微顆粒紫菜粉投喂量對隆線溞(Daphnia carinata)種群增長的影響

符芳菲，徐善良，袁 舟，王 莉，王丹麗

(1. 寧波大學 海洋學院； 2. 寧波大學 應用海洋生物技術教育部重點實驗室，浙江 寧波 315211)

動物性活餌料培養是當今水產育苗中必不可少的關鍵環節，對于魚類、蝦類、蟹類的苗種培育尤其重要。枝角類因其大小適口、營養豐富、易消化，是水產經濟動物苗種生產中理想的活餌料。天然水域的枝角類由于豐欠不定，且常帶來病原體，故人工培養枝角類技術越來越受到重視[1,2]。但是，傳統的方法多用稻草水、草漿、單胞藻或酵母等培養枝角類[3,4]，由于其操作繁雜，成本高，且培養不穩定，不能滿足生產的需要。所以，尋找一種新的培養枝角類餌料的方法十分必要。迄今，已有關于大型藻粉及其酶解液用于貝類等餌料的研究報道[5-8]，紫菜作為一種常見的大型海藻，經超細粉碎或進一步酶解后的顆粒能被枝角類利用[6]。

隆線溞(Daphniacarinata)是分布較廣、易在實驗室培養的一種大型溞類。其身體透明，易于觀察，能行孤雌和兩性生殖，個體發育迅速,發育階段明顯，種群增長快[9]。本實驗選擇微顆粒紫菜粉及其酶解液投喂隆線溞，觀察隆線溞在不同投喂量下的種群增長速度，并與傳統Banta液培養方法進行比較，旨在獲得微顆粒紫菜粉投喂方式下的最佳投喂量，為微顆粒紫菜粉規?；囵B枝角類提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 溞種采集與預培養

隆線溞于2012年5月采自寧波大學校內水塘，在實驗室鑒定分離多代后，取同一母溞生產的同一批同等大小個體的幼溞作為實驗材料。實驗于(25±1)℃恒溫箱中培養，人工光照1000 lx，并經過一段時間的預培養，得到適合溞群生長的食物投喂量范圍。

1.2 餌料制備

Banta液配制：兔糞1.5 g+干稻草2 g+沃土20 g+水1000 mL；微顆粒紫菜粉用紫菜干品經超微食品粉碎機粉碎后，300目分樣篩過篩得到；紫菜粉酶解液采用3 g微顆粒紫菜粉加750 mL瓊膠酶液，在28℃恒溫搖床培養15 h，獲得紫菜粉酶解后的懸濁液，4℃冷藏保存備用。

1.3 實驗設計與方法

以容積250 mL燒杯為實驗容器。實驗共設3組，A組用Banta液培養，作為對照組；B組投喂微顆粒紫菜干粉，設置0.12 mg/mL、0.16 mg/mL和0.20 mg/mL 3個投喂量，記為B1，B2，B3；C組投喂微顆粒紫菜粉酶解液，設置1.2%、1.6%和2.0% 3個酶解液添加濃度，記為C1，C2，C3。每個餌料濃度實驗安排5個平行，共35個燒杯。

實驗開始時，向每個燒杯中加入設定的餌料，1 d后每個燒杯中放入30只新生幼溞，初始溞密度為0.12 ind/mL，置恒溫箱中培養，每天上午9:00及下午18:00定期觀察，從杯中開始產幼溞起，每天計數燒杯中溞的個數，種群密度高時用5 mL注射器隨機抽樣計數，重復3次，求平均值。隔天向各燒杯中添加一次設定的餌料量，以維持食物密度的相對穩定，隔天測pH值，監測培養過程中的水質變化，并及時吸除死溞，實驗過程始終維持各杯水體積為250 mL。

1.4 數據統計及處理

所得數據利用SPSS13.0軟件進行單因素方差分析及Duncan多重比較檢驗顯著性水平。

2 結果

2.1 3種方式培養下隆線溞的種群生長

2.1.1 Banta液培養下隆線溞的種群密度變化

隆線溞在Banta液培養下的種群生長見圖1。由圖可知，A組接種后的第6 d開始產仔溞，種群密度由初始的0.12 ind/mL迅速增加至1.27 ind/mL，隔天產仔量又翻了一番達到2.6 ind/mL，在第7 d達到峰值，為3.33 ind/mL。此后，杯中的種群密度不斷下跌，第12 d種群密度僅為高峰時的55%，第15 d密度已降至0.5 ind/mL以下。溞體顏色表現為較透明、個體小，發白(見圖4-A)。

