穩心顆粒對心律失常大鼠凋亡、炎癥及氧化應激的影響

錢舒樂，于 露，李曉鳳，王潤英，宋博涵，趙玉珂，郭海珍，杜武勛*

1.天津中醫藥大學，天津 301617

2.天津中醫藥大學第二附屬醫院，天津 300150

心律失常是指心臟沖動的頻率、節律、起源部位、傳導速度或激動次序的異常[1]。研究表明，88%的心源性猝死是由心律失常引起的，心律失常會導致心臟和其他器官疾病嚴重并發癥的發生[2]。心肌梗死缺血再灌注后，室早、室速、室顫及房顫的發生率高達80%[3]，是增加心梗后手術難度及影響患者預后的主要因素，也是心肌缺血再灌注損傷最主要、最嚴重的表現，可占心血管死亡事件的50%左右[4]。心律失常還是心衰常見并發癥之一，為心衰患者死亡的重要原因。由此可知，心律失常不僅是獨立的心血管事件，還會伴隨許多基礎心臟疾病出現并嚴重影響預后，心律失常的防治對于心血管疾病的預后意義重大。

以穩心顆粒為代表的中藥復方在抗心律失常方面療效顯著，且安全性高，臨床未見致心律失常等不良反應的報道[5-8]。許多研究表明，穩心顆粒單獨或聯合化學藥用于心律失常，均有良好的療效[9-11]。炎癥和氧化應激反應是心力衰竭、心律失常、心肌梗死等多種心血管系統疾病發生及病情進展的病理基礎，減輕炎癥、抑制氧化應激可減少心肌細胞凋亡，緩解心肌損傷，改善心律失常癥狀[12]。本研究旨在通過構建心律失常大鼠模型，探討穩心顆粒對其凋亡、炎癥及氧化應激的影響，為其抗心律失常的機制研究開辟新的思路，也為穩心顆粒的臨床運用夯實理論基礎。

1 材料

1.1 動物

SPF 級雄性SD 大鼠60 只，體質量180～220 g，購自斯貝福（北京）生物技術有限公司，許可證號SCXK（京）2019-0010。所有實驗大鼠均飼養于環境溫度為（23±2）℃，相對濕度為（35±5）%的中國醫學科學院放射醫學研究所實驗動物中心SPF級動物實驗室，光照12 h 明暗交替，自由飲水、普通飲食，適應性喂養1 周后進行實驗。動物實驗經中國醫學科學院放射醫學研究所實驗動物倫理委員會批準（批準號IRM-DWLL-2023190）。

1.2 藥品與試劑

穩心顆粒（無糖型，5 g/袋，國藥準字Z10950026，批號2205019）購自山東步長制藥股份有限公司；鹽酸胺碘酮片（可達龍，0.2 g/片，國藥準字HJ20181050，批號EA2413）購自賽諾菲（杭州）制藥有限公司；烏頭堿（批號110799-201608）購自寶雞市辰光生物科技有限公司；烏拉坦（批號Z11M12Y141466）購自上海源葉生物科技有限公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malonaldehyde，MDA）、還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）、白細胞介素-18（interleukin-18，IL-18）、IL-1β、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）試劑盒（批號均為20231010-20240409）購自天津天景澄生物科技有限公司；NOD 樣受體熱蛋白結構域相關蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）抗體（批號8798121）購自美國Affinity Bioscience 公司；蘭尼堿受體2（ryanodine receptor 2，RYR2）抗體（批號1016750-2）、Toll 樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）抗體（批號1009562-8）、B 淋巴細胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）抗體（批號1003067-1）、Bcl-2 相關X 蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）抗體（批號1002634-1）均購自英國Abcam 公司；蘇木素（批號H9627）購自美國Sigma 公司；伊紅水溶液（批號71014544）購自國藥集團；Masson 染色試劑盒（批號BA4079）購自珠海貝索生物技術有限公司；細胞凋亡檢測試劑盒（批號037E2220IA）購自南京諾唯贊生物科技股份有限公司；RIPA 裂解液購自武漢賽維爾生物科技有限公司；BCA 蛋白濃度測定試劑盒購自廣州捷倍斯生物科技有限公司；β-actin 抗體（批號F180047）購自Abways Technology 公司；HRP 標記的羊抗兔二抗（批號SA00001-2）、HRP 標記的羊抗小鼠二抗（批號SA00001-1）購自武漢三鷹生物技術有限公司。

