SHP2和PDL1在胰腺導管腺癌中的表達及臨床意義

鄭佳薇，黃于芳，宋 麗，歐陽學農

(1.莆田學院基礎醫學部，福建 莆田 351100；2.福建省腫瘤醫院腫瘤內科，福建 福州 350014；3.聯勤保障部隊第900醫院腫瘤科，福建 福州 350025)

胰腺導管腺癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC)由于早期癥狀不明顯、易轉移和對放療、化療等治療方式的敏感性不高(唯一的根治性方法為手術切除)導致診斷時多發展為晚期，同時，如果患者術后沒有配合有效的輔助治療均導致患者術后5年生存率低于5%[1]。因此，尋找可靠的相關標志物和治療靶點成為該領域的研究熱點。Src同源區2-含蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase，SHP2)是一種酪氨酸蛋白磷酸酶[2]。SHP2參與了胃癌[3]、乳腺癌[4]等腫瘤的發生發展。程序性細胞死亡1配體1(Programmed cell death 1 ligand 1，PDL1)在胃癌[5]、非小細胞肺癌[6]、胰腺癌[7]中呈現高表達。目前，在PDAC中SHP2及PDL1雙陽性表達情況及其與PDAC患者的臨床病理參數之間的相關性國內外尚未見報道。本研究通過檢測SHP2及PDL1在PDAC中的表達情況，探究其與臨床病理參數之間的關系，以及兩蛋白表達之間的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2008年1月至2017年12月間聯勤保障部隊第900醫院(原福州總醫院)病理科PDAC患者手術切除的存檔蠟塊標本79例為實驗組，術前均未進行放化療等其他抗癌治療。79例患者中，男性52例，女性27例；中位年齡57歲，35例患者年齡<57歲，44例患者年齡≥57歲。低分化30例，高、中分化49例。淋巴結轉移40例，無淋巴結轉移39例。手術切緣R0 74例，手術切緣R1 5例。T分期T1～T234例，T3～T445例。TNM分期I～II期32例，III期47例。79例PDAC組織標本相應的癌旁組織為對照組。

1.2 方法PDAC組織的蠟塊均采用4 μm連續切片，采用免疫組化Elivision法檢測SHP2及PDL1的表達情況。實驗操作步驟嚴格按照Elivision試劑盒說明書進行。兔抗人PDL1單克隆抗體和兔抗人SHP-2單克隆抗體購自美國Abcam公司，免疫組化Elivision試劑盒購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3 染色結果判定標準由兩名事先對所有患者的臨床病理參數不知情的病理醫師對免疫組化染色切片進行獨立閱片。隨機選取切片中5個高倍視野，每個視野計數100個細胞，分別觀察染色強度和陽性細胞所占的百分數。按照陽性著色強度分為不著色、淡黃、棕黃、棕褐色，分別記為0分、1分、2分、3分。陽性腫瘤細胞所占的百分比被分為3個級別：<10%記0分；10%～24%記1分；25%～50%記2分；>50%記3分。兩項評分相乘得到最終的評分即染色指數(Staining index，SI)。SI評分>3為陽性表達，SI評分≤3為陰性表達。

1.4 統計學處理采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計數資料以率(%)表示，兩個樣本率之間的比較采用卡方檢驗。SHP2與PDL1之間的相關性采用配對校正卡方檢驗和Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SHP2和PDL1在PDAC及癌旁正常組織中的表達情況PDL1蛋白定位于腫瘤細胞的細胞核及細胞質，SHP2蛋白定位于腫瘤細胞的細胞質，陽性表達呈現棕黃色或棕褐色顆粒，見圖1A、圖1B。圖1C和圖1D所示，PDL1蛋白和SHP2蛋白在癌旁正常組織中不表達。79例PDAC患者中，PDAC組織中SHP2蛋白的陽性表達率明顯高于癌旁組織；PDAC中PDL1蛋白的陽性表達率明顯高于癌旁組織；PDAC組織中SHP2/PDL1同時表達的陽性表達率明顯高于癌旁組織，見表1。

表1 SHP2、PDL1和SHP2/PDL1蛋白雙陽性在PDAC和癌旁組織中的表達[n(%)]

