青藤堿星狀神經節阻滯對慢性心肌缺血大鼠的影響

王艷琴，鄭 剛，，齊 婧，徐佳萌，楊 聰

（1.陜西中醫藥大學，陜西 咸陽 712046；2.陜西中醫藥大學第二附屬醫院，陜西 咸陽 712000）

近年來，隨著人們生活水平的提高，冠心病的發病率越來越高，已成為威脅人類生命健康的主要疾病。慢性心肌缺血綜合征是冠心病的主要類型，它是指冠狀動脈發生粥樣硬化引起管腔狹窄或閉塞，導致心肌缺血缺氧或壞死而引起的心臟?。?］。治療心肌缺血的藥物眾多，如硝酸酯類藥物、β 受體拮抗劑、鈣離子通道阻滯劑等，還有改善預后的眾多藥物，如抗血小板聚集藥物、調脂類藥物等，但長期服用副作用極大，急需尋求有效且副作用較小的治療方法。星狀神經節阻滯（SGB）通過降低交感與應激反應、減輕炎癥反應、防止氧化應激等減少心肌缺血的發生［2‐5］。青藤堿來源于植物青風藤的根莖，廣泛用于治療類風濕性關節炎等疾病，動物研究證明其具潛在消炎、鎮痛作用［6］，部分研究表明青藤堿在治療心血管疾病方面有一定療效，本課題組已有研究表明其在心臟病的治療方面療效頗著［7，8］，本次實驗旨在研究青藤堿聯合SGB 治療對抑制交感、抗氧化應激、炎癥反應以及緩解心肌缺血的作用。

1 材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 動物 選擇SPF 級SD 大鼠40 只，雌、雄各半，平均體重為180～200 g，購自成都達碩實驗動物有限公司［許可證號：SCX 空白（川）2015‐030］，本實驗大鼠均在陜西中醫藥大學協同中心實驗室動物房內飼養，實驗過程均采用動物實驗標準鼠籠，分籠飼養，每籠5 只。在實驗開始前，保證室內溫度（20±2）℃、濕度（50%～55%）、正常通風同等條件下進行適應性喂養7 d，自由攝食SPF 級標準飼料、高壓、高溫滅菌自來水。

1.1.2 主要試劑及配制 鹽酸青藤堿由陜西慧科植物開發公司提供，含量98%，生產批號：hk3992E5；鹽酸青藤堿注射液由陜西中醫藥大學藥學院制備提供，規格20 mg/mL；鹽酸利多卡因注射液由陜西中醫藥大學附屬醫院提供，國藥準字號：H14024045，規格：5 mL/0.1 g，加5 mL 生理鹽水配成濃度為1%的利多卡因注射液；垂體后葉素注射液：陜西中醫藥大學附屬醫院提供，生產批號：1190203，規格：1 mL/6 單位；水合氯醛由上海山浦化有限公司提供，加生理鹽水現配現用，濃度：10%。

1.1.3 主要儀器及設備 超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）試劑盒均購自武漢賽維爾科技有限公司（貨號：A001‐1、A003‐1）；白介素‐6（IL‐6）ELI‐SA 試劑盒（批號：A30600115）、肌鈣蛋白I 試劑盒（貨號：CB‐E30062R）；全自動生化分析儀、電子分析天平、離心管、EDTA+空白2 抗凝管、采血針、眼科鑷子、剪刀、醫用注射器（1、2.5 mL）、移液槍、槍頭（200 μL）、75%酒精、醫用棉球等均為咸陽市秦都區博泰化玻璃儀器經銷部提供。

1.2 動物分組、造模及處理

1.2.1 動物分組及造模 實驗大鼠40 只適應性喂養7 d 后按照隨機數字表法分為4 組，每組10 只，空白組10 只，飼喂普通標準飼料，不造模，共8 周；剩余30 只大鼠喂高脂飼料（高脂飼料配方：1.25%膽固醇+15%豬油+0.5%膽酸鈉+9%蔗糖+6%全乳脂蛋白+68.25%普通飼料），共飼喂8 周，誘導血管脂質沉積；實驗第8 周末高脂飲食飼喂大鼠與普通飼料喂養大鼠血脂有明顯差異后，隨機分為3 組，每組10 只。模型組第10 周開始給予右側星狀神經節（RSG），注射0.9%NaCl 0.24 mL 連續2 周，注射前給予10%水合氯醛1/3 劑量進行輕度麻醉，后于大鼠舌下靜脈連續注射3 d 垂體后葉素注射液（0.5 U/kg，5 s 內推注完），注射前大鼠禁食8 h，1 次/24 h，于第3 天注射前連接心電圖，觀察心肌缺血變化；利多卡因組給予RSG，注射1% 利多卡因注射液0.24 mL，余同模型組；青藤堿+利多卡因組大鼠給予RSG 注射1%利多卡因注射液0.24 mL+鹽酸青藤堿0.095 mL+0.9%生理鹽水2.9 mL，共0.8 mL，余同模型組；空白組未進行任何干預措施。