1.3 儀器

RM6240 型多道生理信號采集處理系統（上海玉研科學儀器有限公司）；DS-Fi3 型生物顯微鏡（上海尼康精機有限公司）；DYCZ-40 型電轉儀（北京六一儀器廠）；MQX200 型酶標儀（美國Bio Tek 公司）。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

60 只SD 大鼠適應性飼養1 周后，隨機分為對照組、模型組及穩心顆粒低、中、高劑量（1.34、2.68、5.36 g/kg，分別相當于臨床等效劑量的1、2、4 倍）組和胺碘酮（35.7 mg/kg）組，每組10 只。穩心顆粒溶于純凈水中，以超聲振蕩器制備成質量濃度分別為0.134、0.268、0.536 g/mL 的藥液。鹽酸胺碘酮片用研缽搗成粉末狀，并用電子天平稱取藥粉溶于純凈水中，以超聲振蕩器制成質量濃度為3.57 mg/mL 的藥液。各給藥組ig 相應藥物（10 mL/kg），對照組和模型組ig 等體積純水，1 次/d，連續21 d。

末次給藥1 h 后，稱定大鼠質量，ip 20%烏拉坦（5 mL/kg）麻醉，采用多道生理信號采集處理系統觀察并采集標準II 導聯心電圖數據。記錄正常心電圖20 min 后，基線調零。待心電圖平穩后，用1 mL 注射器抽取0.002%的烏頭堿溶液（2 mL/kg），根據文獻及預實驗研究[13]，尾iv 烏頭堿（40 μg/kg）構建心律失常模型，當大鼠心電圖出現室性期前收縮、室性心動過速等波形，即視為造模成功，記錄心律失常出現及恢復的時間，心律恢復正常后再記錄20 min 心電圖。若造模期間出現大鼠死亡，則停止記錄。對照組大鼠尾iv 生理鹽水（2 mL/kg）。

2.2 心電圖觀察及記錄

采用多道生理信號采集處理系統連續記錄尾iv烏頭堿前后的大鼠心電圖，觀察室性期前收縮（premature ventricular contraction，PVC）、室性心動過速（ventricular tachycardia，VT）、心室撲動（ventricular flutter，VFl）及心室顫動（ventricular fibrillation，VF）等異常心電發生情況。觀察并記錄大鼠心律失常的發生及持續時間，當心電表現恢復正常時，再記錄20 min 心電圖，若無異常則視為成功復律；最長觀測2 h 心電圖變化，若仍為異常心電表現，則視為未能復律；同時根據心電表現進行心律失常評分。評分以Lambeth 會議標準為參考，具體如下：0 分，無心律失?；蛏儆? 次室早；1 分，不少于5 次室早；2 分，室速持續時間少于60 s；3分，室速持續時間少于60 s 或多陣室速累計時間少于60 s；4 分，多陣室速且總持續時間不少于60 s或偶發室顫；5 分，持續性室顫或死亡[12,14-15]。

2.3 大鼠心肌組織病理觀察

大鼠脫頸處死后，開胸取出心臟，以生理鹽水沖洗干凈，取適量心肌組織于4%多聚甲醛溶液中固定24 h，以梯度乙醇對組織進行脫水處理，常規進行組織透明、浸蠟、包埋、切片和烤片、脫蠟等步驟后，進行蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色觀察心肌組織的形態結構變化，Masson 染色以觀察心肌組織的纖維化改變。

2.4 大鼠血清中氧化應激和炎癥因子相關指標的檢測

大鼠于麻醉狀態下行腹主動脈采血，3 000 r/min離心15 min，取血清，按照試劑盒說明書檢測SOD活性及MDA、GSH、IL-18、IL-1β、TNF-α 水平。

