GC法測定鹽酸特比萘芬乳膏中防腐劑苯甲醇的含量

★ 鐘莉銀 劉紅寧 朱衛豐 王森 沈冬冬

(1.江西中醫藥大學現代中藥制劑教育部重點實驗室 江西 南昌 330004；2.上海百安制藥有限公司 上海 201501)

鹽酸特比萘芬乳膏為皮膚科用藥類非處方藥，能高度選擇性地抑制真菌麥角鯊烯環氧化酶，阻斷真菌細胞膜形成過程中的麥角鯊烯環氧化反應而干擾真菌固醇的早期生物合成，從而發揮抑制和殺滅真菌的作用。鹽酸特比萘芬乳膏用于治療手癬、足癬、體癬、股癬及花斑癬有效性和安全性已得到證實[1-3]，值得臨床推廣應用。苯甲醇在鹽酸特比萘芬乳膏中為防腐劑，有麻痹作用，對眼部、皮膚和呼吸系統有強烈的刺激作用，吞食、吸入或皮膚接觸均對身體有害[4]，故控制苯甲醇含量對鹽酸特比萘芬乳膏的質量至關重要。

目前苯甲醇的含量測定中國藥典采用氫氧化鈉滴定法，方法準確性不高，近年來對苯甲醇的檢測主要集中在注射劑和化妝品方面，檢測方法有高效液相色譜法和氣相色譜法。2009年中國國家標準化管理委員會發布了化妝品中防腐劑苯甲醇的氣相色譜法。本文采用氣相色譜法，以苯甲酸甲酯未內標物，檢測鹽酸特比萘芬乳膏中苯甲醇的含量，方法簡便、準確，精密度高。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 GC112A氣相色譜儀，配有氫火焰離子化檢測器FID(上海精密科學儀器有限公司)；Sartorius BS124S 和BT25S 電子天平；KQ-100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 對照品苯甲醇(批號：20120309，純度99.85%)和苯甲酸甲酯(批號：WTN20111207，純度99.84%)均購自國藥集團化學試劑有限公司，氣相色譜純；無水乙醇，分析純，購自國藥集團化學試劑有限公司；鹽酸特比萘芬乳膏(批號為121101，121102，121103)與不含苯甲醇的空白基質均由上海百安制藥有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 內標溶液 取苯甲酸甲酯500 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，配成5.0 mg/mL的內標溶液。

2.1.2 苯甲醇標準儲備液及對照品溶液 取苯甲醇對照品500 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，配成5.0 mg/mL的標準儲備液。精密量取苯甲醇標準儲備液5.0 mL，置50 mL量瓶中，精密加入內標溶液5.0 mL，加無水乙醇稀釋至刻度，即得濃度為0.5 mg/mL的苯甲醇對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液 取鹽酸特比萘芬乳膏1.25 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，精密加入內標溶液5.0 mL，加無水乙醇適量，超聲，使溶解，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中放置10 min，濾過，取續濾液，即得。

2.1.4 空白基質溶液 按處方量制備缺苯甲醇的空白基質，精密稱取1.25 g置50 mL量瓶中，加無水乙醇適量，超聲，使溶解，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中放置10 min，濾過，取續濾液，即得。

2.2 色譜條件 色譜柱：SE-54毛細管色譜柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm)；色譜柱升溫程序：初始100 ℃，維持3 min，以10 ℃/min的速率升至200℃后，保持2 min，再以40 ℃/min升至250 ℃，保持10 min；進樣口溫度：200 ℃；FID檢測器溫度：250 ℃；載氣：高純N2，流速30 mL/min；進樣量：1.0 μL；按上述色譜條件進行測定，結果樣品中各色譜峰均達到基線分離，苯甲醇峰與苯甲酸甲酯的保留時間(tR)分別約為5.3和6.4，分離度為16.8，空白未加內標的基質溶液在與苯甲醇、苯甲酸甲酯相同位置處無干擾峰，表明樣品中其他成分對苯甲醇與苯甲酸甲酯的測定無干擾，見圖1。

