斜脈暗羅莖提取物對S180荷瘤抗腫瘤作用及其機制研究*

★ 熊躍 周軍 王杰 吳興國

(南昌市中西醫結合醫院 江西 南昌 330003)

近年來，中醫藥治療腫瘤的研究取得了較快發展，中藥治療惡性腫瘤，無論是在減輕臨床癥狀、提高生存質量、防止復發轉移、延長生存期，還是在與放化療配合、增效減毒等方面都呈現出很好的效果[1]。因而中藥成為當前抗腫瘤藥物研究的熱點。

斜脈暗羅(Polyalthia. plagioneura)隸屬番荔枝科暗羅屬植物，系我國特有種類植物，主要分布于云南、廣東、廣西南部及海南[2]。民間常用于治療氣滯腹痛、痛經、梅核氣等疾病。本研究采用S180荷肉瘤小鼠作為研究對象，旨在探討斜脈暗羅莖提取物對S180荷廇小鼠對胸腺指數、脾指數、腫瘤抑制率的影響，并探討其抗腫瘤作用效果及可能的機制，為進一步研究斜脈暗羅抗腫瘤作用的化學成分及結構奠定基礎，為最終將其開發成抗腫瘤藥物提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 提取與分離 取陰干的斜脈暗羅莖磨成粗粉，用95%的乙醇回流提取3次。提取液合并，減壓蒸餾，干燥得浸膏。浸膏分別用氯仿、乙酸乙酯、水飽和正丁醇各萃取3次。得斜脈暗羅莖氯仿部位浸膏，乙酸乙酯部位得浸膏和正丁醇部分浸膏。乙酸乙酯浸膏用于本實驗。實驗前用N-二甲基甲酰胺溶解，吐溫-80助溶后，用生理鹽水稀釋至所需濃度備用。

1.2 S180荷瘤小鼠模型建立 選擇清潔級昆明小鼠48只，18～22g，雌雄各半。S180瘤細胞株從中國醫學科學院醫藥研究所購進后傳代。將已接種7天腫瘤生長良好的S180荷腹水瘤小鼠，頸椎脫臼處死，抽吸乳白色的濃稠腹水用無菌生理鹽水以1∶4的比例稀釋成細胞懸液，用血球計數板進行活細胞計數，苔盼蘭染色，檢測活細胞率﹥95%，調整細胞濃度為1×106/mL。于小鼠左前肢腋窩處皮下注射0.2mL S180細胞懸液，建立S180荷瘤小鼠模型。

1.3 分組與給藥 實驗動物分成：正常(生理鹽水)對照組、溶劑(N-二甲基甲酰胺)對照組、模型組、0.1 mg·kg-1的斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物組、0.2 mg·kg-1的斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物組和0.4 mg·kg-1的斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物組。正常對照組不做任何處理，其余各組從接種腫瘤后第二天開始，模型組給予PBS緩沖液灌胃0.1mL/10g；溶劑對照組給予溶劑0.1mL/10g灌胃；藥物組分別給予0.1、0.2、0.4 mg·kg-1的斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物灌胃，連續給藥7 d。

1.4 脾臟指數、胸腺指數、腫瘤指數及抑瘤率的測定 末次給藥后，小鼠禁食12h，頸椎脫臼處死，稱重，剖開胸腔，迅速剝取腫瘤、胸腺、脾臟，吸水紙吸干組織上的水分，電子天平稱重。計算脾臟指數、胸腺指數、腫瘤指數及抑瘤率。計算公式如下：臟器指數(mg/g)=臟器質量(mg)/小鼠體重(g)；腫瘤指數(mg/g)=腫瘤質量(mg)/小鼠體重(g)；抑瘤率=(溶劑對照組腫瘤平均質量-給藥組腫瘤平均質量)/ 溶劑對照組腫瘤平均質量×100%。

2 結果

2.1 斜脈暗羅莖提取物對小鼠胸腺重量和胸腺指數的影響 研究表明0.2、0.4 mg·kg-1的斜脈暗羅莖提取物能顯著增加小鼠胸腺重量和胸腺指數。結果見表1。

2.2 斜脈暗羅莖提取物對小鼠脾臟重量和脾指數的影響 研究表明0.2、0.4 mg·kg-1的斜脈暗羅莖提取物能顯著增加小鼠脾臟重量和脾指數。結果見表2。

表1 對小鼠胸腺重量和胸腺指數的影響

與溶劑對照組比較*P<0.05，**P<0.01。

表2 對小鼠脾臟重量和脾指數的影響

與溶劑對照組比較*P<0.05，**P<0.01。

2.3 斜脈暗羅莖提取物對小鼠肉瘤細胞S180抑制率的影響 研究表明0.2、0.4 mg·kg-1的斜脈暗羅莖提取物能顯著減少小鼠瘤體重量，最高抑瘤率為43.9%。結果見表3。

表3 對小鼠肉瘤細胞S180抑制的影響

與溶劑對照組比較*P<0.05，**P<0.01。

3 討論

張園[14]，王吉鴻[15]，李小寶[16]等報道暗羅屬植物具有明顯的抗腫瘤作用，暗羅屬植物對人肺腺癌細胞(SPC-A-1)和人胃癌細胞(SGC-7901)細胞具有明顯活性。本文主要報道斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物對S180荷瘤抗腫瘤作用的及機制研究。我們采用制備S180荷瘤小鼠動物模型，于接種腫瘤后第2日始隔日腹腔注射斜脈暗羅莖提取物溶液，給藥7天后，觀察小鼠胸腺、脾、腫瘤的重量及胸腺指數、脾指數、腫瘤指數等指標。研究結果顯示：0.2和0.4mg·kg-1·d-1的斜脈暗羅莖提取

物能明顯的增加小鼠胸腺指數、脾指數，且能明顯的緩慢的腫瘤生長，使腫瘤重量的明顯降低，腫瘤縮小，最高抑瘤率達43.9%。說明斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物能明顯抑制S180荷瘤小鼠腫瘤的生長。斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物能增強正常小鼠的非特異性免疫功能和細胞免疫功能及在體外能抑制小鼠肉瘤細胞S180的增殖，其作用機制可能是通過增強荷瘤小鼠自身免疫功能來實現。

[1]于海濤, 張 巍, 于英君, 等. 中藥抗腫瘤作用機制的研究[J]. 中醫臨床研究, 2010, 8(2): 88-90.

[2]吳德鄰．海南及廣東沿海島嶼植物名錄[M]. 北京：科學出版社，1994：9.

[3]張園，王菁，劉冰晶，等.海南四種暗羅屬植物揮發油對三種癌細胞的體外增殖抑制作用[J]. 山東醫藥,2011,51(15):62-64.

[4]王吉鴻.沙煲暗羅根化學成分及藥理活性研究[D]. ?？冢汉Ｄ蠋煼洞髮W,2012.

[5]李小寶.海南暗羅根化學成分及其藥理活性研究[D]. ?？冢汉Ｄ蠋煼洞髮W,2012.