2.5 大鼠心肌細胞凋亡情況的檢測

取各組大鼠心肌組織，固定、包埋及切片后，按照試劑盒說明書進行TUNEL、DPAI 雙染色，于熒光顯微鏡下觀察細胞凋亡情況，組織切片上凋亡的細胞呈紅色熒光，細胞核呈藍色熒光。

細胞凋亡率＝凋亡細胞數/總細胞數

2.6 心肌組織RYR2、NLRP3、TLR4、Bcl-2 和Bax蛋白表達的檢測

取各組大鼠心肌組織置于RIPA 裂解液中研磨，直至看不見明顯塊狀，12 000 r/min 離心5 min，將上清轉移到新的離心管中，采用BCA 試劑盒測定蛋白濃度，加入蛋白上樣緩沖液進行沸水浴使蛋白變性。蛋白樣品經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉至PVDF 膜，加入一抗，4 ℃孵育過夜，TBST 洗滌5 次，5 min/次；加入二抗，室溫搖床孵育2 h，TBST 洗滌5 次，顯色曝光并拍照，用ipp軟件分析膠片灰度值。

2.7 統計學分析

用SPSS 25.0 軟件對數據進行統計分析，對組間各樣本量參數進行正態性檢驗，若符合正態分布，則數據以±s進行描述統計，采用Lev-enes Test 判斷方差齊性，若符合方差齊性則采用單因素方差分析（ANOVA）進行多組間比較，事后比較采用LSD檢驗；若方差不齊時，采用Tamhane’sT2法進行兩兩比較。若不符合正態分布，則數據用中位數和四分位數［M（P25，P75）］進行描述統計，組間比較采用獨立樣本Kruskal-Wallis 檢驗。

3 結果

3.1 穩心顆粒對心律失常大鼠心電圖的影響

3.1.1 各組大鼠心律失常出現及持續時間 對照組大鼠在監測過程中未發現明顯心電異常表現，模型組大鼠在尾iv 烏頭堿后，心電圖可見明顯的PVC、VT 等心律失常表現，提示心律失常大鼠模型復制成功。各給藥組大鼠在尾iv 烏頭堿后亦出現PVC、VT 等心律失常表現，其中胺碘酮組和穩心顆粒中、高劑量組均能有效縮短大鼠心律失常持續時間（P＜0.05、0.01，表1）；各組大鼠在尾iv 烏頭堿后，心律失常開始出現的時間差別無統計學意義。

表1 各組大鼠心律失常出現及持續時間Table 1 Occurrence and duration of arrhythmia of rats in each group

3.1.2 各組大鼠心律失常評分 如圖1 所示，與對照組比較，模型組大鼠出現持續性室速、室顫等異常心電情況明顯增多，心律失常評分大幅增加（P＜0.01），進一步提示模型復制成功；與模型組比較，胺碘酮組和穩心顆粒中、高劑量組大鼠心律失常評分明顯降低（P＜0.05、0.01），穩心顆粒低劑量組心律失常評分無顯著變化，提示穩心顆粒具有明確的抗心律失常作用，且其作用呈現一定的劑量相關性。

圖1 各組大鼠心律失常評分 (±s, n = 10)Fig.1 Arrhythmia score of rats in each group(±s, n = 10)

3.1.3 典型心電圖表現 各組大鼠在尾iv 烏頭堿之前，心電圖均無明顯異常；在尾iv 烏頭堿后，均不同程度出現各種類型的心律失常，圖2 所示的心電表現各組均有出現，其中最常見的是各類室性期前收縮，包括單發室早、多源性室早、二聯律等；其次為室性心動過速，包括短陣室速和持續性室速；此外，室撲與室顫也有出現，大部分出現持續性室染色均勻，未見明顯心肌細胞壞死及炎癥細胞浸潤。模型組心肌組織結構破壞，心肌細胞層次及輪廓模糊，心肌纖維排列紊亂伴腫脹和斷裂，可見較多炎癥細胞浸潤及散在小灶性及條索狀變性、壞死。胺碘酮和穩心顆粒中、高劑量干預后，可減輕炎癥細胞浸潤，染色結果顯示心肌組織形態結構較為完整，但穩心顆粒低劑量組心肌組織形態結構欠佳，心肌纖維排列紊亂伴斷裂，可見散在炎癥細胞浸潤。