A.對照品溶液；B.供試品溶液；C.空白基質溶液；D.及內標溶液；1.苯甲醇；2.苯甲酸甲酯

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 分別精密量取上述苯甲醇標準儲備液一定量，置于50 mL容量瓶中，精密加入內標溶液5.0 mL，用無水乙醇稀釋至刻度，配制成濃度為0.1001, 0.2003, 0.3004, 0.5006, 1.0013mg/mL系列標液。按上述色譜條件，進樣1 μL，記錄色譜圖，以苯甲醇濃度為橫坐標(X)，苯甲醇峰面積與內標峰面積的比值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，進行回歸分析，得回歸方程Y=2.4287X-0.0042,r=1。結果表明，苯甲醇濃度在0.1001～1.0013 mg/mL 范圍內呈良好的線性關系。

2.3.2 精密度試驗 精密吸取對照品溶液(苯甲醇、苯甲酸甲酯濃度分別為0.5006,0.5002 mg/mL)1 μL，連續進樣6次，記錄峰面積，苯甲醇與內標峰面積比的RSD為0.45%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復性試驗 精密稱取同一試樣(批號：121101)6份，每份1.25 g，制備成供試品溶液，按上述色譜條件，分別進樣1 μL，記錄色譜圖，計算苯甲醇的含量(標示量%)，測定苯甲醇平均含量為2.00%，RSD為0.65%(n=6)。

2.3.4 穩定性試驗 取樣品(批號：121101)制備成供試品溶液，在室溫下放置，于0 ，2 ，4 ，6 ，8 ，10 ，12 h進樣1 μL，記錄色譜峰面積，所得苯甲醇峰面積與內標峰面積比的RSD為0.6%，表明供試品品溶液在12 h內基本穩定。

表1 回收率試驗結果(n=3)

2.3.5 回收率試驗 精密稱取不含苯甲醇的鹽酸特比萘芬乳膏空白基質1.25 g，置50 mL容量瓶中，一式9份，以3份為一組，分別精密加入苯甲醇標準儲備液(苯甲醇濃度為5.006 mg/mL)4.0，5.0，6.0 mL，制備成低(80%)、中(100%)、高(120%)三種濃度的供試品溶液，進樣1 μL，計算苯甲醇回收率，結果見表1。

2.3.6 樣品測定 應用所建立的分析方法，對3批鹽酸特比萘芬乳膏樣品進行分析，每批樣品平行制備2份供試品溶液，計算3批樣品中苯甲醇含量。結果批號為121101，121102，121103的鹽酸特比萘芬乳膏中苯甲醇的含量分別為2.00%，2.02%，1.99%。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇 本實驗根據苯甲醇的性質和鹽酸特比萘芬乳膏基質的特點，選用弱極性的SE-54毛細管柱(5%二苯基-95%聚二甲基硅氧烷)，采用程序升溫，200 ℃的進樣口溫度和250 ℃的檢測器溫度。由于乳膏基質中成分復雜，難揮發物較多，本實驗將鹽酸特比萘芬乳膏基質中的所有成分按該色譜條件進樣分析，發現基質成分中的甘油峰出現在溶劑峰與苯甲醇峰之間，其他基質成分峰均在目標色譜峰之后，故在目標色譜峰出完后，保持數分鐘，再以40 ℃/min升至250 ℃，保持10 min，揮出殘留組分，以免影響下一樣品的分析。

3.2 溶劑的選擇 因苯甲醇能與無水乙醇混溶，且在實驗中發現在樣品取樣量下，鹽酸特比萘芬乳膏中各組分均能溶于無水乙醇，同時無水乙醇無毒、價廉，故選用無水乙醇作為溶劑。

3.3 內標物質的選擇 試驗曾將乙二醇、環己醇和苯甲酸甲酯作為內標進行實驗，根據保留時間、峰面積和分離度等因素，最終選擇苯甲酸甲酯作為內標物質。

[1]Hans Christian Korting, Peter Kiencke, Sandra Nells, et al. Comparable Efficacy and Safety of Various Topical Formulations of Terbinafine in Tinea Pedis Irrespective of the Treatment Regimen[J]. Am J Clin Dermatol, 2007,8(6):357.

[2]王愛平，李若瑜，曾凡欽，等. 1%鹽酸特比萘芬軟膏治療淺部真菌病隨機雙盲對照多中心臨床試驗[J]. 臨床皮膚科雜志，2001,30(4)：247.

[3]王恂，曾躍斌，許金華. 1%鹽酸特比萘芬乳膏治療淺部真菌病臨床觀察[J]. 中國現代醫學雜志,2007,17(8):978.

[4]田富饒，王旭強，鄭瀚.高效液相色譜-紫外檢測器法測定化妝品中的苯甲醇[J]. 化學分析計量，2011,20(5)：63-65.