miR-206在子癇前期患者胎盤組織中表達及與預后關系

張曉義 邱春霞 王尼萍

廣東省廣州市白云區婦幼保健院(510080)

子癇前期(PE)是妊娠期最嚴重的并發癥之一，若不及時控制病情可逐步進展至子癇威脅母兒生命安全[1-2]。積極規避此類事件發生、提升PE患者的分娩安全性是目前臨床關注及研究的重點。miR-206在骨骼肌中被首次發現，其在骨骼肌發育及相關疾病作用研究較為透徹，但近期研究顯示其在乳腺癌[3]、胃癌[4]等多種惡性腫瘤組織中也有異常表達。Chunzhi Sheng[5]研究結果顯示，PE患者血漿miR-206水平明顯升高，在PE的發生發展過程中可能扮演重要角色，但對PE產婦產后不良結局影響研究不多。本研究獲取PE患者的胎盤組織標本并測定miR-206表達量，為闡明PE患者不良預后的可能機制及靶向干預、優化分娩結局治療尋找理論支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年1月-2019年12月在本院產科就診并分娩的PE患者90例臨床資料為PE組。納入標準：①符合相關共識中PE的診斷標準[6]；②單胎、剖宮產；③既往無PE病史；④規律接受產檢且臨床資料完整。排除標準：①合并妊娠期糖尿病等其他妊娠合并癥；②年齡<20歲或>50歲；③合并甲亢、甲減、嚴重自身免疫性疾病、惡性腫瘤等可影響PE病情及正常孕產過程的疾病。同期在本院正常產前檢查并順產的健康孕婦100例為對照組。研究對象均獲得知情同意，本院倫理委員會批準此次研究計劃。

1.2 胎盤組織中miR-206測定

兩組產婦均留取分娩后胎盤標本組織，離體后立即剪取約30g胎盤組織，迅速放入4℃生理鹽水清洗血跡備用。使用Trizol試劑盒提取胎盤組織的細胞總RNA，使用逆轉錄試劑盒合成cDNA，以cDNA為模板參照熒光定量PCR試劑盒說明書、在ABI7500熒光定量PCR儀上進行基因擴增。miR-206上游引物序列為5’-ACUGACGUGATGCGAAGUCG-3’，下游引物序列為5’-GCUGAACGUUAGCGAUGAG-3’。以U6為內參，其上游引物序列為5’-AGCGGUUGCAGAUCGUGCG-3’，下游引物序列為5’-CGAAGUGCUAGAGCGAAGC-3’。PCR反應體系共20μl，包括模板cDNA 1μl、上下游引物各0.5μl、2×SYBRpremix Ex TaqTMⅡPCR 8μl、RNase-free water 10μl。反應條件如下：95℃ 10s→60℃ 30s→72℃ 30s，共計40個循環。采用2﹣△△CT法分析miR-206的相對表達情況。

1.3 PE患者預后評估

記錄PE患者產后不良結局，將產后大出血、心功能衰竭、肺水腫等歸于預后不良。收集PE組患者臨床資料，包括年齡、分娩孕周、分娩史、孕前體質指數(BMI)、孕期體重增長及分娩前24h肝功能、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肌酐(SCr)、尿酸(UA)、D-二聚體(DD)水平，胎盤組織miR-206表達水平。

1.4 統計學方法

使用SPSS 20.0數據分析。計數資料組間比較采用χ2檢驗；計量資料組間比較采用獨立樣本t檢驗。胎盤組織miR-206表達水平對PE患者預后不良的預測價值采用受試者工作特征(ROC)曲線。PE患者預后不良的影響因素采用logistics回歸分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般臨床資料

PE組年齡(37.5±6.5)歲(23～42歲)，分娩孕周(38.1±2.6)周(36～40)，產次(1.3±0.5)次(1～2次)。對照組年齡(37.8±6.9)歲(25～43歲)，分娩孕周(38.3±2.8)周(35～39周)，產次(1.3±0.6)次(1～2次)。兩組無差異(P>0.05)。

2.2 胎盤組織中miR-206表達水平

PE組胎盤組織中miR-206表達量(0.61±0.09)高于對照組(0.42±0.08)(t=15.406，P=0.000)。

2.3 PE患者不同miR-206表達水平與產后不良結局

根據miR-206表達水平的中位數進行分組，PE組miR-206高水平者產后不良結局總發生率高于低水平者(P<0.05)。見表1。

表1 PE組不同miR-206表達水平者不良結局比較[例(%)]

2.4 PE患者分娩預后的單因素分析

PE患者中，預后不良與預后良好者年齡，分娩前24h TG、SCr、UA水平，胎盤組織miR-206表達水平等均存在差異(P<0.05)；分娩孕周、分娩史、孕前BMI、孕期體重增長、肝功能、TC等無差異(P>0.05)。見表2。

表2 影響PE患者分娩預后的單因素分析

2.5 PE患者分娩預后的多因素分析

以PE患者分娩預后不良作為因變量(0=預后良好，1=預后不良)，單因素分析中有差異的指標如年齡，分娩前24h TG、SCr、UA水平，胎盤組織miR-206表達水平納入logistics回歸模型。分析結果顯示，年齡≥30歲，分娩前24h TG、SCr、UA水平較高，胎盤組織miR-206表達水平較高分別是PE患者分娩預后不良的獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

表3 影響PE患者分娩預后的多因素分析

3 討論

PE是嚴重的妊娠并發癥之一，病因復雜、分娩后不良結局發生率較高。miR-206被發現在骨骼肌相關疾病中扮演重要角色，如骨肉瘤中miR-206過表達可抑制癌細胞增殖并與患者良好的預后相關[7]。目前在其他惡性腫瘤中也發現miR-206的差異性表達，如在結腸癌中表達增加、通過激活CCL2促進腫瘤進展[8]，在肝癌中表達降低，對癌細胞的增殖抑制作用減弱[9]。miR-206與子癇前期的關系也有一定報道，如Schlosser[10]研究發現，循環miR-206和wnt信號通路與女性心血管并發癥和先兆子癇史有關；何大秀[11]指出miR-206在早發型子癇前期女性血清中表達水平顯著升高。但目前關于miR-206與PE患者產后預后不良的相關性研究很少，本文以此為切入點展開闡述。

本研究發現，PE患者胎盤組織中miR-206表達水平增高，與吳青清[12]在胎盤組織中測定miR-206表達量結果一致。進一步根據PE組患者胎盤組織中miR-206表達水平的中位數進行分組比較與不良預后差異發現，高miR-206孕婦產后不良結局總發生率高于低miR-206組，提示胎盤組織miR-206高表達與產婦分娩后不良結局有一定關系。

根據PE組分娩結局分組行單因素、多因素分析，年齡≥30歲，分娩前24h TG、SCr、UA水平較高，胎盤組織miR-206表達水平較高分別是PE患者分娩預后不良的獨立危險因素。進一步明確胎盤組織miR-206高表達可促使PE患者產后不良預后。但導致不良預后發生的具體途徑有待后續更多基礎及臨床研究明確。此外，年齡及TG、SCr、UA對PE患者分娩預后的影響已在既往不同研究中被證實，如楊彩梅等[13]的研究指出，年齡≥35歲為早發型PE的危險因素；董琳娜等[14]指出TG可有效預測孕婦發生子癇前期的風險；侯書寧等[15]研究發現，SCr等腎功能指標可用于子癇前期的預測，本文結果與上述研究結論基本吻合。

綜上所述， PE患者胎盤組織中miR-206表達量異常增高，且是產后預后不良的獨立危險因素?？赡転镻E的病因學、預后評估、治療方案探索等提供新的指標和思路。