殼聚糖修飾托氟啶納米脂質體的體外釋放試驗研究

楊 海，馬寶花，周學鋒

（山東省青島市中心醫院，山東 青島 266042）

殼聚糖修飾托氟啶納米脂質體的體外釋放試驗研究

楊 海，馬寶花，周學鋒

（山東省青島市中心醫院，山東 青島 266042）

目的 對殼聚糖修飾的托氟啶納米脂質體的體外釋放行為進行研究。方法 以托氟啶溶液為對照，采用動態膜透析法考察殼聚糖修飾托氟啶納米脂質體(TFu－SLNs)在磷酸鹽緩沖液(pH＝7．4)、人工胃液(pH＝1．2)、腸液(pH＝6．8)以及人工胃液轉腸液中的體外釋藥情況并測定其方法回收率。結果 托氟啶溶液在磷酸緩沖液、人工胃液、人工腸液釋放均符合一級速率方程，方程分別為A＝37 602 C＋160．48(r＝0．999 9)、A＝39 488 C＋1 915．3(r＝0．999 8)、A＝38 790 C－194．11(r＝0．999 3)。在人工胃液中殼聚糖修飾TFu－SLNs符合Ritger－Peppas方程，ln Q＝0．398 4 ln t＋3．135 2（r＝0．979 6）；在人工腸液及人工胃液轉腸液中中殼聚糖修飾TFu－SLNs均符合 Weibull方程，方程分別為 ln Q＝0．385 2 ln t－1．325 86（r＝0．964 5）、ln Q＝0．412 6 ln t－1．270 2（r＝0．974 6）。結論 殼聚糖修飾的TFu－SLNs可緩慢釋放藥物，且其釋放藥物的機制以藥物擴散為主。

托氟啶；殼聚糖；體外釋放度

托氟啶是阿托氟啶體內的主要代謝產物，具有明確抗腫瘤活性，化學結構穩定。托氟啶可以看作是前藥，在體內選擇性經腫瘤細胞酰胺酶轉化為5－氟尿嘧啶，最終通過抑制腫瘤DNA和RNA的生物合成起到抗腫瘤作用[1－2]。但由于該藥水中溶解度小，口服難吸收，影響其發揮抗腫瘤作用及臨床應用。將該藥制成固體納米脂質體經殼聚糖修飾后可以促進口服吸收，并通過延長在吸收部位的滯留時間而提高生物利用度[3]。筆者主要對殼聚糖修飾的托氟啶納米脂質體[4](TFu－SLNs)的體外藥物釋放進行了研究，現報道如下。

1 材料與方法

1．1 材料與儀器

托氟啶(山東大學藥學院提供)；殼聚糖（DAC95%，湖北盈荷醫藥有限公司）；大豆卵磷脂 (沈陽天峰生物制藥有限公司)；無水乙醚 (深圳華麗源化工有限公司)；硬脂酸聚烴氧(40)酯(美國Sigma公司)；甲醇和乙腈(色譜純，德國Merck公司)；氯仿、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀等試劑均為分析純。PHS－3C型精密pH計(上海雷磁儀器廠)；LABOROTA4000－efficient型旋轉蒸發儀(德國Heidoph公司)；NS1001L型高壓勻質機(意大利Niro－Soaro公司)；高效液相色譜儀(Waters公司)；ZETASIZER3000型粒度分布與電勢分析儀(英國Malvern公司)；BP121S型電子天平（Sartorius公司)；JY－92－Ⅱ型超聲波細胞粉碎機(寧波新芝科器研究所)；TU1810型紫外－可見分光光度計（中國普析通用儀器有限公司）。

1．2 方法

1．2．1 色譜條件

色譜柱：安捷倫C18柱；流動相：甲醇－水(60∶40)；柱溫：25℃；流速：0．5 mL／min；進樣量：10 μL。

1．2．2 不同釋放介質中標準曲線繪制

取適量托氟啶標準液(質量濃度為10．0 g／L)分別加入磷酸緩沖液（pH＝7．4）、人工胃液（pH＝1．2）、人工腸液(pH＝6．8)后，配制成終質量濃度均為0．1 g／L的3種貯備液，加適量注射用水分別稀釋至濃度為1．0，2．0，4．0，6．0，8．0，10．0 μg／mL的3種系列溶液，用前過0．22 μm微孔濾膜。采用高效液相色譜(HPLC)法，以峰面積對溶液質量濃度進行線性回歸，得不同釋放介質的標準曲線。