1.2.2 造模成功及SGB 成功的標準 根據心電圖ST 段變化及血清cTnI 改變判斷心肌缺血造模是否成功。實驗結束后取血比較各組大鼠血清肌鈣蛋白I 水平［9］；SGB 前后5 min，讓動物自由活動，觀察兩側眼瞼、眼裂的變化。發現在實驗組阻滯后與阻滯前比較，出現霍納綜合征，即上瞼下垂，眼裂變窄等表現［10］。

1.2.3 取材及檢測 各組大鼠共喂養11 周，每次給藥后1～2 h 觀察大鼠一般狀態；于末次垂體后葉素注射液注射前后觀察心電圖變化：實驗結束后各組大鼠于腹主動脈取血，檢測血清氧化應激及炎癥因子指標SOD、MDA、IL‐6 及CTnI 水平變化。

1.3 觀察指標

1.3.1 一般狀態 在藥物SGB 干預兩周內，每次給藥后1～2 h 觀察。

1.3.2 心電圖 動物麻醉后將連接PowerLab 生物信號系統電極的6 號針頭分別插入大鼠前肢和下肢皮下，采用PowerLab 生物信號采集處理系統，記錄標Ⅱ導聯心電圖，描記系統由電腦操作，分別記錄注射前（0 s）及注射后第10、20、30 分鐘心電圖變化，觀察心電圖陽性標準：（1）ST 段水平向下或向上偏移>0.1 mV；（2）T 波高聳超過同導聯R 波的1/2；（3）T 波高聳伴ST 段移位。具備以上條件之一者即可判斷為缺血陽性［11］。

1.3.3 血清氧化應激指標SOD 與MDA、炎癥反應指標IL‐6 及CTnI 的測定 實驗結束后對實驗大鼠腹主動脈采血5 mL，3 000 r/min 離心20 min，分離血清，4℃保存，測定SOD、MDA、IL‐6、CTnI 指標。

1. 4 統計學處理

采用SPSS 19.0 統計軟件對數據進行處理分析，數據均以（±s）表示，組內比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（ANOVA），兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠一般狀態

給藥后各組大鼠行為均無異常，無煩躁不安、發熱、昏厥、行動遲緩或其他異常情況，給藥后大鼠處于輕度麻醉狀態，持續5～6 min 后即可恢復正常。實驗過程中模型組大鼠死亡2 只，利多卡因組大鼠死亡1 只，利多卡因+青藤堿組大鼠死亡1 只。觀察各組大鼠食欲正常，飲水正常。藥物SGB 對大鼠死亡影響較小，無其他不良影響。

2.2 心電圖

各組大鼠注射垂體后葉素后心電圖表現各異，注射前后1 min 之內大鼠心率變慢、心肌缺血程度加重。模型組大鼠10 min 時ST 段抬高明顯，20 min 后即開始下降，30 min 時仍有缺血改變；利多卡因組大鼠10 min 時ST 段抬高一般，20 min 后即開始明顯下降，30 min 時幾乎無缺血改變；利多卡因+青藤堿組大鼠10 min 時ST 段抬高程度較小，20 min 及30 min 幾乎無缺血改變；與空白組比較，模型組、利多卡因組、利多卡因+青藤堿組心電圖變化明顯，差異均有統計學意義（P<0.05 或P<0.01），表明造模成功。見表1。

表1 青藤堿星狀神經節阻滯對慢性心肌缺血大鼠心電圖影響（mV，±s）Tab 1 Effects of sinomenine stellate ganglion block on ECG of rats with chronic myocardial ischemia（mV，±s）