圖2 各種類型心電表現Fig.2 Various types of ECG manifestations

圖3 各組大鼠心肌組織HE 染色 (×200)Fig.3 HE staining of myocardial tissue in each group of rats (× 200)

Masson 染色結果如圖4 所示，對照組心肌組織顫的大鼠最后均死亡（模型組死亡3 只，胺碘酮組和穩心顆粒中、高劑量組各死亡1 只）。

圖4 各組大鼠心肌組織Masson 染色 (×200)Fig.4 Masson staining of myocardial tissue in each group of rats (× 200)

3.2 穩心顆粒對心律失常大鼠心肌組織病理形態學的影響

HE 染色結果如圖3 所示，采用高倍光鏡觀察各組大鼠心肌組織HE 染色后所示的病理情況，細胞核呈藍色，細胞質、肌纖維呈紅色。其中，對照組心肌組織形態結構完整，心肌細胞排列緊密、層次清晰，胞核與胞質邊緣分明，心肌細胞胞質、核染色均勻，心肌肌束排列均勻。模型組心肌組織著色較淺而不均，心肌組織排列紊亂，心肌肌束可見一定程度的增寬，細胞間質可見較多的藍色膠原纖維沉積。各給藥組心肌組織形態結構均有不同程度的改善，膠原纖維沉積有一定減少，其中以胺碘酮組和穩心顆粒高劑量組效果最為明顯。

3.3 穩心顆粒對心律失常大鼠離子通道蛋白RYR2 表達的影響

如圖5 所示，與對照組比較，模型組大鼠心肌組織RYR2 蛋白表達水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組RYR2 蛋白表達水平均顯著降低（P＜0.01），其中胺碘酮組和穩心顆粒高劑量組RYR2 蛋白表達水平更趨向于對照組。根據大鼠心電和離子通道蛋白RYR2 的表達改變，并結合心肌組織病理情況，提示心律失常模型復制成功，且藥物干預確有療效。

圖5 各組大鼠心肌組織RYR2 蛋白表達 (±s, n = 6)Fig.5 RYR2 protein expression in myocardial tissue of rats in each group (±s, n = 6)

3.4 穩心顆粒對心律失常大鼠氧化應激水平的影響

如表2 所示，與對照組比較，模型組大鼠血清中SOD 活性顯著降低（P＜0.01），MDA 水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，胺碘酮組和穩心顆粒高劑量組大鼠血清中SOD 活性明顯升高（P＜0.01），MDA 水平顯著降低（P＜0.05）；穩心顆粒中劑量組有升高SOD、降低MDA 含量的趨勢，但無統計學意義。血清中GSH 水平結果顯示，模型組較對照組減少，且經過胺碘酮或穩心顆粒干預后有升高趨勢，但各組間含量變化無統計學差異。

表2 各組大鼠血清中SOD 活性及MDA、GSH 水平 (±s, n = 10)Table 2 SOD activity and MDA, GSH levels in serum of rats in each group (±s, n = 10)

表2 各組大鼠血清中SOD 活性及MDA、GSH 水平 (±s, n = 10)Table 2 SOD activity and MDA, GSH levels in serum of rats in each group (±s, n = 10)

與對照組比較：**P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01，表3 同。**P < 0.01 vs control group; #P < 0.05 ##P < 0.01 vs model group, same as below Table 3.

組別 劑量/(g·kg?1) SOD/(ng·mL?1) MDA/(nmol·L?1) GSH/(ng·L?1)對照 — 132.85±10.46 2.16±0.38 317.57±22.89模型 — 116.70±8.43** 2.65±0.38** 296.57±60.92穩心顆粒 1.34 119.29±12.10 2.68±0.26 302.85±29.77 2.68 123.98±5.83 2.55±0.28 305.85±24.38 5.36 129.95±7.57## 2.27±0.29# 310.22±26.28胺碘酮 0.035 7 128.57±7.88## 2.31±0.23# 306.95±20.18