1．2．3 不同釋放介質中托氟啶的回收率

在磷酸緩沖液、人工胃液、人工腸液中分別加入一定量托氟啶溶液后，用注射用水進一步稀釋成質量濃度分別為1．0，6．0，10．0 μg／mL的溶液，用HPLC法測定峰面積（色譜條件同方法1．2．1），計算托氟啶的質量濃度，測算回收率。

1．2．4 體外釋放度測定

采用動態膜透析法[5]進行殼聚糖修飾的TFu－SLNs體外釋藥試驗。取一定量殼聚糖修飾TFu－SLNs，用磷酸緩沖液稀釋后透析。對照溶液質量濃度為0．1 g／L的托氟啶溶液。透析條件為轉速50 r／min、溫度30℃、釋放介質體積200 mL，分別于5 min，10 min，20 min，40 min，1 h，1．5 h，2 h，2．5 h，4 h，6 h，8 h，12 h，24 h，48 h時從釋放介質中取2 mL，同時向釋放介質中補充等量磷酸緩沖液。托氟啶進入釋放介質的量采用HPLC法進行測定（色譜條件同1．2．1項），計算釋藥百分比。在進行人工胃液轉腸液體外釋放度測定中，模擬藥物在體內吸收過程，開始2 h人工胃液作為釋放介質，后轉為人工腸液。

2 結果

2．1 標準曲線繪制

高效液相色譜法測定系列托氟啶溶液在磷酸緩沖液、人工胃液、人工腸液中含量時分別以藥物質量濃度（C）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標進行線性回歸，得托氟啶在磷酸緩沖液、人工胃液、人工腸液中的標準曲線方程分別為 A＝37 602 C＋160．48(r＝0．999 9)，A＝39 488 C＋1 915．3(r＝0．999 8)，A＝38 790 C－194．11(r＝0．999 3)。結果顯示，在3種不同釋放介質中托氟啶質量濃度在1～10 μg／mL范圍內與峰面積線性關系良好。

2．2 托氟啶回收率

按照1．2．2項下試驗方法測定，計算藥物回收率，結果見表1至表3?？梢?，托氟啶在磷酸緩沖液、人工胃液、人工腸液中測定方法回收率均符合要求。

表1 托氟啶在磷酸緩沖液(pH＝7．4)中的回收率測定結果

表2 托氟啶在人工胃液(pH＝1．2)中的回收率測定結果

表3 托氟啶在人工腸液(pH＝6．8)中的回收率測定結果

2．3 體外釋放度

托氟啶和殼聚糖修飾托氟啶納米脂質體在不同釋放介質中的累積釋藥百分率見圖1至圖3。

圖1 人工胃液中累積釋藥百分率

圖2 人工腸液中累積釋藥百分率

圖3 人工胃液轉腸液中累積釋藥百分率

2．4 釋藥數學模型構建

將托氟啶溶液和殼聚糖修飾托氟啶固體納米脂質體在不同釋放介質中藥物釋放情況進行數學模型構建，結果如下：

在人工胃液中，托氟啶溶液釋藥模型符合一級速率方程 ln(100－Q)＝－0．673 8t＋4．123 8（r＝0．993 5）；殼聚糖修飾托氟啶固體納米脂質體釋藥模型符合Ritger－Peppas方程 ln Q＝0．398 4 ln t＋3．135 2（r＝0．979 6）。結果可見，殼聚糖修飾托氟啶納米脂質體可以緩慢釋放藥物。

