三種鯻科魚類同工酶組織特異性及群體遺傳結構分析

張健東，何國清，陳　剛，湯保貴，潘傳豪，周　暉，黃建盛

(1. 廣東海洋大學水產學院，中國 湛江524025；2．廣東省普通高校南海水產經濟動物增養殖重點實驗室，中國 湛江　524025)

?

三種鯻科魚類同工酶組織特異性及群體遺傳結構分析

張健東1,2，何國清1，陳剛1,2，湯保貴1,2，潘傳豪1,2，周暉1,2，黃建盛1,2

(1. 廣東海洋大學水產學院，中國 湛江524025；2．廣東省普通高校南海水產經濟動物增養殖重點實驗室，中國 湛江524025)

摘要采用聚丙烯酰胺垂直板不連續電泳法對3種鯻科魚類6種組織(腦、眼、心、腎、肝和肌肉)的9種同工酶(ADH，EST，GDH，LDH，MDH，ME，POD，SDH，SOD)進行分析，結果顯示具有明顯組織特異性．此外，對每種魚40個個體的肝臟的8種同工酶進行群體遺傳結構分析，共記錄15個基因位點，其中呈多態性的位點有 2個(m-Pod-1,s-Sod-1)，多態座位比例(P)為0.133，位點平均有效等位基因數(Ae)分別為1.004，0.997和1.015，平均每個位點預期雜合度(He)值分別為0.068，0.066和0.045，平均每個位點實際雜合度(Ho)值分別為0.098，0.083和0.08．與其他魚類研究結果相比較，表明3種鯻科魚類的遺傳多樣性居于中等水平．

關鍵詞鯻科魚類；同工酶；組織特異性；遺傳結構

TheTissue-SpecificitiesofIsozymesandtheGenetic

鯻科魚類(Theraponidae) 屬硬骨魚綱(Osteichthyes)，鱸形目(Perciformes)，鱸亞目(Percoidei)，為熱帶區沿岸性魚類，主要分布于印度西太平洋地區及澳洲、新幾內亞、印尼等沿岸海域[1]．常見種類有細鱗鯻(Therapon jarbua)、鯻(Terapon theraps)、列牙鯻(Pelates quadrilineatus)和尖吻鯻(Rhynchopelate oxyrhynchus)4種，在中國發現了4屬8種[2-4]，鯻科魚類肉質鮮美香滑，經濟價值高，有很大的市場開發潛力[5-6]．

同工酶在生物界廣泛存在，變異豐富，且呈共顯性遺傳，能比較客觀地代表基因組的變異，因而能較客觀地度量群體的遺傳變異大小，且實驗條件較為簡單，成本較低，結果快速可靠等優點，該技術已成為一種經濟有效的群體遺傳學研究手段，是近20年來檢測遺傳多樣性研究最普遍的方法[7-10]．本實驗研究了3種鯻科魚類部分同工酶的組織特異性并探討其群體生化遺傳結構，以期為該物種的種質調查提供有價值的生化遺傳參數，同時也為種質資源的合理開發利用和遺傳育種等提供部分理論依據．

1材料與方法

1.1試驗樣本

試驗用魚采自湛江附近海域，通過《中國魚類系統檢索》[11]和世界魚類信息檢索系統(http://www.fishbase.org)中的形態學描述確定為鯻科的細鱗鯻、鯻和列牙鯻，各取5尾，細鱗鯻平均體長15.45±1.18cm，平均體質量52.03±11.07g；鯻平均體長10.20±0.87cm，平均體質量14.10±3.98g；列牙鯻平均體長11.24±1.70cm，平均體質量20.58±11.30g．

活體解剖取其心臟(H)、肝臟(L)、脾臟(S)、腎臟(K)、肌肉(M)、鰓(G)、眼(E)、腦(B)和鰭(F)9種組織或器官，0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0，4 ℃預冷)沖洗，編號裝袋，保存于-80 ℃冰箱．

