不同產地柿蒂藥材中沒食子酸含量的比較

★ 黃文平 黃陸強 宋永貴, 肖光清 黎田兒 李志峰,

(1.中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心 江西 南昌 330006；2.江西中醫藥大學 江西 南昌 330004)

柿蒂為柿樹科植物柿DiospyroskakiThunb.的干燥宿萼。冬季果實成熟時采摘，食用時收集，洗凈，曬干。其苦、澀，平；歸胃經。有降氣止呃功能，常用于胃寒氣滯的呃逆。臨床治療頑固性或術后呃逆，反流性胃炎等癥[1]。中國藥典2010年版柿蒂項下無含量測定項，雖有文獻[2]報道了柿蒂中沒食子酸的含量測定，但所用的藥材比較單一，無法驗證其方法的可行性，本文在對其方法進行改進基礎上，對不同產地柿蒂中沒食子酸含量進行測定，即比較了不同產地柿蒂藥材質量，又為2015年版中國藥典柿蒂含量測定項的建立提供基礎研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-10AT型高效液相色譜儀DAD檢測器；自動進樣器；AUW220D十萬分之一分析天平(日本島津公司)；KQ-250型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 乙醇、磷酸(分析醇，上海振興化工一廠)；甲醇(色譜純，山東禹王實業有限公司禹城化工廠)；水為超純水。柿蒂藥材分別采集于江西、河北等地，樣品經江西中醫藥大學中藥資源中心鐘國躍鑒定為柿樹科植物柿DiospyroskakiThunb.的干燥宿萼。

1.3 對照品 沒食子酸對照品(含量大于98%，批號：M05-20130113，中國藥品生物制品檢定所)。

2 方法與結果

2.1 柿蒂藥材供試品溶液 取干燥柿蒂粉末(過3號篩)0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，精密稱定重量,超聲20min，冷卻，用50%甲醇補足減失重量，搖勻，靜置，取上清液過0.45μm微孔濾膜后,即得。

2.2 對照品溶液制備 取沒食子酸對照品適量，精密稱定，用50%甲醇制成每1mL并定容至刻度，制成含0.00776mg的溶液。

2.3 色譜條件 色譜柱為Cosmosil C18(4.6mm×250mm，5μm)，流速：1.0mL/min；檢測波長273nm；柱溫25℃。流動相為甲醇-0.5%磷酸溶液(5∶95)。在此色譜條件下，測定沒食子酸對照品、柿蒂藥材供試品，色譜圖見圖1。

A.柿蒂藥材供試品；B.沒食子酸對照品

由圖1可見，柿蒂藥材供試品溶液中沒食子酸保留時間約為11.3min，且與相鄰峰的分離度均大于1.5，對稱性接近于1，可用于定量分析。

2.4 線性關系試驗 精密吸取對照品溶液2，7，10，15，20，25μL注入色譜儀，按上述色譜條件進行測定，以峰面積(Y)為縱坐標，進樣量(X)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為沒食子酸0.01552～0.194μg，Y=2.83×109X-4.86×103，r=0.999(n=6)，提示沒食子酸在0.01552～0.194μg范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液10μL，連續重復6次，測定峰面積，其RSD為0.30%，表明精密度良好。

2.6 穩定性實驗 精密吸取同一濃度的樣品溶液分別于0，1，2，4，6，12 h各取10μL進樣，結果樣品在12h內穩定，沒食子酸的RSD為1.19%。

2.7 重復性試驗 按“2.1”項下方法制備6份供試品溶液，照樣品測定方法測定沒食子酸的含量，結果沒食子酸的RSD為0.69%，表明該方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗 分別取已知含量的同一批樣品約0.4g六份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按含有80%、100%、120%的量加入沒食子酸對照品一定量，按“2.1”項下方法進行處理，按樣品測定方法測定沒食子酸含量，計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率實驗結果

2.9 樣品的含量測定 取10批不同柿蒂藥材，分別照“2.1”項下方法平行制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，每份進樣3次，計算各沒食子酸含量的質量分數，結果見表2。

表2 十批柿蒂藥材含量測定(%)

3 結論與討論

根據指示性成分的理化性質，考察了50%甲醇、70%乙醇以及流動相作為溶媒對測定結果的影響，結果發現采用50%甲醇作為溶媒，沒食子酸的保留率比較大；比較了超聲提取與冷浸法進行沒食子酸提取的考察，發現超聲提取法沒食子酸的溶出率大。經試用甲醇-0.5%磷酸(1∶99)，甲醇-0.5%磷酸(50∶50)，甲醇-0.5%磷酸(5∶95)，甲醇-水(10∶90)作為流動相進行篩選，比較其分離效果與基線平穩狀態，結果確定甲醇-0.5%磷酸(5∶95)作為流動相。綜上確定了供試品溶液的制備方法及流動相組成。采用二極管陣列檢測器對檢測波長進行選擇，結果表

明，檢測波長為274nm時，對照品有最大吸收波長。

經過比較，吉安新興藥材行(130801)含沒食子酸量最大，其次是湖北(青春康源YA1000)，而河北與山東的平均含量基本一致。不同地域的差異，會導致藥材所含的有效成分有一定的差異，因此，對臨床用藥時，選擇藥材的道地屬性及質量的優劣具有一定的意義。本實驗通過高效液相色譜法建立了柿蒂中沒食子酸測定方法，并測定了四個產地10批次藥材中沒食子酸的含量，該含量測定方法準確、簡便、靈敏、重復性好、精密度高；對用藥來源的選擇提供了一定的依據。

[1]肖培根主編.新編中藥志(第二卷)[M].北京：化學工業出版社，2002：487.

[2]胡曉煒，宋緒峰.RP-HPLC法測定柿蒂中沒食子酸的含量[J].中國藥事，2003，17(6)：371.