在人工腸液中，托氟啶溶液釋藥模型符合一級速率方程 ln(100－Q)＝－0．642 8t＋4．189 6（r＝0．983 6）；殼聚糖修飾托氟啶固體納米脂質體釋藥模型符合Weibull方程lnQ＝0．385 2 lnt－1．325 86（r＝0．964 5）。結果可見，殼聚糖修飾托氟啶納米脂質體可以緩慢釋放藥物。

在人工胃液轉腸液中，托氟啶溶液釋藥模型符合一級速率方程 ln(100－Q)＝－0．964 2 t＋4．325 8（r＝0．988 6）；殼聚糖修飾托氟啶固體納米脂質體釋藥模型符合 Weibull方程 ln Q＝0．412 6 ln t－1．270 2（r＝ 0．974 6）。結果可見，殼聚糖修飾托氟啶納米脂質體可以緩慢釋放藥物。

3 討論

體外研究結果表明，將水溶性較差的托氟啶制成納米脂質體，可以有效延長藥物釋放時間，同時能長時間維持較高濃度，達到緩釋作用。本研究中發現，在不同的釋放介質中殼聚糖修飾托氟啶固體納米脂質體與托氟啶溶液相比具有明顯的緩釋作用，但在不同的釋放介質中緩釋效果不同。在人工胃液環境中，由于胃酸的作用藥物釋放較快。但是考慮到人體生理條件下藥物在胃中滯留時間較短，本試驗中采用人工胃液轉腸液方法模擬了藥物口服進入體內吸收過程。

將托氟啶及其經修飾的固體納米脂質體的釋放情況構建數學模型，結果發現，托氟啶溶液在3種不同釋放介質中均按照一級速率釋放。殼聚糖修飾托氟啶固體納米脂質體在仍人工胃液中釋放符合Ritger－Peppas方程[6]，在人工腸液和人工胃液轉腸液中釋放符合Weibull方程[7]，均體現了緩釋功能。將藥物做成脂質體后其釋放過程有很多方式，如納米粒表面溶蝕降解、整體崩解、骨架擴散、解離擴散、水合膨脹及解吸附等。從殼聚糖修飾的托氟啶納米脂質體在體外的擴散系數可知，其釋藥機制以藥物擴散為主。

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In Vitro Drug Release Test of Chitosan M odified TFu－SLNs

Yang Hai,Ma Baohua,Zhou Xuefeng
(Qingdao Central Hospital,Qingdao,Shandong,China 266042)

Objective To study the in vitro drug release of chitosan modified N3－O－toluyl－flulorouracil(TFu)Solid Lipid Nanoparticles(SLNs)．M ethods The released kinetics of chitosan modified TFu－SLNs in vitro of different media,such as the phosphate buffer solution(pH＝7．4),artificial gastric juice(pH＝1．2),artificial intestinal juice(pH＝6．8),and artificial gastric juice followed by aritifical intestinal juice,were studied by dynamic dialysis system using TFu solution as control．The recovery rate of the method was determinated in different media．Results In case of solution,all the release profiles of TFu could be described by first order kinetics model and could be expressed by the following equations:A＝37 602 C＋160．48(r＝0．999 9),A＝39 488 C＋1 915．3(r＝0．999 8), A＝38 790 C－194．11(r＝0．999 3),respectively．In artificial gastric juice,the in vitro release behavior of chitosan modified TFu－SLNs could be expressed by the Ritger－Peppas equations:lnQ＝0．398 4 ln t＋3．135 2(r＝0．979 6)．In artificial intestinal juice and artificial gastric juice followed by aritifical intestinal juice,the TFu release behavior of chitosan modified TFu－SLNs in vitro were both in accord with Weibull model:ln Q＝0．385 2 ln t－1．325 86(r＝0．964 5)ln Q＝0．412 6 ln t－1．270 2(r＝0．974 6)．Conclusion Chitosan Modified TFu－SLNs can release the drug slowly,and the drug release mechanism is dominated by drug diffusion．

N3－O－toluyl－flulorouracil(TFu);chitosan;invitro release

R965；R979．1

A

1006－4931(2016)09－0012－03

楊海，男，博士研究生，主要從事醫院藥劑科工作，（電子信箱）qdzx08＠163．com。

2015－05－07；

2015－09－25)