1.2樣品制備

稱取適量組織，按1∶3g/mL比例加入4 ℃預冷的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0 )，用玻璃勻漿器冰浴中充分勻漿后置離心管中，于4 ℃，15 000r/min離心30min，取上清液，置于1.5mL離心管中(肝臟離心兩次，以去脂肪).加入等體積40%蔗糖及2.5μL溴酚藍指示劑混勻，-80 ℃超低溫冰箱中保存直至電泳前取出于-22 ℃冰箱中備用．

1.3電泳溶液配制

1.3.1電泳緩沖液配制

(1) 分離膠緩沖液TM1：Tris 72.6 g，加蒸餾水至180 mL,充分溶解，用1 mol/L HCl調節pH值至8.9，定容到200 mL．

(2) 濃縮膠緩沖液TM2：Tris 6.05 g，加蒸餾水溶解至180 mL，用1 mol/L HCl調節pH至6.7，定容到200 mL．

(3) 電極緩沖液TG：Tris6g,Gly28.8g，蒸餾水溶解，調pH至8.3，定容到1L．

1.3.2凝膠制備

(1) 30%凝膠儲液配制：Acr90g,Bis2.4g，加蒸餾水至300mL，37 ℃溫浴溶解，查證pH<7.0，用0.45μm孔徑濾膜過濾除菌，棕色瓶4 ℃保存．

(2) 分離膠(30mL)和濃縮膠(10mL)配制方法見表1．

表1　分離膠和濃縮膠的配制

1.4電泳

采用聚丙烯酰胺垂直板不連續電泳法，所分析酶的名稱、縮寫和編號見表2．

表2　實驗所分析同工酶的名稱、編號及結構

注：D-二聚體；M-單體；T-四聚體．

1.5染色

顯色方法參照小川和郎[12]等的方法稍做修改．按下列顯色系統進行：

(1)乙醇脫氫酶(ADH)

染色液配制：0.05mol/LTris-HCl(pH8.0) 48mL，無水乙醇0.2mL，1%NAD1mL， 1%NBT1mL，染色前加1%PMS0.2mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，于暗室37 ℃保溫直至顯示深藍色區帶．

(2)酯酶(EST)

染色液配制：0.1mol/LTris-HCl(pH7.1) 47mL，1%α-乙酸萘酯 1mL，1%β-乙酸萘酯 1mL，1%固藍RR鹽 1mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，室溫下直至顯示棕色或紅棕色區帶．

(3)葡萄糖脫氫酶(GDH)

染色液配制：0.1mol/LTris-HCl(pH8.0) 43mL，葡萄糖9g，1%NAD1mL， 1%NBT1mL，染色前加1%PMS0.2mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，室溫下直至顯示藍色區帶．

(4)乳酸脫氫酶(LDH)

染色液配制： 0.1mol/LTris-HCl(pH7.1) 43mL，1mol/L乳酸鈉(pH7.0) 5mL，1%NAD1mL， 1%NBT1mL，染色前加1%PMS0.2mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，于暗室37 ℃保溫直至顯示藍紫色區帶．

(5)蘋果酸酶(ME)

染色液配制：0.05mol/LTris-HCl(pH8.0) 42mL，2mol/LDL-蘋果酸鈉(pH8.0) 5mL，10%MgCl20.5 mL，0.5%NADP 1 mL，1%NBT 1 mL，染色前加1%PMS 0.2 mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，于暗室37 ℃保溫直至顯示深藍色區帶．

(6)蘋果酸脫氫酶(MDH)

染色液配制： 0.05mol/LTris-HCl(pH8.0) 43mL，2mol/LDL-蘋果酸鈉(pH8.0) 5mL，1%NAD1mL，1%NBT1mL，染色前加1%PMS0.2mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，于暗室37 ℃保溫直至顯示深藍色區帶．

(7)過氧化物酶(POD)

