HPLC法測定神安顆粒中天麻素含量

★ 李堅 易延逵 蔡光先 楊永華

(1. 漣源市人民醫院藥劑科 湖南 漣源 417100；2.南方醫科大學 廣東 廣州 510515；3.湖南中醫藥大學 湖南 長沙 410006)

安神顆粒是湖南中醫藥大學蔡光先教授的經驗方，由天麻、酸棗仁、丹參、首烏藤、百合花、五味子等6味藥組成，功能益氣養血、疏郁定驚、清心除煩、補腦安眠。用于各種慢性疾病引起的頭昏眼花、心神焦悴、失眠多夢、記憶力減退、疲倦無力等。

安神方原方應用方法為：天麻、酸棗仁、丹參、首烏藤、百合花、五味子等各味粉碎成粗粉，開水泡服。很明顯，原方應用不方便，服用量大，服用困難，口感苦澀。鑒于安神顆粒藥方療效確切、應用廣泛及市面已有劑型的特點與現代人們用藥的要求，本文選擇安神處方為研究載體，對原工藝進行改進，采用超細粉體技術及現代提取工藝等現代制藥工藝，研制安神顆粒制劑，在保持傳統中醫藥特色的基礎上，大量采用現代天然產物制備技術，提高天然產物的生物利用度。

1 儀器與試藥

1.1 高效液相儀器：Aglient1100高效液相色譜儀；色譜柱：Kromasil C18柱(4.6 mm ×150.0 mm，5.0μm)；處理軟件：Aglient1100數據處理軟件。UV-2401可見紫外分光光度儀(日本島津)；電子天平(0.001g，德國sartrius BP110S)。

1.2 試藥 天麻素對照品(批號：110807-200205，由中國藥品生物制品檢定所提供)；神安顆粒(自制)；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

參照有關文獻報道[4-8]，選擇高效液相色譜法測定天麻素含量，并進行了方法學研究。

2.1 色譜條件 流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液(0.5∶99.5)為流動相；檢測波長為220 nm。流速：1.0mL/min，理論板數按天麻素峰計算不低于5000。

2.2 檢測波長的選擇 根據天麻素的理化性質，在紫外區域有最大吸收，故取天麻素對照品，采用甲醇配成約10μg/mL的溶液，在200～400nm波長范圍內掃描，結果天麻素在220nm波長處有最大吸收，與文獻報道一致，可作為HPLC法測定天麻素含量的檢測波長。

2.3 供試品溶液制備方法的比較

2.3.1 取本品0.25g，精密稱定，加稀乙醇50mL，精密稱定重量，水浴回流3h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，取濾液10mL，濃縮至近干，殘渣加甲醇溶解，轉移至10mL量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，作為供試品溶液，進行HPLC檢測。

2.3.2 取本品0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理(功率：240W，頻率：45Hz)1h，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，作為供試品溶液，進行HPLC檢測。

近兩年，中國石化黑龍江石油把全面可持續發展，邁向高質量發展作為第一要務，以打造“一流企業”為愿景，以建設“大一企業”為目標，堅決落實集團公司工作部署，圍繞“改革、管理、創新、發展”工作方針，堅持穩中求進工作總基調，統籌拓市場、促改革、抓運行，持續推進新業務轉型突破，主營業務扎實開展。1—8月，公司實現經營總量72.5萬噸，同比增幅17%。零售總量同比增加9.2萬噸，同比增幅24.3%。非油品交易額1.28億元，同比增幅13%。零售總量增幅排名系統第一，市場份額達到17%，榮獲銷售企業月度紅旗四面。

試驗結果表明，同批樣品采用甲醇超聲和回流處理，結果相差不大，天麻素峰與樣品中其它組分色譜峰可達基線分離，且與其它組分相鄰色譜峰分離度大于1.5，按天麻素峰計，理論塔板數在5000以上。故本品含量測定采用2.3.2方法進行供試品溶液的制備。

2.4 對照品溶液的制備 精密稱取天麻素對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.25mg的溶液，即得。

2.5 專屬性考查 按處方配比稱取除天麻以外的其他藥材適量，按制備工藝制成缺天麻的陰性樣品，注入液相色譜儀，結果表明陰性無干擾。

2.6 方法學考查

2.6.1 線性范圍的考查 精密吸取天麻素對照品溶液(0.25mg /mL)2.5，5，10，15，20，25μL，注入高效液相色譜儀，測定，以峰面積對數值為縱坐標，進樣量(μg)對數值為橫坐標，繪制標準曲線。其回歸方程為：Y= 17198X-160.97，r=0.9993。

2.6.2 精密度試驗 精密吸取供試品溶液10μL，分別進樣6次，依法測定，RSD為1.0%，表明本方法精密度較好。

2.6.3 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、12、16 h進行測定，RSD為1.8%, 表明供試品溶液在24 h內峰面積值基本穩定。

2.6.4 重復性試驗 取同一批樣品6份，同法制備供試品溶液，依法測定，RSD為2.53%，表明本方法重復性較好。

2.6.5 加樣回收率試驗 取已測定含量的樣品適量，共6份，精密稱定，分別加入天麻素對照品溶液10mL(0.029mg/mL)，即0.29mg/mL，按供試品溶液的制備方法處理，測定峰面積，計算加樣回收率，見表1。結果表明，本方法加樣回收率較好。

表6 加樣回收率試驗結果

2.7 樣品含量測定 取樣品三批,依法進行含量測定，結果見表2。

表2 三批樣品含量測定結果

2.8 原料中天麻素含量測定試驗 取天麻三批，按《中國藥典》2010年版一部天麻項下含量測定方法檢驗，其天麻素含量分別為0.7414%、0.7185%、0.7643%。用天麻素含量為0.7414%的原料投料試制樣品，結果含量為2.11mg/g。經計算本品轉移率為94.87%?！吨袊幍洹芬幎ㄌ炻樗幉闹刑炻樗睾坎坏蒙儆?.20%，如采用該含量的原料投料，按90.0%的轉移率計算，本品中天麻素含量為0.54mg/g。根據上述結果，暫定本品含天麻以天麻素計，不低于0.50mg/g。

3 討論與小結

神安顆粒采用了三種工藝，即超微粉碎工藝，醇提工藝，水提工藝，而其原料藥材成分也基本可以分為三類，即以天麻素為指標成分的天麻苷類成分；以五味子醇甲、丹參酮ⅡA為指標性成分的脂溶性成分；以丹參素、斯皮諾素、酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B等為指標性成分的水溶性成分。因而其質量控制也應建立三類成分的質量控制指標。

天麻在神安顆粒中為主要原料，也為天然產物的貴細原料，天麻素為其指標成分，2010版中國藥典[4]天麻中天麻素采用的也是高效液相色譜(HPLC)法，為此我們對其進行了研究，采用HPLC法建立其含量測定方法。2010版中國藥典天麻中天麻素的高效液相色譜含量測定方法中，和有關文獻采用的有關條件有些差異，我們經過了反復實驗，應用到神安顆粒中天麻素的含量測定中，進行了改進，并選擇了供試品溶液的處理方法，結果樣品分離效果好，從而建立了HPLC法測定天麻苷類成分的指標性成分天麻素的含量測定方法。

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[3]鄭虎占，董澤宏，佘靖．中藥現代研究與應用[M]. 北京：學苑出版社,1997.

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[7]程龍瓊，劉莉，周曉英．HPLC法測定強力天麻杜仲膠囊中天麻素的含量[J]. 中國藥房，2008，19(18)：1 410-1 411.

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