表1 青藤堿星狀神經節阻滯對慢性心肌缺血大鼠心電圖影響（mV，±s）Tab 1 Effects of sinomenine stellate ganglion block on ECG of rats with chronic myocardial ischemia（mV，±s）

注：與空白組比較，#P<0.05,##P<0.01。

30 min 0.046±0.004 0.147±0.035##0.061±0.043##0.085±0.014##組別空白組模型組利多卡因組利多卡因+青藤堿組n 10 899 10 min 0.042±0.002 0.213±0.065##0.071±0.080##0.135±0.212#20 min 0.054±0.003 0.189±0.050##0.075±0.058##0.105±0.014##

2.3 CTnI

與空白組相比，模型組、利多卡因組、利多卡因+青藤堿組CTnI 值均升高，其中模型組CTnI 值最高，模型組和利多卡因組與空白組比較，差異均有統計學意義（P<0.05 或P<0.01）；與模型組比較，利多卡因組、利多卡因+青藤堿組CTnI 值均降低，差異均有統計學意義（P<0.05 或P<0.01），提示心肌缺血壞死因子產生，模型建立成功。見表2。

表2 青藤堿星狀神經節阻滯對慢性心肌缺血大鼠CTnI 的影響（ng/mL，± s）Tab 2 Effect of sinomenine stellate ganglion block on cTnI in rats with chronic myocardial ischemia（ng/mL，±s）

表2 青藤堿星狀神經節阻滯對慢性心肌缺血大鼠CTnI 的影響（ng/mL，± s）Tab 2 Effect of sinomenine stellate ganglion block on cTnI in rats with chronic myocardial ischemia（ng/mL，±s）

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05。

CTnI 304.68±70.95 562.50±86.54**446.14±62.37*#330.77±91.80#組別空白組模型組利多卡因組利多卡因+青藤堿組n 10 899

2.4 SOD 與MDA

與空白組相比，模型組SOD 值明顯降低，差異有統計學意義（P<0.05）；與模型組比較，利多卡因組、利多卡因+青藤堿組SOD 值明顯升高，其中利多卡因+青藤堿組SOD 值最高，差異有統計學意義（P<0.01）。與空白組比較，模型組MDA 值明顯升高，差異有統計學意義（P<0.01）；與模型組比較，利多卡因組、利多卡因+青藤堿組MDA 值明顯降低，其中利多卡因+青藤堿組MDA 值最低，差異有統計學意義（P<0.05 或P<0.01）；結果提示青藤堿SGB 可以提高各高脂血癥心肌缺血大鼠組的SOD，降低MDA，從而達到抗氧化應激損傷的作用。見表3。

表3 青藤堿星狀神經節阻滯對慢性心肌缺血大鼠SOD 與MDA的影響（±s）Tab 3 Effects of sinomenine stellate ganglion block on SOD and MDA in rats with chronic myocardial ischemia（±s）

表3 青藤堿星狀神經節阻滯對慢性心肌缺血大鼠SOD 與MDA的影響（±s）Tab 3 Effects of sinomenine stellate ganglion block on SOD and MDA in rats with chronic myocardial ischemia（±s）

注：與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05,##P<0.01。

MDA（nmoL/mL)5.19±0.85 7.03±0.69**5.90±1.21#5.67±1.03##組別空白組模型組利多卡因組利多卡因+青藤堿組n 10 899 SOD 活力（U/mL）472.32±20.65 404.02±48.35*482.04±92.07##507.73±27.96##

2.5 IL‐6

與空白組比較，模型組IL‐6 值明顯升高，差異有統計學意義（P<0.01）；與模型組相比，利多卡因組、利多卡因+青藤堿組大鼠均明顯降低，利多卡因+青藤堿組最低，差異有統計學意義（P<0.05 或P<0.01），表明青藤堿SGB 可以降低大鼠IL‐6 值，從而達到抑制炎癥反應的作用。見表4。

表4 青藤堿星狀神經節阻滯對慢性心肌缺血大鼠IL-6 的影響（pg/mL，± s）Tab 4 Effect of sinomenine stellate ganglion block on IL-6 in rats with chronic myocardial ischemia（pg/mL，±s）

表4 青藤堿星狀神經節阻滯對慢性心肌缺血大鼠IL-6 的影響（pg/mL，± s）Tab 4 Effect of sinomenine stellate ganglion block on IL-6 in rats with chronic myocardial ischemia（pg/mL，±s）