染色液配制：ddH2O 43 mL，2%醋酸聯苯胺 5 mL，3%H2O22 mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，室溫下直至顯示藍色區帶，顯色很快，應盡快固定，拍照．

(8)山梨醇脫氫酶(SDH)

染色液配制：0.2mol/LTris-HCl(pH8.0) 45mL，15% D-山梨醇 1mL，10%MgCl21 mL，1 mol/L EDTA 0.05 mL，1%NAD 1 mL，1%NBT 1 mL，染色前加1%PMS 0.2 mL，攪拌混勻．顯色：將電泳后的膠板浸入染色液，于暗室37 ℃保溫直至顯示深藍色區帶．

(9)超氧化物歧化酶(SOD)

染色液配制：0.05mol/LTris-HCl(pH8.0) 49mL，1mol/LEDTA0.05mL，0.002g核黃素，1%NBT1mL，攪拌混勻．顯色：將膠板浸入染色液，室溫光照下反應直至膠板底色變深而酶帶透明清晰．

1.6酶譜分析與遺傳學分析

(1) 酶譜分析對照片進行處理后，確定酶譜基因位點和等位基因，并做好標記記錄，同工酶的縮寫、基因座位和等位基因的命名采用Shaklee等[13]推薦的方法．

(2)遺傳學分析中，多態位點比例、等位基因頻率、平均雜合度(Ho，He)和Hardy-Weinberg遺傳偏離指數等參照文獻[14]計算．

a. 多態位點比例(percentageofpolymorphicloci, P)：P=(k/n) × 100%，其中k為多態座位數，n為所測位點總數．

b. 等位基因頻率(allelefrequency, qi)：qi= (2nii+∑nij)/(2N) (i≠j)，其中nii為具有純合aiai基因型的個體數，nij為具有雜合aiaj基因型的個體數，N為總個體數．

f.Hardy-Weinberg遺傳偏離指數(Geneticdeviationindex, d)：d=(Ho- He) / He，其中Ho為位點實際雜合度，He為位點預期雜合度．

2結果與分析

2.1組織特異性

試驗分析了3種鯻科魚類的9種同工酶(ADH，EST，GDH，LDH，MDH，ME，SOD，POD，SDH)，有明顯組織特異性．在6種器官與組織中肝臟的同工酶表達最多且較穩定清晰，心、腎、腦次之，眼和肌肉較少(表3)．試驗所分析酶中EST，LDH，MDH，POD，SOD在各器官組織中都有表達，ADH，GDH，SDH僅在肝臟中有表達．ME在3種魚間表達差異較大．部分同工酶在各組織中的表達情況見圖1～圖6．

圖中從左到右依次為細鱗鯻、列牙鯻、鯻；腦(B)；眼(E)；心臟(H)；腎(K)；肝臟(L)；肌肉(M)；下同圖1　3種鯻科魚類乙醇脫氫酶的組織分布Fig.1　Eelectrophorogram of ADH in tissues of three species Theraponidae

圖2　3種鯻科魚類酯酶的組織分布Fig.2　Eelectrophorogram of EST in tissues of three species Theraponidae

圖3　3種鯻科魚類葡萄糖脫氫酶的組織分布Fig.3　Eelectrophorogram of GDH in tissues of three species Theraponidae

圖4　3種鯻科魚類乳酸脫氫酶的組織分布Fig.4　Eelectrophorogram of LDH in tissues of three species Theraponidae

圖5　3種鯻科魚類蘋果酸酶的組織分布Fig.5　Eelectrophorogram of ME in tissues of three species Theraponidae

圖6　3種鯻科魚類超氧化物歧化酶的組織分布Fig.6　Eelectrophorogram of SOD in tissues of three species Theraponidae