3.5 穩心顆粒對心律失常大鼠血清炎癥因子水平的影響

如表3 所示，與對照組比較，模型組大鼠血清中IL-18、IL-1β、TNF-α 水平明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，胺碘酮組和穩心顆粒高劑量組大鼠血清中IL-18、IL-1β、TNF-α 水平均明顯降低（P＜0.05、0.01）；穩心顆粒低、中劑量組有一定的降低血清中IL-18、IL-1β、TNF-α 水平的趨勢，但其含量變化無統計學意義。

表3 各組大鼠血清中炎性因子水平 (±s, n = 10)Table 3 Levels of inflammatory factors in serum of rats in each group (±s, n = 10)

表3 各組大鼠血清中炎性因子水平 (±s, n = 10)Table 3 Levels of inflammatory factors in serum of rats in each group (±s, n = 10)

組別 劑量/(g·kg?1) IL-18/(ng·L?1) IL-1β/(ng·L?1) TNF-α/(ng·L?1)對照 — 88.42±5.03 52.15±3.02 152.63±13.28模型 — 100.96±6.48** 59.95±3.85** 206.20±10.10**穩心顆粒 1.34 96.29±9.33 56.17±3.30 198.18±19.24 2.68 94.93±3.94 56.22±3.48 189.25±28.26 5.36 94.02±5.64# 54.00±3.81## 173.02±19.97#胺碘酮 0.035 7 93.35±7.94# 52.79±5.98## 173.54±31.04#

3.6 穩心顆粒對心律失常大鼠心肌組織NLRP3、TLR4 蛋白表達的影響

如圖6 所示，與對照組比較，模型組大鼠心肌組織NLRP3、TLR4 蛋白表達水平均顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，胺碘酮組和穩心顆粒中、高劑量組大鼠心肌組織NLRP3、TLR4 蛋白表達水平明顯降低（P＜0.01），穩心顆粒低劑量組TLR4 蛋白表達水平明顯降低（P＜0.05）。

3.7 穩心顆粒對心律失常大鼠心肌細胞凋亡的影響

如圖7 所示，與對照組比較，模型組大鼠心肌細胞凋亡率顯著升高（P＜0.01）；經過藥物干預后，大鼠心肌細胞凋亡率均有不同程度的降低，且穩心顆粒各組表現出劑量相關性療效，其中胺碘酮組、穩心顆粒高劑量組與模型組之間的差異有統計學意義（P＜0.05、0.01）。

圖7 各組大鼠心肌組織TUNEL 染色 (±s, n = 6)Fig.7 TUNEL staining of myocardial tissue of rats in each group (±s, n = 6)

如圖8 所示，與對照組比較，模型組大鼠心肌組織Bax 蛋白表達水平顯著升高（P＜0.01），Bcl-2蛋白表達水平顯著降低（P＜0.01），Bax/Bcl-2 值顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，胺碘酮組和穩心顆粒中、高劑量組大鼠心肌組織Bax 蛋白表達水平顯著降低（P＜0.01），Bcl-2 蛋白表達水平顯著升高（P＜0.01），各給藥組大鼠心肌組織Bax/Bcl-2 值顯著降低（P＜0.01）。表明穩心顆?？梢种菩穆墒С４笫笮募〖毎蛲?，與TUNEL 染色結果一致。

圖8 各組大鼠心肌組織Bax、Bcl-2 蛋白表達 (±s, n = 6)Fig.8 Bax and Bcl-2 protein expressions in myocardium of rats in each group (±s, n = 6)

4 討論

4.1 穩心顆粒防治心律失常效果顯著

穩心顆粒收載于《中國藥典》2020 年版、《國家基本藥物目錄》《國家基本醫療保險、工傷保險和生育保險藥品目錄》，傳承了炙甘草湯補益氣陰、陰陽兼顧的組方原則，由現代醫學及藥理學等技術與臨床經驗方相結合研制而成。其由黨參、黃精、三七、琥珀、甘松5 味中藥組成，黨參、黃精性甘平，補脾氣而潤心肺，相佐以益氣生血；三七、琥珀活血化瘀而安神定痛；再以甘松之甘溫，開郁散滯，氣血得以兼行。全方君臣佐使相得益彰，益氣活血、補而不滯，共奏益氣養陰、定悸復脈、活血化瘀之功，氣血暢行而心悸自止。