注：與空白組比較，*P<0.05；**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05,##P<0.01。

IL‐6 154.70±30.11 252.72±35.53**208.51±49.73*#187.58±39.61##組別空白組模型組利多卡因組利多卡因+青藤堿組n 10 899

3 討論

心肌缺血是心臟重塑、心肌梗死、心力衰竭等疾病的主要原因之一［12］。慢性心肌缺血為臨床常見病理過程，是多種心肌疾病及心衰的起始過程，其發生涉及炎癥細胞浸潤、心肌氧化應激、氧自由基生成、心肌能量代謝、自噬等多種病理過程。研究表明，SGB 明顯降低血清CTnI 和心肌肌鈣蛋白T 水平，減輕ST 段抑制和氧化產生水平，但增加抗氧化酶水平［9］。在降低一氧化氮和MDA 水平以及提高SOD、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶、神經元型一氧化氮合酶和內皮型一氧化氮合酶水平方面，右側SGB 的保護作用強于左側。SOD 是體內抗自由基生成的一種抗氧化酶，其含量多少可以反映機體清除氧化應激過程的能力；MDA 是機體發生損傷脂質過氧化產生的一種病理產物，其含量高低能夠反映機體受氧化攻擊程度［13，14］。本實驗通過檢測血清SOD 和MDA 含量，證實了SGB 可以通過抗氧化應激來改善心肌缺血狀態。

此外，炎癥反應也是急性心肌梗死的病理研究機制之一，炎癥是由血管損傷引起的一個有序的過程，它會產生更強的白細胞黏附性、趨化性，并最終在原位激活。細胞因子IL‐6 是巨噬細胞和單核細胞產生的一種炎性因子，是治療各種炎癥和自身免疫性疾病的主要治療靶點［15］，與心肌缺血性損傷關系密切。研究顯示SGB 預處理能夠通過抑制炎癥信號通路進而抑制炎癥因子反應達到保護大鼠體外循環后腦損傷作用［16，17］。青藤堿是中藥青風藤的主要藥用成分，有抗炎、鎮痛、免疫抑制、擴血管降壓、抗心律失常等藥理作用［18］。有研究發現青藤堿可抑制NF‐κB 信號通路，抑制信號通路中炎性物質表達，減弱異丙腎上腺素注射小鼠誘導的心肌肥厚及提高IL‐10/IL‐17 的比例，抑制I 型和Ⅲ型膠原蛋白的mRNA 和蛋白質水平，改善心衰狀態［19，20］。本實驗同樣證實了青藤堿SGB 可降低大鼠IL‐6 水平進而改善心肌缺血狀態。

與空白對照組相比，模型組大鼠血脂水平明顯提升，心電圖ST 段明顯改變，CTnI 升高，表明造模成功；經鹽酸青藤堿SGB 干預后增加SOD 的生成，減少MDA 及IL‐6 的釋放，同時心電圖改變也相應減輕、CTnI 減少，表明青藤堿SGB 干預通過抗氧化應激、減輕炎癥反應進而改善大鼠心肌缺血狀態，通過比較單獨使用利多卡因SGB 及使用中草藥制品青藤堿聯合利多卡因SGB，表明聯合效果更佳。

有臨床實踐證明青藤堿聯合利多卡因行SGB可以達到僅用麻醉劑達不到的效果，既可以阻滯交感神經節，抑制交感，而且可以消除心肌缺血所反映到星狀神經節的炎癥，雙重緩解心肌缺血，所以青藤堿SGB 可以改善氧化應激、炎癥及交感神經達到抗心肌缺血作用。本次實驗研究證明青藤堿聯合利多卡因SGB 在改善心肌缺血方面效果顯著，后續有望進一步深入研究其作用靶點，為臨床提供可靠的治療方法。然而本次實驗研究青藤堿+利多卡因組劑量高于其他各組，可能劑量差異導致結果的不準確性，且研究的大鼠數量較少，今后采用更大樣本的動物數量來證明實驗結果。

作者貢獻度說明：

王艷琴：選題與設計，資料的分析與解釋，撰寫并修改整個論文；鄭剛：選題與設計，修改論文中關鍵性理論；齊婧：參與課題的整個過程；徐佳萌、楊聰：修改論文中的其他主要內容。