圖1 SHP2和PDL1在PDAC及癌旁正常組織中的表達情況

2.2 PDAC中SHP2和PDL1表達的相關性79例PDAC組織中，SHP2單陽性2例；PDL1單陽性15例；SHP2、PDL1表達均為陽性47例；SHP2、PDL1表達均為陰性15例，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。經Spearman等級相關系數分析顯示，rs=0.542，P=0.000，兩者呈正相關關系。

表2 PDAC中SHP2和PDL1表達的相關性

2.3 SHP2、PDL1表達和SHP2/PDL1共表達與PDAC的臨床病理參數的相關性如表3所示，79例PDAC組織中SHP2表達與患者性別、年齡、分化程度相關(P<0.05)；PDL1表達與患者性別相關(P<0.05)。SHP2及PDL1雙陽性表達與患者性別、年齡、較低的分化程度及手術切緣相關(P<0.05)。

表3 SHP2、PDL1表達和SHP2/PDL1共表達與PDAC的臨床病理參數的相關性[n(%)]

3 討論

PDAC是一種侵襲程度高的惡性腫瘤，預后普遍較差，5年生存率不足5%，傳統治療方法包括手術、化療和放療。目前，分子靶向治療因為其副作用小、治療精確等特點，已成為一種新的治療方法。程序性細胞死亡蛋白1(The programmed cell death protein 1，PD-1)及其配體(Programmed cell death—ligand 1,PD-L1)是一種新型的免疫檢查點通路，在腫瘤微環境的免疫逃避中起著至關重要的作用[8-9]。腫瘤通過操縱“PD-1及其配體PD-L1相互作用”等免疫檢查點通路來削弱T細胞在腫瘤微環境中的功能，從而在患者免疫系統中存活下來[8,10-11]。本研究結果顯示，PDL1蛋白在PDAC組織中較癌旁正常組織明顯高水平表達(78.48% vs 6.33%，P<0.001)。通過統計學方法分析PDL1和臨床病理參數之間的關系，結果顯示PDAC組織中PDL1表達與不同年齡、分化程度、N分類、手術切緣、T分類、TNM分期均無關(P>0.05)，這與Birnbaum DJ團隊的結果大體上相一致，Birnbaum DJ團隊還發現PDL1表達可能預示著胰腺癌的早期擴散和遠處轉移，PD1/PDL1抑制劑可能是胰腺癌的一種新的免疫治療方法[12]。Gao HL團隊的Meta分析提示PD-L1高表達與PDAC患者預后不良有關，可能是一個潛在的預后因子[13]。然而，抗PD-1/PD-L1單藥治療的療效可能受限于胰腺癌固有的無致免疫性特征(如無致免疫性的亞型或免疫耐受等)造成的免疫系統抑制[14-15]。

SHP2可以通過與許多分子受體相結合，如生長因子受體結合蛋白2、血小板內皮細胞黏附分子和血管內皮細胞鈣粘連蛋白，進而促進腫瘤的生長、遷移、血管生成、腫瘤發生、耐藥性、DNA復制和抑制凋亡[16]。本研究結果顯示，SHP2蛋白在PDAC組織中較癌旁組織高表達(62.03% vs 8.86%，P<0.001)，經統計分析顯示SHP2蛋白的表達與性別、年齡、低分化水平相關(P<0.05)，提示SHP2可能參與促進PDAC的發生發展。

研究表明,PD1/PD-L1通過招募SHP-1和SHP-2來參與到免疫抑制和腫瘤生成[17-18]，與此相一致地，本課題我們首次揭示了在PDAC中SHP2與PDL1的表達呈正相關關系(rs=0.542，P=0.000)，SHP2/PDL1雙陽性表達率在PDAC組織中較癌旁正常組織明顯更高(59.49% vs 6.33%，P<0.001)，SHP2/PDL1雙陽性表達預示著較高侵襲性的臨床病理特征，聯合檢測SHP2與PDL1蛋白有望對預后評估提供參考意義。研究結果證實了PDL1和SHP2之間的相互作用也存在于PDAC中，并且與較低的分化程度類型相關(P<0.05)，這預示著未來將會有一種新型抗癌治療方法即通過同時抑制SHP2及PDL1來治療胰腺癌。

今后，在此方面的研究結果還需通過更多的樣本量來進一步證實。同時，PDL1和SHP2之間的信號通路需要在體內和體外實驗中繼續深入探索。