穩心顆?？梢栽黾庸跔顒用}血流量，減少心肌耗氧量，增強心肌順應性，改善心肌耐缺氧能力，減輕心臟前后負荷，減少心律失常的發生[16]。尤其是在防治心律失常方面，穩心顆粒發揮著重要作用。研究表明，穩心顆?？梢詼p少心室顫動的發生率和室性心動過速發作的次數，改善心律失常的嚴重程度[17]。在離體豚鼠心臟模型中，奎尼丁快速灌注可改變心率并延長Q-T 間期，而穩心顆粒預處理可顯著縮短QRS 和Q-T 間期以改善心電表現[18-19]。此外，穩心顆粒還通過降低炎癥因子及下調炎癥相關基因的表達而表現出抗炎特性[20]。如黨參多糖可有效抑制巨噬細胞中絲裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MAPK）和核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）炎癥信號通路的激活，并可顯著下調炎性細胞因子TNF-α 和IL-1β 的分泌[21]；黨參弱極性部分中三萜及甾醇類化合物在抗炎中起到重要作用[22]；人參皂苷Rg1通過抑制過氧化體增殖物激活型受體γ（peroxisome proliferatoractivated receptor γ，PPARγ）介導的炎癥反應來改善大鼠心肌缺血再灌注后心律失常[23]；人參皂苷Rg1及三七總皂苷能抑制多種炎癥因子的分泌，減輕心肌缺血再灌注損傷[24]；三七皂苷R1有助于減輕氧化應激反應，降低缺血/再灌注損傷引起的心律失常[25]；三七多糖可以降低炎癥因子水平[26]；黃精多糖可通過調控RAW264.7 細胞TNF-α/IL-6/誘導型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）信號通路的表達，發揮免疫調節作用[27]。本研究結果顯示，穩心顆?？梢杂行Эs短大鼠心律失常持續時間、降低心律失常評分，顯著改善心電圖表現，具有明確的抗心律失常作用，基于現有研究所顯示穩心顆粒的抗炎特性，從凋亡、炎癥及氧化應激的角度探索其抗心律失常機制，對于穩心顆粒的臨床運用及心律失常的防治均具有重要意義。

4.2 抑制凋亡、炎癥及氧化應激可能是穩心顆?？剐穆墒С５闹匾獧C制

胺碘酮抗心律失常譜廣，臨床運用廣泛，且許多研究顯示其在抑制凋亡[28-29]、抗氧化應激[28,30-31]及減輕機體炎癥反應[30,32]方面具有一定的作用，故以此作為本研究的陽性對照藥。

氧化應激是指當身體在代謝過程中產生的氧化物，包括ROS 和活性氮（reactive nitrogen species，RNS）超過身體細胞的內源或外源抗氧化物的結果。炎癥和氧化應激是互相影響的，且越來越多的研究表明炎癥和氧化應激與心血管疾病是因果關系[33-34]。MDA 是脂質過氧化產物，常用來反映脂質過氧化水平，是氧化應激的標志物。SOD 是一種重要的抗氧化酶，能使氧自由基產生歧化反應，生成氧分子和過氧化氫分子。本研究結果顯示，穩心顆粒干預后能有效升高SOD 活性、降低MDA 含量，提示其具有一定的抗氧化應激作用。SOD 減少將導致氧化應激升高，使線粒體中ROS 生成和抗氧化能力失衡，最終導致線粒體氧化損傷。當線粒體功能受損后，線粒體中ROS 水平會增加，對細胞凋亡的敏感性也會增強，從而導致炎癥出現及凋亡異常，同時NLRP3 炎癥小體也會由此而被激活。NLRP3 炎癥小體是目前研究最充分的炎癥小體之一，并已被證明可以促進促炎細胞因子的產生。本研究中，與模型組比較，穩心顆粒中、高劑量組能顯著降低心肌組織NLRP3 蛋白表達水平，說明穩心顆?？梢杂行Ы档脱趸瘧に?、減輕炎癥反應。當NLRP3 炎性小體啟動后，又會促使致炎癥細胞因子IL-1β 和IL-18 的大量分泌。IL-1β 在介導免疫反應以及刺激巨噬細胞增加炎癥細胞因子的表達方面發揮作用；IL-18 能調節炎癥級聯反應；TNF-α 可誘導炎癥和各種細胞因子的釋放。本研究中，胺碘酮組和穩心顆粒高劑量組均能有效降低血清中IL-18、IL-1β 和TNF-α 水平，與Western blotting 結果所示的NLRP3表達降低相印證。TLR4 是TLR 家族的成員，該家族在病原體識別和先天免疫激活中起著基本作用，同時TLR4 的激活也會進一步促進NLRP3 的表達。研究表明，TLR4 可與髓樣分化蛋白88 結合，激活胞內轉導通路，促進NF-κB、JNK 等多種轉導通路表達參與細胞凋亡、炎性反應等生理過程[35]。本研究結果顯示，穩心顆粒各劑量組均可不同程度地降低TLR4 表達水平，在炎癥及凋亡的上游水平發揮了其抑制作用。

