實驗性高脂血癥大鼠模型的建立和評價

王 俊,孫雅利,房燕娜,陶夢君,袁 慧

(皖南醫學院 公共衛生學院，安徽 蕪湖 241002)

高脂血癥通常是指血脂水平過高，可直接引起一些嚴重危害人體健康的疾病，是一種常見的心血管疾病[1]。大量流行病學調查和臨床研究顯示高脂血癥是高血壓、糖尿病、動脈粥樣硬化、冠心病等多種疾病的危險因素[2]。目前我國成人高脂血癥患病率為18.6%[3]，且發病率呈逐年上升的趨勢，其病因學、預防和治療已成為目前的研究熱點。由于目前高脂血癥的發病機制尚未完全闡明，需要采用高脂血癥動物模型以進一步深入研究其病理生理機制，故建立更合理而實用的高脂動物模型尤為重要[4]。國際上目前大多采用大鼠建立高脂血癥動物模型，其主要分為：高脂乳劑灌胃法、高脂飼料法、靜脈注射法。其中高脂乳劑灌胃法較為常用，優點在于實驗操作簡單，實驗過程中不需要對大鼠進行額外干預，動物無嘔吐反應，死亡率低，且能夠精確確定動物食用量。已有研究者通過高脂乳劑灌胃成功建立高脂血癥模型[5-6]。本研究采用自制高脂乳劑通過灌胃法制作大鼠高脂血癥的模型，并對其有效性和可行性進行評價，為國內研究高脂動物模型提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選用健康雌性Wistar大鼠20只，8周齡，平均體質量(200±20)g，由皖南醫學院機能實驗中心提供，實驗中動物處置符合皖南醫學院實驗動物倫理委員會要求。

1.2 實驗材料 電子天平、分析天平、皮尺、基礎飼料(長沙市天勤生物技術有限公司)、高脂乳劑(自制)。

1.3 實驗方法 采用基礎飼料適應性喂養1周后，將大鼠隨機分為兩組，每組10只，分別標記為空白對照組和高脂乳劑實驗組?？瞻讓φ战M：給予普通飼料喂養。高脂乳劑實驗組：給予高脂乳劑灌胃，1 mL/100(g·d)，每日給藥1次。

1.4 高脂乳劑配方 油(玉米)400 g，糖150 g，奶粉80 g，膽固醇100 g，膽酸鈉10 g，吐溫80 36.4 g，丙二醇31.1 g，維生素2.5 g，食鹽10 g，蒸餾水300 mL混勻。

2 結果

2.1 大鼠體質量的變化 實驗組和對照組大鼠在觀察期體質量的增長差異有統計學意義(F=12.28，P=0.001)。進一步兩兩比較，結果顯示在第7周和第8周實驗組大鼠體質量高于對照組(P<0.05)，具體結果見表1。兩組大鼠在第一周體質量均有所下降，隨后體質量增加，大鼠平均體質量隨時間變化情況見圖1。

圖1 兩組大鼠體質量變化圖

1周2周3周4周5周6周7周8周實驗組237.40±17.33231.30±19.97248.50±14.10255.13±16.01258.00±15.06263.14±6.97285.83±11.69*285.67±7.50*對照組253.20±20.02238.00±7.94244.50±3.03259.40±15.61260.30±13.72266.70±15.09268.10±10.68261.20±14.35

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 大鼠體長的變化 大鼠體長定義為大鼠鼻尖到肛門的距離。實驗組和對照組的大鼠體長在觀察期間差異具有統計學意義(F=51.53，P<0.001)，進一步兩兩比較顯示第5周對照組和實驗組大鼠體長差異具有統計學意義(P<0.05)，如表2。兩組大鼠的體長在第1周均有所下降，隨后體長增加。

采用重復測量方差分析，盡管兩組的Lee′s 指數隨時間呈下降趨勢，實驗組的Lee′s 指數仍高于對照組，差異有統計學意義(F=7.55，P=0.005)。不同時點兩組比較的結果顯示，第5周的Lee′s指數差異具有統計學意義(P<0.05)，如表3所示。Lee′s指數隨時間變化情況見圖2。

1周2周3周4周5周6周7周8周實驗組20.13±0.3619.68±0.5520.65±1.2820.59±0.5621.16±0.10*21.12±0.6021.76±0.6622.02±0.62對照組20.29±0.8919.28±0.7620.06±0.5020.30±0.8720.51±0.4720.80±0.4721.53±0.5222.30±0.62

注：與對照組比較，*P<0.05。

表3 實驗組和對照組Lee′s 指數的變化

1周2周3周4周5周6周7周8周實驗組305.52±15.08318.41±10.25313.50±11.53312.87±16.15310.45±11.43*308.16±6.01306.10±10.41295.54±9.90對照組314.17±10.78315.10±10.25303.93±20.17309.899±12.12301.66±5.13304.84±9.06296.50±8.89290.35±7.16

注：與對照組比較，*P<0.05。

圖2 兩組大鼠Lee′s指數變化圖

3 討論

目前高脂血癥的乳劑灌胃法以油、膽固醇、膽酸鈉等為原料，加入適量的乳化劑制成脂肪乳劑。通過模擬人類的高脂飲食，使模型體內相關生化指標迅速上升，具有操作簡單、造模時間短、死亡率低等特點[7],被廣泛應用于降脂藥物的體內篩選。

近年來研究發現，高脂飲食可引起高脂血癥，并進一下發展為高血壓、糖尿病、動脈粥樣硬化、冠心病等多種疾病[7]。在實驗過程中，對于大鼠高脂血癥模型的評價方法一般可分為一般觀察性指標和各種生化指標[8]。其中一般觀察性指標主要包括身長、體質量和Lee′s指數等。Bunyan等[9]的研究顯示Lee′s指數是一種能夠很好反映成年大鼠肥胖程度的有效指數，何明等[10]的研究顯示該指數和多種血液相關指標具有高度的相關性。

本實驗采用乳化劑灌胃方式，建立Wistar大鼠高脂血癥的模型。實驗結果表明，大鼠的體質量和體長總體趨勢隨著時間的增加而增加，且實驗組明顯高于對照組。盡管隨著時間的延長，大鼠的Lee′s指數有下降趨勢，實驗組仍明顯高于對照組。結果表明采用這種單純高脂乳劑配方可以建立較為理想的肥胖大鼠模型。在第1周，兩組大鼠體長和體質量均出現不同程度下降，這可能與大鼠在灌胃過程中出現的適應性應激反應有關，灌胃一周后大鼠逐漸適應，出現了體質量增長趨勢。在分析大鼠Lee′s指數的變化時，并未出現像大鼠的身長和體質量一樣一直增加的情況，這可能與使用該乳化劑灌胃喂養時間較短有關[11]，因為在觀察期的最后兩周實驗組的體質量增長才較為明顯。在后續研究中，我們將進一步進行肥胖大鼠的血液學和內臟相關指標的檢測來評價模型的效果。

綜上所述，采用該乳化劑灌胃可較好地促進大鼠體質量增長，能建立較為理想的高脂血癥大鼠模型，但是單純高脂配方要求喂養時間相對較長。