J].云南中醫中藥雜志,2009,30(8):53-54

3 董繼先,白路.中藥自動煎煮及其無菌包裝機的研究[J].輕工機械,2004,(4):97-100

4 王亞紅,張瑞芳,王稚哲.影響中藥復方湯劑藥效的因素及中藥復方湯劑發展前景[J].藥學服務與研究,2004,4(1):77-79

5 回瑞華,刁全平,侯冬巖,等.浸泡時間對揮發油提取作用的影響研究[J] .鞍山師范學院學報,2015,17(2):41-44

2016-06-24

天津市中醫藥管理局中醫、中西醫結合科研專項課題(No.13105)

R944

A

1006-5687(2016)05-0011-03

*通訊作者：鄒愛英，E-mail：zy2fyxb@163.com。