不同品種綿羊超數排卵效果分析

張振良，郭延華，劉長彬，盧守亮，萬鵬程，劉昱成，倪建宏

（省部共建綿羊遺傳改良與健康養殖國家重點實驗室/新疆農墾科學院畜牧獸醫研究所，新疆 石河子 832000）

超數排卵（簡稱超排）是通過高劑量的促性腺激素刺激供體的卵巢一次排出多枚卵子，并使其受精；胚胎移植是將供體受精后的多個胚胎取出，移植到生理周期相同的受體子宮內，并使其發育成個體。超數排卵和胚胎移植技術是快速擴繁家畜的有效技術手段，在綿羊快速繁育中起到重要作用。

1 材料與方法

1.1 試驗時間及地點

試驗于2020年9—10月在新疆英吉沙縣領頭羊有限公司的基地進行。

1.2 供體母羊的選擇

分別選擇健康、膘情適中、體型相同、繁殖機能正常的三個品種經產羊：薩?？搜?7只，其中首次超排的11只，重復超排的36只；白杜泊羊16只（首次超排）；黑杜泊7只（首次超排）。試驗開始前一周，在正常管理的前提下給參試羊增加一些能量飼料和干苜蓿草。

1.3 試驗材料

藥品：孕酮陰道栓（CIDR，澳大利亞生產）；促卵泡素（FSH，500單位·瓶-1，寧波第二激素廠）；前列腺素（PG，0.2mg·支-1，上海計勝生物科技有限公司）；注射用促黃體素釋放激素（A3，25μg·支-1，寧波三生生物科技有限公司）；沖胚液（PBS，1000mL·袋-1，新西蘭生產）；胚胎保存液（Holding，100mL·袋-1，新西蘭生產）；生理鹽水；新潔爾滅；5%碘酒；75%酒精；靜松靈；青霉素。

器械：放栓槍；5mL注射器；10mL注射器；羊用保定架；手術刀；剪毛剪；體視顯微鏡；沖胚管；10cm培養皿；四孔培養皿；縫合針；縫合線；紗布；創凈布。

1.4 供體超排處理方法

任意一天在供體母羊陰道內放置CIDR，其后第10d下午開始按照6針劑量依次遞減的方法注射FSH，第13d早上注射最后一針FSH；第12d下午取出供體羊陰道內的CIDR，同時注射1mL PG，第13天早上再注射1mL PG，撤栓后24h試情，發情羊進行第一次配種，并注射12.5μg A3。間隔10—12h后進行第2次配種，重復2～3次。

1.5 胚胎的收集

供體母羊發情配種后的第7d開始手術沖胚，供體母羊術前空腹24h。首先將母羊放在保定架上保定好，刮去腹部手術部位腹毛，并用5%碘酒消毒，75%酒精脫碘，肌肉注射0.2mg靜松靈；待供體羊進入麻醉狀態后，用手術刀在其乳房前側順著頭的方向逐層切開皮膚、脂肪層、肌肉層和腹膜，切口長度5～6cm，注意避開血管；取出子宮和卵巢，觀察卵巢的排卵情況，并記錄左右兩側卵巢上的黃體數；對重復超排供體羊的卵巢和子宮粘連情況進行觀察并記錄；然后用器械在子宮體扎一小洞，放入沖胚管；用子宮鉗夾住一側子宮體，在子宮角處插入接胚管，管外端接培養皿；用注射器通過沖胚管將沖胚液注入子宮進行沖胚，過程中保證沖胚液均勻緩慢的流過子宮，用接胚管外端的培養皿接沖胚液完成沖胚；沖胚完成后在顯微鏡下觀察培養皿，找到收集到的胚胎，并按照形態特征將其分為A、B、C三個等級和未受精的卵子。

1.6 供體羊的術后處理

供體羊沖胚結束后，用37℃生理鹽水沖洗其子宮體、卵巢和輸卵管上的血跡，并用紗布擦拭干凈，將再次噴灑生理鹽水后的子宮緩慢放入供體羊腹腔內，并向腹腔內灌注300～500mL的37℃生理鹽水。術后縫合時，先用可吸收縫合線縫合腹膜和肌肉層，縫合中應注意不要將內臟與肌肉縫合在一起；縫合好肌肉層后，再縫合皮膚層，縫合皮膚層時要將皮膚層與肌肉層一起縫合，同樣注意不要與內臟縫合在一起，皮膚層縫合3～4針即可，保證傷口平整對齊，有利于傷口愈合。用碘酒對縫合后傷口消毒，給供體羊肌肉注射160萬單位青霉素后，將其從保定架上緩慢放下。術后48h內持續關注母羊恢復情況。

1.7 統計分析

試驗所得數據用Excel整理后，再用SPSS 21.0進行方差分析，結果以“平均數±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 不同品種羊超排效果

如表1所列可知，白杜泊的平均回收胚胎數為

表1 不同品種羊超排效果比較Table 1 Comparison of superovulation effects of different breeds of sheep

11.16枚，高于薩?？说?.45枚和黑杜泊的7.29枚；白杜泊的胚胎回收率最高，為85.56%，薩?？藶?7.91%，黑杜泊最低為66.29%；各品種的A級胚數，薩?？俗畹?，為5.00枚、黑杜泊為6.29枚，白杜泊最高，為7.56枚；薩?？撕桶锥挪吹腂級胚數相差不大，分別為1.55枚和1.56枚，黑杜泊僅為0.57枚；未受精卵數分別為0.64、1.94和0.14枚；胚胎移植中，可用胚是指A級胚和B級胚，C級及以下的胚胎為不可用胚，薩?？撕桶锥挪吹目捎门呗瘦^接近，分別是84.55%和83.88%，黑杜泊最高，為92.87%；薩?？?、白杜泊和黑杜泊卵巢上的平均黃體數分別為10.27、13.13和11.14個，三個品種間以上各指標雖有差異，但差異均不顯著（P＞0.05）。