凋亡又稱為程序性細胞死亡，在此過程中機體能清除衰老及異常細胞，并在維持很多細胞功能方面有重要作用，但是因各種原因導致的凋亡異常則會導致細胞大量死亡并可能引發炎癥級聯反應。促凋亡和抑制凋亡2 類最典型的蛋白分別是Bax 和Bcl-2，Bax/Bcl-2 的比值被認為是細胞凋亡的可靠指標。本研究中模型組Bax/Bcl-2 值顯著升高；胺碘酮組和穩心顆粒高劑量組Bax/Bcl-2 值低，趨向于對照組的表達情況，提示凋亡情況降低。TUNEL 染色顯示模型組凋亡水平升高，胺碘酮組和穩心顆粒高劑量組能明顯降低凋亡水平，接近于對照組，與Western blotting 結果一致。異常的心肌細胞凋亡也會在一定程度上促進心肌纖維化的發生發展。心臟纖維化是心臟對多種損傷的常見反應，在心臟纖維化過程中，過多的膠原沉積和細胞外基質的堆積導致心肌順應性下降，電傳導也受到影響，進一步導致心律失常[36]，并且纖維化發生會誘導更多的炎癥因子釋放，會進一步加重纖維化的過程[37]。在本研究中，包括模型組在內的各組大鼠Masson 染色所示的心肌纖維化程度總體而言不高，這可能與心律失常大鼠的急性造模方式有關，心肌組織無法在短時間內出現大量纖維化病變。但相對而言，模型組心肌排列紊亂，纖維化范圍增多；胺碘酮組和穩心顆粒高劑量組能在一定程度上減輕心肌纖維化程度。

現有的許多關于穩心顆粒作用機制的研究，亦關注了凋亡、炎癥及氧化應激等方面[38]，但多為側重某一方面，本研究不僅關注了這3 方面的病理變化，更是將三者進行了病理串話。氧化應激可誘導細胞凋亡，激發機體防御性炎癥反應，產生更多炎癥因子；炎癥因子又促進氧自由基的大量產生[39-40]。氧化應激與凋亡、炎癥反應等不是簡單的先后發生關系，而是互相影響進而形成惡性循環，逐漸加劇心肌細胞損傷，導致心肌組織結構損壞及電信號傳導異常。而穩心顆?？梢种菩募〖毎蛲?、減輕炎癥反應和氧化應激，打破三者所串擾的連鎖反應，緩解心肌細胞和組織的病理損傷，以發揮其抗心律失常作用。穩心顆?，F不僅用于心律失常，還用于冠心病、心力衰竭等多種心血管疾病。凋亡、炎癥及氧化應激是包括心血管疾病在內的多種疾病的基本病理改變，對穩心顆粒該方面的機制探索，乃是追本溯源之舉，亦符合中醫“異病同治”的理念。本研究中，穩心顆粒的作用也呈現一定的劑量相關性，高劑量組療效最好，中劑量組對部分指標也有一定的改善作用，未來還需對穩心顆粒使用的最佳劑量進一步研究。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突