3種鯻魚的酯酶非常豐富，可能由6個位點編碼，組織特異性明顯．所測6種組織中，肝臟和腎臟中的酶活性較強且酶帶較多．葡萄糖脫氫酶是磷酸戊糖途徑的關鍵酶，當機體需要NADPH和磷酸核糖的時候，葡萄糖就會流入磷酸戊糖途徑，在3種鯻科魚類中僅在肝臟觀測到其活性．魚類的LDH為四聚體，在3種鯻科魚類各組織中廣泛存在，在心、肝、腦中活性較強．C位點僅在肝、眼等特異性組織中存在．

魚類的ME為四聚體，也可分為細胞質型(s-ME) 和線粒體型(m-ME)兩種[15]．本研究中的3種鯻科魚類ME酶譜中，位點m-Me-1在肝臟中活性最強，腦、心臟和腎次之．鯻的所有被檢測組織中都有表達，在眼中最弱，而在細鱗鯻和列牙鯻的眼中沒有檢測到其活性．s-Me-1組織特異性較強，只在肝臟中有表達．

3種鯻科魚SOD有s-Sod-1和m-Sod-1兩位點，都為二聚體．s-Sod-1在6種組織中都有檢出，肝臟活性最強，肌肉中活性最弱； m-Sod-1在肝臟中活性最強，心臟中表達最弱．

2.2遺傳多樣性

依據組織特異性分析結果選取肝臟對3種鯻科魚類8種同工酶(EST，GDH，LDH，MDH，ME，POD，SDH，SOD)進行群體遺傳結構分析．

2.2.1酯酶(Esterase，EST)EST是催化酯類化合物水解并進入中間代謝的重要酶系，認為可能與機體的解毒作用密切相關[16]．魚類的EST多為單體，一般由兩個以上的位點編碼，多態現象相當廣泛．從本實驗的EST電泳圖譜中可以看出在6個位點中，Est-3和Est-4活性最強，Est-6表達最廣．

表3　3種鯻科魚類9種同工酶的組織表達情況

注：***: 強;**: 中;*: 弱; 0: 無；xll：細鱗鯻；lyl：列牙鯻；la：鯻.

2.2.2葡萄糖脫氫酶(Glucosedehydrogenase，GDH)葡萄糖脫氫酶是磷酸戊糖途徑的關鍵酶，幫助脂肪酸和固醇合成．GDH為二聚體酶，由1個基因位點編碼．

2.2.3乳酸脫氫酶(Lactatedehydrogenase，LDH)LDH是參與糖酵解的酶，可使細胞在氧氣不足時仍能進行正常的生理活動[17]．魚類的LDH為四聚體，由A，B和C共3個位點控制，A和B兩個位點編碼的亞基能形成A4，A3B，A2B2，AB3和B45種多肽聚合體，C位點僅在肝、眼等特異性組織中存在．LDH在3種鯻科魚類各組織中廣泛存在，在心、肝、腦中活性較強．

2.2.4蘋果酸脫氫酶(Malatedehydrogenate，MDH)MDH是細胞中三羧酸循環重要的脫氫酶之一[18]．硬骨魚類的MDH分為上清液型(s-MDH) 和線粒體型(m-MDH)兩種，均為二聚體．在3種鯻科魚類的各組織中都有表達，組織間的特異性不明顯(圖7)．

2.2.5蘋果酸酶(Malicenzyme,ME)ME是生物氧化的重要酶類．魚類的ME為四聚體．本研究中的3種鯻科魚類ME酶譜中，位點Me-1在肝臟中活性最強，Me-2組織特異性較強，只在肝臟中有表達．

2.2.6過氧化物酶(Peroxidase，POD)該酶在H2O2的存在下催化一系列氧化反應．一般認為，植物的POD由一個位點控制，為單體或二聚體，近年來在魚類中的研究逐漸增多，大多認為可能由兩個位點編碼且為二聚體[18]．鯻科魚類POD酶譜可能由6個位點控制，其中Pod-2和Pod-3表達的范圍比較廣也比較穩定．在分析的6種組織中，心臟和腎臟活性最強，肝臟和腦、眼的活性次之，肌肉中不表達(圖8)．

