溫通止痛貼中黃芩苷含量的測定*

★ 陳浩 何小女 鄧運明 萬元泰

(1.江西省中醫院 江西 南昌 330006 ；2.江西中醫藥大學 江西 南昌 330004)

眾所周知[1，2]臨床治療中，類風濕性關節炎、風濕性關節炎、骨性關節炎等癥多年來一直都屬于疑難雜癥，尤其在臨床上使用中成藥治愈更是收效甚微。本院鄧運明教授[3]結合多年來臨床實踐經驗自主研發的溫通止痛貼劑采用中醫疏通經絡、祛除寒濕痹痛的機制，治療類風濕性關節炎、風濕性關節炎、骨性關節炎等癥臨床治療效果顯著。為控制其質量，保證臨床用藥安全、有效，有必要對溫通止痛貼質量標準再進行深入研究，因此采用HPLC法對溫通止痛貼中黃芩苷的含量進行測定。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 電子天平BS 124S(北京賽多利斯儀器);超聲波清洗器DL360B(上海之信儀器有限公司);微型植物試樣粉碎機KN-500型(長沙康寧電子科技有限公司);恒溫鼓風干燥箱DHG-9070A 型(上海精宏實驗設備有限公司)；安捷倫1260。

1.2 試劑 黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號：110715-201117)；色譜甲醇；水為超純水，其余實驗所用化學試劑均為分析純試劑。

1.3 色譜條件 色譜柱：C18安捷倫液相色譜柱(4.6mm×150mm,5μm);流動相：甲醇: 0.125%磷酸(47∶53);檢測波長：278nm;流速：1mL/min;柱溫： 30℃。

2 含量的測定[4-10]

2.1 黃芩苷對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品9.7mg于50mL量瓶中，加適量甲醇使溶解，用甲醇定容至刻度，搖勻，超聲10min，過微孔濾頭于小瓶，即得儲備液。

2.2 供試品溶液的制備 刮取溫通藥膏50g于研缽中，研勻，精密稱定5g于圓底燒瓶中。分別加入75%乙醇150，100mL于水浴(85℃)中回流提取兩次，每次40min，放冷、濾過，合并濾液，置分液漏斗中，用石油醚(60～90℃)萃取三次，棄去醚液，蒸干，殘渣用甲醇定量轉移至25mL量瓶中作為母液，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取母液5mL于25mL量瓶中，用甲醇定容，超聲10min，過微孔濾頭，取續濾液，即得供試品溶液。精密吸取黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含58.2μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 線性關系的考察 精密取儲備液取1, 2, 3, 5, 7mL溶解于5個10mL量瓶中，取甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲10min，以儲備液及稀釋的五個濃度的黃芩苷溶液建立標準曲線，每次進樣量10μL，以對照品進樣量為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y繪制標準曲線，求得回歸方程：Y=31939X-74.533,r=0.9997(n=6)。結果表明：黃芩苷在進樣量0.194～1.94μg范圍內，進樣量與峰面積呈良好線性關系。

2.4 陰性干擾試驗 取陰性樣品適量，按2.2項供試品方法制成陰性對照溶液。按照上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL注入色譜儀中，記錄色譜圖如下。結果表明：在與黃芩苷對照品色譜相應的位置上無色譜峰出現，方中其他組分對測定結果無影響。

2.5 精密度試驗 精密吸取2.2項的對照品溶液連續進樣6次，每次進樣10μL，測得精密度RSD% =1.92%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性考察 取同一批號樣品6份，按供試品溶液制備方法制備的樣品溶液，各進樣10μL記錄峰面積，結果RSD%為1.56%，說明本方法重復性好。

2.7 穩定性實驗 精密吸取同一份供試品溶液10μL分別于0, 1, 4, 7, 10 ,12 h注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積積分值，結果其RSD為1.67%。實驗結果表明供試品溶液在12 h內測定穩定性良好。

2.8 回收率實驗 采用加樣回收法，精密稱定已知含量的本品2.5g，共6份，精密加入對照品溶液5mL(0.7732mg/mL)，依“供試品溶液的制備”法制成供試品溶液，測定，計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.9 樣品測定 取本品三批樣品(20121025、20121122、20121205)，按2.2供試品方法制備溶液，按含量測定方法測定，用外標法計算供試品黃芩苷的含量，結果分別為1.408mg/g、1.436mg/g、1.422mg/g。

3 討論

3.1 取樣品在200～350 nm波長范圍內進行掃描，在278 nm處有最大吸收，故選擇278 nm為檢測波長。

3.2 本實驗采用高效液相色譜法對溫通止痛貼中黃芩苷含量進行測定，結果表明該方法簡單、有效，具有良好的準確性與重現性且測定中無陰性干擾。通過對HPLC方法學的摸索為下一步固本顆粒質量標準的進一步完善提供了精確、合理的科學依據。

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