2.2 重復超排對薩?？搜蚺怕研Ч挠绊?/h3>

如表2所列可知，對薩?？诉M行4次重復超排后，第二次超排回收胚胎數高于其他三次，第一、二和三次超排間差異不顯著（P＞0.05），但第一、二次超排顯著高于第四次超排（P＜0.05）。第二次超排獲得A級胚數顯著多于第四次超排（P＜0.05），其余各次間差異均不顯著（P＞0.05）；4次超排獲得的B級胚數和未受精胚數間差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 薩?？搜蛑貜统判Ч容^Table 2 Comparison of the effect of repeated superovulation of black-headed Suffolk sheep

3 討論

3.1 不同品種羊超排效果和胚胎質量的分析

隨著胚胎移植技術不斷改進和完善，目前該技術已廣泛運用到家畜的品種改良和快速擴繁中。胚胎移植技術中的超排是一個復雜的過程，其效果受到品種、激素、個體營養狀況、飼養管理、超排方案、環境、季節等諸多因素的影響。趙霞[3]研究德國美利奴羊和無角陶賽特羊的超排效果，發現兩個品種間的排卵數和可用胚數差異均不顯著（P＞0.05）；唐大為等[4]對無角陶塞特、特克塞爾和薩?？诉M行超排對比，結果顯示三個品種間平均黃體數、平均回收胚胎數和平均可用胚胎數差異均不顯著。本研究針對三個品種的羊進行超排試驗，結果顯示三個品種間的回收胚胎數、A級胚數、B級胚數和未受精胚數差異均不顯著（P＞0.05），這與前人研究結果相似。易金云等[5]對薩?？撕投挪催M行超排試驗，兩個品種的羊沖胚數都在10枚以上，且兩者間差異不顯著（P＞0.05），本研究中薩?？撕秃诙挪吹臎_胚數在7枚左右，但黃體數大于10枚，可能是沖胚人員經驗不足，導致胚胎沒有全部沖出。徐鵬舉等[6]對薩?？搜蜻M行超排，其平均回收胚胎數7.96枚，平均可用胚胎數6.56枚，與本研究結果相似。

本研究中，不同品種羊的黃體數與可用胚數薩?？藶?0.27個和6.55枚，白杜泊為13.13個和9.13枚，黑杜泊為11.14個和6.68枚，這與張秀陶等[7]同一時間不同品種綿羊的超排試驗，得到的黃體數和可用胚數白頭薩?？搜?0.8個和7.5枚，東弗里生羊10.8個和3.6枚，陶賽特羊9.2個和4.3枚及特克塞爾羊8.8個和3.5枚的試驗結果相似。張璐等[8]對5個不同品種的綿羊進行超排，結果顯示羊的平均黃體數6～16個不等，平均可用胚數3～7枚不等，由此可看出不同品種羊的超排效果間存在一定差異，可能是由于不同品種的羊對激素的用量存在不同的耐受性。不同的季節對超排也有很大的影響。茍想珍等[9]在春秋兩季對薩?？诉M行超排試驗，發現秋季羊的平均回收胚胎數和平均可用胚胎數顯著高于春季（P＜0.05），本研究在秋季進行，其春季超排情況有待進一步研究，但綿羊作為季節性發情動物，秋季超排效果應該相對較好。

3.2 重復超排對排卵效果的影響

重復超排的目的是充分挖掘良種母畜的遺傳潛力，發揮其最大價值，由此給養殖戶和社會帶來更多經濟效益。本研究中，對薩?？搜蛑貜统?次后，其第一、二次回收胚胎數顯著高于第四次（P＜0.05），第二次超排獲得的A級胚數顯著高于第四次（P＜0.05），這說明對薩?？搜蜻M行四次超排，會顯著影響獲得的胚胎數和胚胎質量。張果平等[10]對杜泊羊重復超排處理，第三次回收的胚胎數顯著低于第一、二次（P＜0.05），與本研究結果稍有不同，可能是由于品種不同造成的差別；王峰等[11]對陶賽特羊重復超排，第二次超排獲得可用胚數最多，然后依次減少，整體趨勢與本研究結果一致；柴孟龍等[12]對薩?？搜騼纱沃貜统?，兩次超排間差異不顯著（P＞0.05），這與本研究中的前兩次超排結果一致。陳童等[13]對細毛羊兩次重復超排，兩次超排后卵泡發育數大幅減少，與初次超排相比差異極顯著（P＜0.01），但可用胚胎數沒有明顯減少（P＞0.05）。由此可見，重復超排受品種、激素劑量、體況、生殖器官狀態和季節等因素影響。

朱芳賢等[14]認為重復超排應在手術時防止出血及術后嚴格管理來防止子宮粘連。在實際生產中，手術減少出血是必要的，同時還可通過延長兩次沖胚的間隔時間或兩次沖胚間讓母羊自然生產一次及在術后受體腹腔內灌注生理鹽水的措施來防止子宮粘連。同時還需在生產實踐中進一步驗證以獲得更好的方法。

4 結論

通過對薩?？?、白杜泊和黑杜泊這三個品種的羊進行超排試驗，三者間的回收胚胎數、A級胚數、B級胚數、黃體數和可用胚胎數差異均不顯著（P＞0.05），說明同一超排方案對三個不同品種的羊影響不大；對薩?？诉M行4次重復超排，隨超排次數的增加，子宮粘連愈發嚴重，特別是輸卵管傘粘連后無法包裹卵巢，卵子無法進入輸卵管，導致胚胎回收率低。