圖7　鯻科魚類群體蘋果酸脫氫酶電泳圖Fig.7　Eelectrophorogram of MDH in species of Theraponidae

圖8　鯻科魚類群體過氧化物酶電泳圖Fig.8　Eelectrophorogram of POD in species of Theraponidae

2.2.7山梨醇脫氫酶(Sorbitoldehydrogenase，SDH)SDH與山梨醇代謝有關，除山梨醇外，還對一些糖醇的氧化有催化作用[19]．3種鯻科魚類的SDH只在肝臟中有檢出，由一個基因座位Sdh-1，2編碼(圖9)．

圖9　鯻科魚類群體山梨醇脫氫酶電泳圖Fig.9　Eelectrophorogram of SDH in species of Theraponidae

2.2.8超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)SOD能清除體內產生的氧自由基O2-，是生物體防御氧化損傷的重要酶類，為二聚體酶，有兩個基因座位編碼，可分為線粒體型和上清液型[19]．

本研究共記錄了15 個基因座位，其中呈多態性的座位有2個(Pod-2、s-Sod-1)，多態座位比例(P)為0.133，位點平均有效等位基因數(Ae)分別1.004，0.997和1.015，平均每個位點預期雜合度(He)值分別為0.068，0.066和0.045，平均每個位點實際雜合度(Ho)值分別為0.098，0.083，0.08．s-Sod-1和pod-2遺傳偏離指數(d)大于零，等位基因頻率分布偏離Hardy-Weinberg平衡，表明該位點處于雜合子過剩狀態(表4) ．

3討論

3.1組織特異性

同工酶在不同組織器官中的特異性表達是基因及其調控機制對組織功能演化的響應[17]，特異基因的表達產生了成體組織特異的同工酶，各種組織中同工酶的不同表達與各組織的代謝功能密切相關，即與特定組織的重要代謝途徑有關[18]．肝臟集消化、分泌、解毒等功能于一體，因此表達的同工酶也較豐富、復雜，試驗所選9種酶全部在肝臟表達且活性較強即可證明．

在本研究中，乙醇脫氫酶(ADH)、葡萄糖脫氫酶(GDH)和山梨醇脫氫酶(SDH)只在肝臟中檢出，說明3種鯻科魚類的的乙醇代謝、膦酸戊糖途徑和山梨醇代謝主要在肝臟中進行，這與肝臟的氧化乙醇成乙醛、脂肪酸和固醇合成、糖醇的氧化等生理功能密切相關．此外蘋果酸酶(ME)的s-Me-1位點和酯酶(EST)的多個位點僅在肝臟中表達，有明顯的組織特異性．

3.2遺傳多樣性

本研究中只發現過氧化氫酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)中存在多態位點，這可能與所選的酶比較保守和采樣范圍不夠大有關．動物的POD研究較少，魚類的POD研究僅見寡齡新銀魚、美國紅魚和褐菖鲉的研究[16, 20-21]．POD-1為一條純合的酶帶，POD-2由3個等位基因控制，在酶譜上的5條帶，其酶型分別是AA，AB，AC，BB和CC，其中AB和AC的帶明顯比其他3條帶粗．

表4　3種鯻科魚類群體基因頻率、多態位點比例(P)和平均雜合度(H)

鯻科3種魚類SOD酶譜中，僅見兩條酶帶，靠近陽極的s-Sod-1位點比m-Sod-1位點粗一倍，作者推測m-Sod-1為純合酶帶而s-Sod-1為雜合酶帶．s-Sod-1出現一條酶帶的情況可能是[16]：該位點純合子失活，以致全表現為雜合型．

