子癇前期高危孕婦妊娠中期miR-101表達預測發病價值

萬紅霞 周 宇

四川省成都市雙流區第一人民醫院/四川大學華西空港醫院(610200)

子癇前期(PE)是妊娠高血壓疾病中比較嚴重的一類，除典型高血壓癥狀外還伴蛋白尿，若不積極干預隨妊娠孕周增加高血壓及腎臟損傷逐步加重，后續可影響其他臟器功能并直接威脅母兒生命安全[1-2]。目前對PE臨床高危因素的討論較多，認為合并孕前高血壓、肥胖、PE家族史等孕婦發生PE的風險較高[3-4]，但在臨床研究中發現PE高危孕婦發病情況仍存在較大差異，推測除上述臨床因素外還存在某些重要影響因素。微小RNA(miRNAs)與PE的出現密切相關。不少研究[5]指出miRNAs可能成為PE的新型診斷及靶向干預分子。毛雪寶[6]研究指出敲低miR-101表達可促進胎盤滋養細胞的凋亡，可能是控制PE發生發展的關鍵分子之一。目前關于miR-101在高危孕婦PE發病預測研究極少，本文以此為切入點展開討論，旨在為PE的預測及早期干預尋找指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月-2020年1月本院產前檢查有PE危險因素的孕婦198例。納入標準：①初次產檢時孕周<24周；②單胎；③合并≥1項子癇前期高危因素，如既往PE病史，子癇前期家族史，孕前或首次產檢體質指數(BMI)≥35kg/m2，首次產檢時舒張壓≥80mmHg，孕前慢性高血壓、糖尿病、腎臟疾病等病史，抗磷脂抗體陽性，年齡>40歲，距前次妊娠間隔時間≥10年；④采集血液樣本為妊娠中期(孕14～19+6周)；⑤入組時尚未確診子癇前期；⑥在本院規律接受產前檢查，孕婦本人簽署知情同意書。排除標準：①合并妊娠期糖尿病、妊娠期心臟病等其他妊娠合并癥；②合并嚴重認知異常、精神疾患等無法配合產檢；③多胎妊娠；④合并胎膜早破、前置胎盤等危險妊娠情況。參照PE診斷標準[7]，根據入組孕婦是否發展為PE分為PE組和非PE組。本研究經醫院倫理委員會審核批準。

1.2 外周血miR-101檢測

留取孕婦孕中期產前檢查時空腹外周靜脈血標本提取總RNA，將RNA反轉錄為cDNA，反應條件：37℃ 60min、95℃ 5min，cDNA溶液保存于-20℃。取10μl cDNA溶液加入100μl ddH2O。將U6作為miRNA定量內參。U6上游引物5’-GAATCGAACGCTGATGCCA-3’，下游引物5’-ATCGAGCCGTAGAGGCTA-3’；miR-101上游引物5’-CGATGAAGCTGAGCGTAGA-3’，下游引物5’-TGCGAAGCTGAAGCGTGAG-3’。熒光定量PCR反應條件：94℃預變性1min→90℃變性5s→60℃復性30s→72℃延伸60s，共計40個循環。2﹣△△Ct法計算miR-101的相對表達倍數。

1.3 臨床資料收集

收集所有孕婦臨床資料，包括年齡、分娩情況、采血周數、首次產檢血壓(收縮壓、舒張壓)、首次產前檢查時BMI、孕前基礎疾病(慢性高血壓、2型糖尿病、腎臟病變)、子癇前期/子癇病史、自然流產史。

1.4 統計學方法

數據計算使用軟件SPSS 18.0。計數資料比較采用χ2檢驗；計量資料比較采用獨立樣本t檢驗。miR-101對子癇前期發病的預測價值使用受試者工作特征(ROC)曲線，發病危險因素分析采用logistics回歸模型。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1外周血miR-101表達

PE組37例，孕中期外周血miR-101(0.65±0.19)高于非PE孕婦孕中期外周血miR-101(0.56±0.13)(P<0.05)。

2.2 孕中期外周血miR-101預測高危孕婦PE發生價值

ROC曲線顯示，孕中期外周血miR-101表達水平預測高危孕婦發生PE的最佳截斷值為0.605，AUC為0.841(95%CI 0.768～0.914)，靈敏度70.2%、特異度75.7%。

2.3 高危孕婦發生PE的單因素分析

PE組與非PE組孕婦的年齡、采血周數、孕期2型糖尿病及腎臟病變、子癇前期/子癇病史、自然流產史等無差異(P>0.05)；分娩史、首次產前檢查血壓及BMI、孕前慢性高血壓、孕中期miR-101水平等存在差異(P<0.05)。見表1。

表1 高危孕婦發生PE單因素分析

2.4 高危孕婦發生子癇前期多因素分析

將高危孕婦發生PE情況作為因變量(0=非子癇前期，1=子癇前期)，將單因素分析中具有差異的指標(分娩情況、首次產檢血壓、首次產檢BMI、孕前慢性高血壓、孕中期miR-101水平)納入logistics回歸模型。分析發現，初產婦、首次產檢收縮壓及舒張壓較高、首次產檢BMI較高，合并孕前慢性高血壓、孕中期外周血miR-101水平>0.605分別是高危孕婦發生PE的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 高危孕婦發生PE多因素分析

3 討論

miR-101已被發現在多種惡性腫瘤中呈異常表達，如在膀胱癌[8]、乳腺癌[9]中均發現其存在異常低表達，靶向上調其表達后可抑制腫瘤細胞的增殖侵襲等。而miR-101在PE患者胎盤組織中存在高表達，鄒艷芬等[10]指出miR-101可能通過調控內質網蛋白44調節子癇前期內質網應激誘導的滋養細胞凋亡；毛雪寶等[6]認為miR-101可能通過負性調控基質金屬蛋白酶-1參與子癇前期的發生發展過程。鑒于miR-101異常表達對子癇前期發生發展的影響，推測其可能在子癇前期發病早期預測方面也存在一定價值，但相關研究目前開展極少。

PE臨床高危因素對孕婦后續發病的預測價值仍存在較多爭議。本文PE孕婦孕中期外周血miR-101表達水平高于非PE孕婦，與既往基礎研究結論基本吻合，推測該時期外周血miR-101表達水平對PE的發生有預警價值。進一步經ROC曲線分析發現，孕中期外周血miR-101表達水平預測高危孕婦發生PE的靈敏度、特異度(70.2%、75.7%)較理想，提示血miR-101水平有一定預測價值，可能為臨床工作者疾病風險分層、治療方案制定等提供更多信息。

為進一步明確孕中期外周血miR-101表達水平對PE發病的影響，將包括該指標在內的其他臨床資料納入logistics回歸模型。發現孕中期外周血miR-101水平>0.605、初產婦、首次產檢收縮壓及舒張壓較高、首次產檢BMI較高，合并孕前慢性高血壓分別是高危孕婦發生PE的獨立危險因素。該結論說明孕中期外周血miR-101異常高表達可能促進了高危孕婦PE發病。林靜等[11]研究指出高齡初產婦發生胎膜早破、子癇前期/子癇、妊娠期糖尿病等不良妊娠結局的風險高于高齡經產婦。首次產前檢查血壓及BMI較高，合并孕前慢性高血壓已在既往較多研究中被認為是子癇前期發生的高危因素[12-14]。

綜上所述，PE高危孕婦孕中期外周血miR-101表達水平異常增高是PE發病的獨立危險因素，有早期PE發病預警價值。提示對臨床PE發生風險評估、治療方案制定等有一定指導意義。