圖1 Banta液喂養下的種群密度變化

2.1.2 微顆粒紫菜粉投喂下隆線溞的種群密度變化

隆線溞在3個微顆粒紫菜粉投喂量下的種群生長見圖2，經F-雙樣本方差分析檢驗，3個不同投喂量下，隆線溞的種群生長存在顯著差異(P<0.05)。以B2組種群密度上升最快，產仔后3 d內種群密度急劇增大，第7 d即達到高峰，為2.87 ind/mL，是初始值的24倍，此后種群密度呈波動下降，第10天再次出現第二高峰，密度為2.47 ind/mL，兩高峰間的平均密度維持在2.67 ind/mL，第13 d后開始大幅下降； B1組種群生長呈單峰型，增長明顯不如B2組，在第11 d達到種群密度高峰，為2.20 ind/mL，此后，種群密度開始緩慢下降，并出現帶休眠卵的個體；B3組藻粉投喂量最多，但種群生長極差，培養密度沒有明顯的高峰，顯著低于B1和B2兩組，平均密度僅為0.53 ind/mL，是B1和B2平均密度的42%和30%。

圖2 紫菜粉喂養下的種群密度變化

2.1.3 不同紫菜粉酶解液濃度下隆線溞的種群密度變化

圖3 紫菜粉酶解液喂養下的種群密度變化

圖4 Banta液(A)和紫菜粉(B)培養下的隆線溞溞體比較

圖3為隆線溞在紫菜粉酶解液投喂下的種群生長曲線。經F-雙樣本方差分析檢驗，C2和C3的種群生長差異不顯著(P>0.05)，但C2和C3的種群密度顯著高于C1組(P<0.05)；在酶解液投喂下，隆線溞的種群生長起勢較慢，但高峰維持時間較長，且種群密度峰值較大，C2和C3的高峰分別在10 d和14 d，峰值為5.73 ind/mL和5.2 ind/mL。C1組種群一直維持在1～2 ind/mL間，最高值才2.4 ind/mL,3組均在第14 d后種群密度出現下降。酶解液喂養下的溞體透紅，活力強，水質較清，無異味。

2.2 不同食物投喂下培養液的pH值變化

不同食物投喂下培養液pH值與隆線溞種群密度變化見表1。經SPSS13.0軟件進行相關性檢驗，3種食物培養下，培養液的pH值變化與隆線溞種群密度間的相關性顯著。表1的各項指標表明，實驗期間各組的平均pH值變化為7.85～8.30，呈弱堿性，且各組種群密度達到高峰時的平均pH值大于7.91，各組種群密度低谷時的平均pH值則低于7.84，可見種群生長狀態與培養液的平均pH值有著密切的關系。雖然pH值7.8以下隆線溞也能正常存活、產仔，但pH值8.0以上更容易培養，種群密度更高。

表1 不同食物投喂下pH值的變化與隆線溞種群密度的關系

3 討論

3.1 食物種類與投喂量對隆線溞培養效果的影響

從本實驗結果看，A組用傳統的Banta液培養，隆線溞的種群生長特征比較符合一般的枝角類生長特征[10]。由于剛開始食物較豐富，隆線溞生長良好，接種后第7 d很快達到種群高峰，但是在有限空間里，種群數量的增加導致食物不足、水質逐漸變差，種群數量開始下降，出現先增后減的現象，符合簡單的不完全邏輯斯諦增長[11]。投喂微顆粒紫菜粉的B組，設置的3個投喂量中，以投喂0.16 mg/mL的B2組的種群生長最快，產仔最早，最高密度達2.87 ind/mL，與A組相近，并且在一周時間內保持較高的種群密度狀態，而投喂0.12 mg/mL的B1組種群生長不及B2組，投喂0.20 mg/mL的B3組則更差，一直處于低種群密度狀態。投喂紫菜粉酶解液的C組培養效果明顯優于直接投喂微顆粒紫菜粉的B組，尤其是投喂1.6%的C2組的培養效果最為理想，種群生長速度最快，溞體透紅，活力強(圖4-B)，最高密度達到5.8 ind/mL，是B2組的2倍。投喂2.0%的C3組效果次之，投喂1.2%的C1組最差。實驗結果表明，Banta液培養隆線溞可以獲得比較穩定的培養效果，但種群高峰的維持時間和最高種群密度不及微顆粒紫菜粉酶解液培養的C2和C3組。而用微顆粒紫菜粉直接投喂的方法不能達到理想的效果，原因是紫菜經過超細粉碎，許多顆粒吸水后的大小在200 μm以上，顆粒仍然偏大，隆線溞很難直接攝食，必須依靠水中的微生物逐漸分解后才能利用。采用微顆粒紫菜粉酶解液投喂的C組，由于事先將微顆粒紫菜粉用瓊膠酶進行酶解處理，隆線溞很容易利用紫菜的酶解產物，使得培養的溞獲得充足的營養，個體健壯，體色透紅，繁殖能力增強，因此獲得了比Banta液培養更好的效果。