多態位點比例(P)和平均雜合度(Ho)是有效反映魚類種群遺傳變異及其種質資源狀況的兩個重要參數．據統計，脊椎動物多態位點比例一般為0.15～0.3，平均雜合度一般為0.03～0.08，淡水魚類的多態位點比例為0.118～0.333，106種海水魚類的平均雜合度平均值為0.055[22-23]．本試驗得出3種鯻科魚類的多態位點比例為0.133，水平較低．平均雜合度是度量遺傳變異的最簡單、最直接、最富信息的方法，由于它與測定樣品量的大小的關系不大，因而比多態位點比例好些．3種鯻科魚類的平均雜合度分別0.098，0.083和0.08，高于106 種海水魚類的均值(0.055±0.036)，這可能與樣品s-Sod-1位點檢測全為雜合型有關[16]．結合比較上述研究報道，表明湛江海域3種鯻科魚類群體遺傳多樣性處于中等水平．

3.3同工酶分析

相對于一些DNA水平的遺傳標記，同工酶遺傳標記檢測到多態性較低，但同工酶可以確定樣本中的個體是何種基因型、純合子有多少及是何種等位基因的純合或雜合子，可用于探討基因控制個體發育的機理等方面的內容[24]．由于同工酶檢測的是基因的表達產物，檢測的位點有限，表達產物的基因在生物體的整個基因組只占極少部分，還有大量的遺傳變異未能檢測出來；此外，從基因到表達產物存在轉錄、翻譯等中間環節，同時受到自然選擇或人工選擇的影響，因而同工酶所反映的遺傳變異往往較低，同工酶數據反映的親緣關系有時可能不夠全面．因此，有必要再結合RAPD、線粒體DNA及微衛星等分子生物學技術進行更加全面的研究．

參考文獻：

[1]NELSONJS.Fishesoftheworld[M]. 3rded.NewYork:WileyPress, 1994.

[2]周佳怡，章群，唐優良，等.中國近海鯻科魚類系統發育初探[J].海洋漁業， 2010，32(4):351-355.

[3]中國科學院動物研究所,中國科學院海洋研究所,上海水產學院.南海魚類志[M].北京:科學出版社, 1962.

[4]李明德,羅陽,馬若燕.中國魚類名錄Ⅸ——魣亞目、馬鲅亞目、鱸亞目(部分)[J].海洋通報, 2003,22(2):69-75.

[5]張健東,宋蓓玲,陳剛.細鱗鯻年齡與生長的研究[J].海洋科學, 2002,26(7):62-66.

[6]趙建，陳昆慈，朱新平，等.高體革鯻肌肉營養成分的分析與評價[J].大連海洋大學學報， 2011，26(1):93-96.

[7]楊元昊，周繼術，李蕾，等.蘭州鲇不同組織同工酶及群體遺傳結構初步分析[J].淡水漁業， 2015, 45(1):25-29.

[8]向兵, 文菊華. 狼蛛體軀不同部位及不同地域、海拔高度酯酶同工酶的研究[J]. 湖南師范大學學報:醫學版, 2004,1(1):65-69.

[9]韓慶，趙東海.洞庭湖區不同體色鲇不同組織同工酶的比較研究[J].廣東農業科學， 2015，42(2)：104-107.

[10]莊軒. 斜帶石斑魚和赤點石斑魚線粒體基因組全序列研究[D]. 廈門：廈門大學, 2008.

[11]成慶泰, 鄭葆珊. 中國魚類系統檢索[M]. 北京: 科學出版社, 1987.

[12]小川和郎，中根一穗. 酶組織細胞化學技術[M]. 上海:上海醫科大學出版社, 1989:14-31.

[13]SHAKLEEJB,ALLENDORFFW,MORIZOTDC, et al.Genenomenclatureforprotein-codinglociinfish[J].TransacAmFisheriesSoc, 1990,119(1):2-15.

[14]ASSOCIATIONJFRC.Populationdifferentiationofmarineorganismbyisozymeanalysis[R].Tokyo:JapanFisheriesResourceConservationAssociation, 1989:28-209.

[15]董宏標, 陳剛, 張明輝, 等. 褐菖鲉同工酶的組織特異性及群體遺傳結構[J]. 廣東海洋大學學報, 2008,28(4):15-20.

[16]鄧思平, 劉楚吾. 赤點石斑魚 4 種同工酶的組織分布及基因位點分析[J]. 浙江海洋學院學報: 自然科學版, 2004,23(2):103-106.

[17]GUOX,LIUS,LIUY.ComparativeanalysisofthemitochondrialDNAcontrolregionincyprinidswithdifferentploidylevel[J].Aquaculture(Amsterdam), 2003,224(1-4):25-38.

[18]余祥勇, 王梅芳, 梁飛龍, 等.企鵝珍珠貝不同組織同工酶表達的差異[J]. 中國水產科學, 2005,12(2):201-206.

[19]戈志強, 宋學宏, 許愛國, 等. 紅鲌屬 3 種鲌魚同工酶的比較研究[J]. 水利漁業, 2005,25(6):23-24.

[20]林信偉,熊全沬. 寡齒新銀魚同工酶及其與幼態持續的關系[J]. 遺傳學報, 1991,18(3):214-218，289-290.

[21]鄔勇, 李明云, 范華, 等. 美國紅魚 (Sciaenops ocellatus) 鰭條組織的同工酶表達[J]. 寧波大學學報:理工版, 2005,18(4):463-466.

[22]李思發. 長江, 珠江, 黑龍江鰱, 鳙, 草魚種質資源研究[M]. 上海：上?？茖W技術出版社, 1990.

[23]徐成, 王可玲. 鱸魚群體生化遺傳學研究Ⅰ： 同工酶的生化遺傳分析[J]. 海洋與湖沼, 2001,32(1):42-49.

[24]楊潔.中華絨螯蟹體內幾種同工酶及在不同發育階段的研究[D].上海：上海師范大學， 2010.

(編輯王健)

StructureinThreeSpeciesofTheraponidae

ZHANG Jian-dong1,2*, HE Guo-qing1,CHENGang1,2, TANG Bao-gui1,2,

PAN Chuan-hao1,2, ZHOU Hui1,2, Huang Jian-sheng1,2

(1.FisheriesCollege,GuangdongOceanUniversity,Zhanjiang524025,China; 2.KeyLaboratoryofAquacultureinSouth

ChinaSeaforAquaticEconomicAnimal,RegularHighEducationInstituteofGuangdongProvince,Zhanjiang524025,China)

AbstractHorizontal starch gel electrophoresis was used to investigate the tissue-specificities of isozymes and the genetic structure of Theraponidae. 9 isozymes (ADH, EST, GDH, LDH, MDH, ME, POD, SDH and SOD) in 6 kinds of tissues (brain, eye, heart, kidney, liver and muscle) of three Theraponidae species were screened and the results showed that the screened isozymes displayed remarkable tissue-specificities. Besides, 8 enzymes from liver tissues in 40 individuals were selected for the genetic analysis. The 8 isozymes systems were encoded by 15 loci, and 2 (m-Pod-1 and s-Sod-1) of them were polymorphic. The proportion of polymorphic loci was 0.133. The average effective numbers of alleles (Ae) were 1.004(at T.jarbua)，0.997 (at T.theraps) and1.015(at P.quadrilineatus), respectively. The mean expected heterozygosities per locus (He) were 0.068, 0.066 and 0.045. The mean actual heterozygosities per locus (Ho) were 0.098,0.083 and 0.08, respectively. This result indicated that there was a middle level of genetic variation in Theraponidae.

Key wordsTheraponidae; Isozyme; tissue specificity; genetic structure

中圖分類號S917.4

文獻標識碼A

文章編號1000-2537(2015)05-0027-08

通訊作者*,E-mail：yzxzjd@126.com

基金項目：廣東省科技計劃資助項目(2006B20201003,2010B020308006)；廣東海洋與漁業科技興漁資助項目(B200601 G02)

收稿日期：2014-05-11

DOI:10.7612/j.issn.1000-2537.2015.05.005