3.2 培養液pH值變化與隆線溞種群密度的關系

在枝角類培養中，除了食物、溫度、鹽度、密度等因子外，pH值也是影響溞類生長的一個不可忽略的重要因素[12,14,15]。通過各實驗組的pH值監測結果分析(表1)，我們可以發現，隆線溞在弱堿性的環境中可以生長繁殖，與以往報道的一致[13]。同時，溞群的數量增加在一定程度上也會使水體的pH值上升，兩者相互影響，相互制約。實驗中用Banta液培養的水體pH值較為穩定，種群密度數量波動不大，而用微顆粒紫菜粉和酶解液培養時，由于微生物對紫菜粉的分解作用，使培養液的pH值波動較大，并且伴隨著pH值的波動，隆線溞的種群密度也隨之發生顯著的增減。由表1我們不難看出用紫菜粉培養隆線溞時，適宜的pH值應控制在8.0～8.2，這時的隆線溞生長狀態最好，種群密度最高，溞體最健壯，這3種不同餌料的培養也恰恰說明了枝角類對環境pH的敏感性。所以在用微顆粒紫菜粉培養枝角類過程中，應用酸堿調節pH值，控制在最適范圍內，才能更好地促進溞的生長。

3.3 用微顆粒紫菜粉培養枝角類的前景與工藝探討

培養枝角類的餌料種類及其投喂量是枝角類人工培養成敗的關鍵因素[16]。傳統的稻草水或單胞藻培養枝角類，存在費時費力，培養產量不穩定的問題，能否找到合理可行的培養枝角類的替代餌料源，是枝角類生產性培養中普遍關心的問題。紫菜是最為常見的食用紅藻，在紫菜養殖后期，筏架上大量老紫菜因利用價值低而被丟棄，我們嘗試將這些紫菜干燥粉碎成微顆粒后進行開發利用。紫菜干物質中含粗蛋白34.88%～37.21%、碳水化合物46.86%～49.27%、粗脂肪1.68%～2.09%、灰分8.75%～9.92%[17，18]，說明紫菜粉是一種典型的高蛋白、低脂肪、富含礦物元素的食物，其營養成分非常符合枝角類對食物的需求。實驗也證明，用微顆粒紫菜粉培養的隆線溞個大健壯，溞體呈紅色，活力好，發育快，產仔量多。尤其是經瓊膠酶酶解后的藻粉更易被枝角類吸收利用，是一種十分適合培養枝角類的餌料源。但是，在培養時如果直接投喂微顆粒紫菜粉，由于紫菜粉粒徑大，適口性差，經腐化一段時間后，才會逐漸被隆線溞攝食，不能充分利用，而紫菜粉酶解液很好地解決了這一問題。紫菜粉酶解液是指通過產瓊膠酶的菌株進一步酶解微顆粒紫菜粉得到的懸濁液[19]。在紫菜粉酶解液實驗組中，不僅餌料的利用率高，而且其水質也不易惡化，隆線溞種群生長快速，種群密度顯著高于另外兩組。

已有眾多研究證實同種餌料不同的投喂量對溞類種群增長有直接的影響[3,20，21]，因此，在枝角類大量培養中，要選擇合適的餌料密度，即可克服餌料密度低時溞類攝食不足，又可避免餌料過剩造成的浪費和對溞類生長環境的不良影響，用微顆粒紫菜粉培養枝角類時同樣存在這樣的問題，本實驗結果認為采用紫菜酶解液為1.6%和微顆粒紫菜粉為0.16 mg/mL培養隆線溞是比較合理的投喂量，這對今后推廣用微顆粒紫菜粉大量培養枝角類具有重要的參考價值。

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